發(fā)布時間：2018-11-22 19:40

【摘要】：研究背景： 惡性膠質(zhì)瘤高達5/10萬的患病率，使其在世界范圍內(nèi)仍是一個難題，其中美國每年新發(fā)現(xiàn)的患病人數(shù)高達14000例，我國每年可達55000左右，且近年統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明惡性膠質(zhì)瘤發(fā)病率呈增長態(tài)勢。其中膠質(zhì)母細胞瘤的比例占到惡性膠質(zhì)瘤的60-70%。雖然各種先進的設備、技術的應用給腫瘤治療帶了福音，但是惡性膠質(zhì)瘤死亡率仍無下降走勢，有效降低惡性膠質(zhì)瘤的死亡率仍然是世界性的研究熱點，因次探究有效地治療措施以提高惡性膠質(zhì)瘤的臨床控制率勢在必行。 近幾年研究顯示，真核生物mRNA轉(zhuǎn)錄、翻譯成蛋白質(zhì)的過程中翻譯起始因子eIFs是起關鍵作用的一類蛋白分子，其中eIF4E作為治療惡性腫瘤的靶向目標日益受到重視。mRNA轉(zhuǎn)錄、翻譯成蛋白質(zhì)是一個基本的過程，但是有合理的控制系統(tǒng)，主要控制發(fā)生在起始階段。在真核細胞中，eIF4F復合物由eIF4E、eIF4A以及eIF4G共同組成，啟動具有5'帽子結(jié)構的mRNA的翻譯過程。 eIF4E結(jié)合蛋白（eIF4Ebinding proteins,4E-BPs）控制著eIF4F復合物能否成功裝配。4E-BPs的磷酸化水平是其與eIF4E結(jié)合的關鍵，PTEN/PI3K/AKt/mTOR信號轉(zhuǎn)導通路在4E-BPs的磷酸化過程中起主導作用，同時需要mTOR對氨基末端RAIP基序和羧基末端TOS基序的識別。RAIP基序具有識別4E-BP2氨基末端以及羧基末端磷酸化位點的功能，，而S65以、T70以及雷帕霉素的磷酸化敏感位點由TOS基序識別。綜上所述，我們考慮同時剔除RAIP和TOS基序能夠抑制4E-BP2被磷酸化，進而阻止eIF4F復合物的組合，從而抑制腫瘤細胞的生長并且促進凋亡。 中醫(yī)藥是祖國醫(yī)學的“瑰寶”，也是腫瘤防治研究的一個重要領域。近年來研究顯示中草藥藏紅花（Crocus sativus L, Saffron）的有效成分藏紅花素（Crocin）對多種腫瘤細胞具有明顯的抗癌活性，且?guī)缀跷窗l(fā)現(xiàn)正常組織細胞生理功能受到影響，有望成為一種新型的天然抗癌藥物[56,57]。目前有關藏紅花素對膠質(zhì)瘤的抗瘤作用及機制研究，國際上尚未見相關報道，國內(nèi)僅有個別報道[50]。實驗目的： 刪除4E-BP1cDNA、4E-BP2cDNA中的RAIP和TOS基序編碼序列，構建真核表達載體，其中4E-BP1作為備用。在此基礎上，從分子生物學水平探索截短型4E-BP2對大鼠膠質(zhì)瘤細胞C6的細胞增殖、凋亡的影響以及相關蛋白的表達情況；探索藏紅花素對大鼠C6膠質(zhì)瘤細胞生長及對凋亡蛋白抑制因子Livin和Survivin表達的影響。實驗方法及結(jié)果 ⑴用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應和分子克隆技術構建截短型4E-BP1、4E-BP2的真核表達載體，并且利用雙酶切以及測序的方法鑒定其正確性。結(jié)果顯示插入序列與設計序列一直。 ⑵通過MTT法和碘化丙啶（PI）標記流式細胞術檢測細胞增值能力。結(jié)果表明：短型4E-BP2能夠抑制大鼠膠質(zhì)瘤細胞C6的增殖。 ⑶倒置顯微鏡和Hoehst熒光染色觀察細胞形態(tài)的變化和凋亡情況；結(jié)果表明：藏紅花素對膠質(zhì)瘤C6細胞的增殖具有抑制作用。 ⑷通過流式細胞術以及透射電鏡檢測細胞凋亡水平。結(jié)果表明：截短型4E-BP2能夠促進大鼠膠質(zhì)瘤細胞C6的凋亡。 ⑸通過Western blot方法檢測相關蛋白表達水平。結(jié)果表明:截短型4E-BP2能夠抑制C6中腫瘤相關蛋白的表達；藏紅花素能夠下調(diào)Survivin和Livin蛋白的表達。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.4

【參考文獻】

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2 徐慧娟;仲任;趙艷霞;李學榮;盧愿;宋愛琴;龐秀英;姚如永;孫立榮;;藏紅花素對HL-60細胞增殖抑制和誘導凋亡作用及其機制[J];中國實驗血液學雜志;2010年04期

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本文編號：2350339