【摘要】：腦卒中是人類致殘、致死的主要病因之一。在我國(guó),腦卒中是第一位的致死因素,2013年的數(shù)據(jù)表明:中風(fēng)造成我國(guó)70歲以上人群200萬人的死亡,而在49歲以下人群,中風(fēng)也是導(dǎo)致死亡的主要原因之一。急性缺血性卒中是最多見的卒中類型,約占患者總數(shù)的80%。腦缺血后會(huì)引發(fā)一系列的病理生理及生化反應(yīng),如乳酸堆積、自由基釋放、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、興奮性氨基酸中毒、炎性過程及凋亡等,稱為腦缺血的瀑布級(jí)聯(lián)反應(yīng)。其中炎性反應(yīng)在腦缺血損傷的發(fā)展過程中的扮演著重要角色。腦缺血誘導(dǎo)炎性因子大量產(chǎn)生,引起急性炎癥反應(yīng),加重患者腦損害。糖皮質(zhì)激素類藥物具有快速而強(qiáng)大的抗炎作用。既往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,糖皮質(zhì)激素類藥物可以降低腦缺血所致的腦損害,是一種潛在的神經(jīng)保護(hù)劑。早期的臨床實(shí)驗(yàn)也證實(shí)應(yīng)用糖皮質(zhì)激素類藥物能夠降低缺血性卒中患者的死亡率,改善患者神經(jīng)功能。然而,在此后的多個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)中,糖皮質(zhì)激素類藥物未表現(xiàn)出神經(jīng)保護(hù)作用,甚至有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),生理劑量糖皮質(zhì)激素會(huì)加重腦缺血大鼠的神經(jīng)損害。目前,對(duì)于糖皮質(zhì)激素類藥物在缺血性卒中治療上的價(jià)值存在爭(zhēng)議。分析既往實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):大劑量糖皮質(zhì)激素類藥物對(duì)腦缺血多具有顯著的治療作用,而生理劑量則多無效,甚至加重神經(jīng)損害;治療有效的實(shí)驗(yàn),給藥時(shí)間多在腦缺血之前或缺血后立即給藥。由此推測(cè):糖皮質(zhì)激素類藥物對(duì)腦缺血的治療作用呈明顯的時(shí)間-劑量依賴關(guān)系,即梗死早期大劑量糖皮質(zhì)激素類藥物治療能夠產(chǎn)生顯著的神經(jīng)保護(hù)作用。本研究利用大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型,給予大劑量地塞米松,對(duì)地塞米松治療缺血性卒中的時(shí)間依賴性及其機(jī)制進(jìn)行了探討。大劑量地塞米松治療會(huì)造成藥物副作用的增加,而嚴(yán)格的治療時(shí)間窗必然會(huì)限制藥物的臨床應(yīng)用。與傳統(tǒng)的經(jīng)靜脈給藥相比,經(jīng)動(dòng)脈給藥治療,藥物直達(dá)病變組織,不經(jīng)肝臟代謝,避免了藥物的“首過效應(yīng)”,不但可以獲得更高的局部藥物濃度,并且由于藥物作用集中在給藥部位,減少了藥物的全身毒、副作用。再者,由于藥物直達(dá)病變部位,避免了藥物經(jīng)血液循環(huán)到達(dá)病變部位的時(shí)間延遲,經(jīng)動(dòng)脈給藥縮短了藥物在局部達(dá)到治療濃度所需的時(shí)間,為缺血性卒中的治療爭(zhēng)取了寶貴的“時(shí)間窗”。經(jīng)動(dòng)脈藥物灌注可以很好地解決地塞米松的治療劑量大和治療時(shí)間窗狹窄的問題。在進(jìn)一步的研究中,利用改進(jìn)的經(jīng)動(dòng)脈藥物灌注方法,探究了經(jīng)動(dòng)脈地塞米松灌注對(duì)地塞米松治療時(shí)間窗和治療劑量的影響。第一部分大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型基礎(chǔ)上的經(jīng)動(dòng)脈藥物灌注方法改進(jìn)目的:改進(jìn)經(jīng)動(dòng)脈藥物傳輸方法,建立適用于經(jīng)動(dòng)脈藥物灌注研究的大鼠缺血性卒中模型。方法:經(jīng)動(dòng)脈藥物灌注微管裝置的制作:用環(huán)氧化物膠包裹的1mm長(zhǎng)的尼龍線(外徑:0.181 mm)堵塞的PE-0402管(長(zhǎng)約50mm)的一端。在距離PE-0402管被堵塞端2mm處的側(cè)壁做1mm長(zhǎng)的縱行切口,作為藥物的輸出口。經(jīng)頸外動(dòng)脈插入微管裝置,使其頭端堵塞到達(dá)大腦中動(dòng)脈開口,在選定的時(shí)間點(diǎn),使用微管裝置,經(jīng)頭端縱行切口向動(dòng)脈傳輸藥物,使用一個(gè)微管裝置,同時(shí)達(dá)到閉塞大腦中動(dòng)脈和經(jīng)動(dòng)脈藥物傳輸?shù)哪康�。為檢驗(yàn)微管裝置誘導(dǎo)局灶腦缺血的能力,利用廣泛使用的線栓(線栓組)和自制的微管裝置(微管組)分別建立大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型,建模后24h,比較兩組大鼠的神經(jīng)缺損評(píng)分和腦梗死的體積。為檢驗(yàn)改進(jìn)方法的藥物傳輸能力,對(duì)比了原有經(jīng)動(dòng)脈藥物傳輸方法(PE-10組)與改進(jìn)方法(microcatheter device組)的藥物傳輸效率。大腦中動(dòng)脈閉塞模型建立后2h,通過不同方法向模型大鼠灌注等量伊文斯藍(lán)溶液。灌注后4h,利用分光光度法檢測(cè)不同組別大鼠梗死半球的伊文斯藍(lán)滲出量。結(jié)果:模型建立后24h,線栓組和微管組大鼠的神經(jīng)缺損評(píng)分相當(dāng),兩組大鼠腦梗死的體積差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。伊文斯藍(lán)灌注后4h,microcatheter device組大鼠梗死半球的伊文斯藍(lán)的滲出量為35.9±7.7μg/g,顯著高于PE-10組(17.7±4.4μg/g)。結(jié)論:1.本研究改進(jìn)了大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型基礎(chǔ)上的經(jīng)動(dòng)脈藥物灌注方法,使用同一微管裝置同時(shí)達(dá)到閉塞大鼠大腦中動(dòng)脈和經(jīng)動(dòng)脈藥物灌注的目的;2.微管裝置誘導(dǎo)大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞的能力與廣泛使用的線栓相當(dāng),其藥物傳輸效能較已有方法更高;3.使用微管裝置的動(dòng)脈給藥方法造模更簡(jiǎn)單、梗死更穩(wěn)定,并且可適用于不同研究策略:藥物傳輸可以在缺血-再灌注之前也可以在缺血-再灌注之后,可以用于缺血-再灌注模型的經(jīng)動(dòng)脈藥物傳輸研究,也可以用于永久梗死模型的相關(guān)研究。第二部分大劑量地塞米松對(duì)大鼠腦缺血-再灌注模型的神經(jīng)保護(hù)作用研究目的:研究大劑量地塞米松對(duì)缺血性卒中的治療效果并探索其治療時(shí)間窗及機(jī)制。方法:線栓法建立大鼠腦缺血-再灌注模型,在建模后不同時(shí)間點(diǎn)(30min、60min、120min),經(jīng)靜脈給予10mg/kg地塞米松。在缺血腦組織再灌注后48h,比較不同組別大鼠的神經(jīng)缺損評(píng)分和腦梗死體積,探索大劑量地塞米松治療缺血性卒中的療效及時(shí)間依賴性。為進(jìn)一步探究地塞米松治療缺血性卒中的機(jī)制,利用免疫組織化學(xué)、Western blot和ELISA等檢測(cè)手段,比較了不同時(shí)間點(diǎn)(30min、60min)給藥對(duì)NF-k B激活及炎性因子(TNF-α、IL-1β、COX-2、i NOS)表達(dá)的影響。結(jié)果:30min給藥組大鼠的神經(jīng)缺損評(píng)分(1.9±0.7)和梗死體積(20.4±6.1%),較梗死對(duì)照組明顯降低。60min組、120min組大鼠的神經(jīng)缺損評(píng)分和梗死體積與梗死對(duì)照組相當(dāng)。免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果顯示,大腦中動(dòng)脈閉塞后30min給予大劑量地塞米松,能夠顯著降低海馬區(qū)NF-k B p65的表達(dá)。Western blot發(fā)現(xiàn)大腦中動(dòng)脈閉塞后2h,梗死周邊區(qū)NF-k B p65、p-p65表達(dá)量一過性增高,而在大腦中動(dòng)脈閉塞后30min給予大劑量地塞米松,能夠顯著抑制梗死周邊區(qū)的NF-k B p65、p-p65表達(dá)增加,減少炎性因子(COX-2、i NOS)產(chǎn)生。ELISA發(fā)現(xiàn),大腦中動(dòng)脈堵塞后30min給予大劑量地塞米松顯著降低了梗死周邊區(qū)促炎因子(TNF-α、IL-1β)的水平。結(jié)論:1.大劑量地塞米松治療對(duì)腦缺血-再灌注大鼠模型有神經(jīng)保護(hù)作用,并且具有嚴(yán)格的治療時(shí)間窗;2.大劑量地塞米松對(duì)腦缺血-再灌注大鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用與地塞米松抑制NF-k B激活從而減少炎性因子的產(chǎn)生相關(guān)。第三部分經(jīng)動(dòng)脈灌注地塞米松對(duì)大鼠腦缺血-再灌注模型的神經(jīng)保護(hù)作用研究目的:探討經(jīng)動(dòng)脈給藥對(duì)地塞米松的治療劑量和治療時(shí)間窗的影響。方法:利用微管裝置建立大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型,分別在模型建立后30min和60min,按照不同劑量(10mg/kg或者2mg/kg),經(jīng)不同方式(經(jīng)靜脈或者經(jīng)動(dòng)脈)給予地塞米松或安慰劑。腦缺血-再灌注后48h,比較不同組別大鼠的神經(jīng)缺損評(píng)分、運(yùn)動(dòng)功能(前肢錯(cuò)誤放置測(cè)試、平行棒測(cè)試、攀繩測(cè)試)及梗死體積。結(jié)果:大腦中動(dòng)脈閉塞后60min,經(jīng)動(dòng)脈小劑量地塞米(2mg/kg)松灌注能夠顯著改善腦缺血-再灌注大鼠模型的神經(jīng)缺損評(píng)分,提高其運(yùn)動(dòng)能力,減小梗死體積。其治療效果與大腦中動(dòng)脈閉塞后30min,經(jīng)靜脈大劑量地塞米(10mg/kg)治療相當(dāng)。結(jié)論:經(jīng)動(dòng)脈地塞米松灌注可以擴(kuò)展地塞米松治療缺血性卒中的時(shí)間窗,減少總的藥物用量。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3;R-332

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