發(fā)布時間：2018-11-06 16:11

【摘要】：目的:世界衛(wèi)生組織癌癥研究中心2002年的統(tǒng)計,我國胃癌發(fā)病率全球居第二位。胃癌(Gastric carcinoma)患者多數(shù)就診時已是晚期,失去手術機會,且胃癌異質性強,所以胃癌預后差,已成為全球第2大腫瘤死因。目前晚期胃癌缺乏標準化的治療,化療成為主要治療方法,然而化療的療效已經達到瓶頸,聯(lián)合分子靶向藥物可以提高客觀緩解率,然而化療聯(lián)合分子靶向藥物的用藥時序尚無明確定論。尤其是抗血管生成藥物在臨床應用以較成熟。貝伐珠單抗(Bevacizumab)是一種重組的人源化單克隆抗體,主要是通過選擇性與人血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)結合,抑制VEGF下游通路,從而通過抑制內皮細胞增生和新生血管形成來延緩腫瘤的生長和轉移。與化療藥物聯(lián)用時,可以通過改變腫瘤血管的微環(huán)境、血管內皮細胞及血管生成,增加腫瘤內藥物濃度,達到增敏的效果。本課題旨在研究貝伐珠單抗(Bevacizumab)聯(lián)合FP方案(氟尿嘧啶(5-Fluorouracil)加順鉑(Cisplatin))化療方案不同給藥時序對熒光酶基因標記的胃腺癌(MGC-803)細胞y|鼠模型腫瘤生長的影響,為臨床上貝伐單抗聯(lián)合FP方案(氟尿嘧啶5-Fluorouracil加順鉑Cisplatin))給藥時序提供理論依據(jù)。方法:1細胞培養(yǎng)及裸鼠模型的建立對熒光酶基因標記的胃腺癌(MGC-803)細胞進行傳代培養(yǎng),收集對數(shù)生長期的熒光酶基因標記的胃腺癌(MGC-803)細胞,調整細胞濃度為2.5×107個/m L,每只BALB/c裸鼠左側肋腹部皮下接種0.2 m L,制作裸鼠胃腺癌模型。2隨機分組25只裸鼠隨機分為5組,每組5只。A組為空白對照組(生理鹽水)、B組為貝伐珠單抗(Bevacizumab)組(Bev:4mg/kg/d,d1、4每3天腹腔注藥21天)、C組為貝伐珠單抗給藥前24h給予FP方案(5-FU:20mg/Kg DDP:1 mg/kg d1、4每3天腹腔給藥,Bev:4mg/Kg d2、5每3天腹腔給藥;21天)、D組為貝伐珠單抗給藥同時給予FP方案(Bev:4mg/Kg、5-FU:20mg/Kg、DDP:1 mg/kg d1、4,每3天腹腔給藥,21天)、E組為貝伐珠單抗給藥后24h應用FP方案(Bev:4mg/Kg d1、4每3天腹腔給藥;5-FU:20mg/Kg DDP:1 mg/kg d2、5每三天腹腔給藥,21天)。3抑瘤結果評定為動態(tài)觀察移植腫瘤的生長情況,利用熒光活體成像系統(tǒng)對其進行活體光學成像,記錄腫瘤體積及熒光值(測量基線值后每隔7天間斷測量)。游標卡尺進行測量腫瘤的長徑和短徑(測量基線值后每隔2天間斷測量),用藥結束后,采用吸入水合氯醛處死小鼠,根據(jù)LI%=(對照組腫瘤質量-治療組腫瘤質量)/(空白組腫瘤質量)*100%計算抑瘤率。4病理組織技術首先通過HE染色確定為胃腺癌組織,通過免疫組化的方法確定VEGF-A、MVD及Bax在腫瘤組織的表達情況。5統(tǒng)計方法腫瘤體積、熒光值、抑瘤率、VEGF-A、MVD和Bax符合正態(tài)性分布,MVD、Bax、VEGF-A懫用單因素方差分析(One-way ANOVA),LSD進行兩兩比較。裸鼠體積及熒光值,采取重復測量設計資料的方差分析、多個樣本均數(shù)比較的方差分析,以P0.05為有統(tǒng)計學差異。結果:1成瘤率接種7天后,25只裸鼠左側肋腹部均可觸及0.8cm左右的腫瘤。成瘤率:100%。2腫瘤體積及熒光值的變化2.1腫瘤體積(cm3)基線值及治療后變化(Fig.1):藥物處理前移植瘤體積,A組:(0.122±0.021)cm3、B組:(0.119±0.020)cm3、C組:(0.114±0.027)cm3、D組:(0.115±0.011)cm3、E組:(0.116±0.024)cm3,各組間未見顯著統(tǒng)計學差異(P=0.975)。在3-21天測量過程中,對d8、d15、d22所得數(shù)據(jù)進行連續(xù)測量分析:對照組較治療組均存在統(tǒng)計學差異(P值0.01);聯(lián)合用藥組較單藥組存在統(tǒng)計學差異(P0.01);E移植瘤體積與C、D組有明顯統(tǒng)計學差異(P0.001)。C、D組未見統(tǒng)計學差異(P0.05)。(Fig.4)2.2腫瘤熒光值基線值及治療后變化腫瘤熒光值基線值A組:(57784±2145)p/sec、B組:(60354±2422)p/sec、C組:(58335±1956)p/sec、D組:(59425±2145)p/sec、E組:(58778±2011)p/sec,各組間未見顯著統(tǒng)計學差異(P=0.843)。在7-22天治療過程中,對d8、d15、d22所得數(shù)據(jù)進行連續(xù)測量分析:對照組較治療組均存在統(tǒng)計學差異(P值0.01);聯(lián)合用藥組較單藥組存在統(tǒng)計學差異(P0.001);E熒光值與C、D組有明顯統(tǒng)計學差異(P0.001);C、D組未見統(tǒng)計學差異(P0.05)(Fig.3)。病理學驗證:治療過程中第1-14天,各組腫瘤體積和熒光值均逐漸增大,第15-21天,聯(lián)合用藥組腫瘤體積變化不明顯,熒光值下降。獲得瘤組織后,經HE染色證實存在大片壞死瘤組織(Fig.2)。3瘤體重量及抑瘤率結果A:(1.840±0.041)g、B:(1.503±0.042)g、C:(1.207±0.051)g、D:(1.159±0.112)g、E:(0.986±0.123)g,相較于對照組,B、C、D、E組的抑瘤率分別為18.31%,34.4%、37.01%及46%(Fig.8)。單因素方差分析示存在組間差異(P0.001)。兩兩比較:單藥組抑瘤率均低于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組抑瘤率顯著高于C、D組。C、D組未見明顯統(tǒng)計學差異(P=0.342)(Table1)。4免疫組化結果分析4.1 VEGF-A(Fig.5)表達率(%)A:91.15±3.30;B:60.19±4.30C:48.15±3.20,D:46.15±3.60;E:33.15±3.81;單因素方差分析示存在組間差異(P0.05),兩兩比較:對照組VEGF-A表達率顯著高于治療組(P0.01);單藥組VEGF-A表達率顯著高于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組顯著低于C、D組(P0.01)。C、D組未見明顯統(tǒng)計學差異(P=0.732)。4.2 MVD(Fig.7)分別為A:13.8±1.32;B:7.9±1.23;C:6.4±1.28;D:6.5±1.24;E:4.0±1.20。單因素方差分析示存在組間差異(P0.05),兩兩比較:對照組MVD顯著高于治療組(P0.01);單藥組顯著高于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組MVD顯著低于C、D(P0.01)。C、D組未見明顯統(tǒng)計學差異(P=0.843)。4.3 Bax(Fig.6)的表達率LI為:A:45.51±4.67%;B:60.26±4.48%;C:72.35±5.3%4;D:75.24±2.95%;E:90.26±2.53%。單因素方差分析示存在組間差異(P0.05),兩兩比較:對照組顯著低于治療組(P0.01);單藥組Bax的表達率顯著低于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組顯著高于C、D組(P0.01)。C、D組未見明顯統(tǒng)計學差異(P=0.754)。結論:1應用貝伐單抗24h后給予FP方案對抑瘤作用優(yōu)于同時給藥組及貝伐單抗24h前給予FP方案治療組。2貝伐單抗24h后給予FP方案抑瘤作用較其他聯(lián)合方式抑瘤率高,可能是進一步降低了VEGFA,減少了新生血管生成,并增加了BAX表達。3在抗血管生成藥物應用中,腫瘤體積可能并不能真實表現(xiàn)腫瘤對藥物的反應。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742

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本文編號：2314791