【摘要】：目的：癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)中一種常見的綜合征，可發(fā)生于各個年齡階段的人群，流行病學調(diào)查顯示：全世界大約有5000萬癲癇患者，我國的癲癇患病率為3.5‰-4.8‰。癲癇具有反復發(fā)作的特點，其病理生理基礎是腦部神經(jīng)元高度同步化異常放電導致正常的生理功能紊亂。短暫的反復發(fā)作或者一次持續(xù)發(fā)作均可導致嚴重的神經(jīng)元凋亡,尤其是海馬等邊緣系統(tǒng)的神經(jīng)元凋亡更為明顯。研究表明，神經(jīng)元凋亡和神經(jīng)膠質(zhì)細胞增多能夠促使海馬硬化，海馬硬化導致癲癇頻繁發(fā)作甚至形成難治性癲癇。因此，深入研究癲癇發(fā)作后神經(jīng)元凋亡的分子機制，探索新型有效的抗神經(jīng)元凋亡的藥物具有深遠的意義。 本實驗以杏仁核電點燃的慢性癲癇大鼠模型作為研究對象，以α-硫辛酸（α-lipoic acid,α-LA）作為干預劑。分別檢測大鼠點燃前后的后發(fā)放閾值（ADT)，達到每個發(fā)作等級所需的累積刺激數(shù)及累積后發(fā)放持續(xù)時間(ADD)，應用Western Blot方法檢測p38MAPK及p-p38MAPK在海馬組織中的表達情況，應用流式細胞分析碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色技術檢測海馬神經(jīng)元凋亡率。從而研究α-LA對杏仁核電點燃癲癇大鼠的行為及海馬p38MAPK表達的影響，并初步探討α-LA對杏仁核電點燃致癇大鼠的腦保護作用及分子機制。 方法：選用雄性健康清潔的Wistar大鼠36只，體重在250-300g之間。隨機分為正常對照組:不予以任何處理；α-LA組：每天給予α-LA（40mg/kg）腹腔注射一次；假手術組：杏仁核植入電極后不予以任何處理；電刺激模型組：植入電極后每天給予120%的點燃前ADT刺激一次；電刺激+α-LA低劑量組：植入電極后每天給予α-LA （20mg/kg）腹腔注射30min后以120%的點燃前ADT刺激一次；電刺激+α-LA高劑量組：植入電極后每天給予α-LA （40mg/kg）腹腔注射30min后以120%的點燃前ADT刺激一次，連續(xù)刺激15天，每組6只大鼠。依據(jù)Racine六級評價標準觀察大鼠的行為學表現(xiàn)，記錄大鼠每天的發(fā)作等級及ADD。造模結(jié)束后對大鼠采用斷頭取腦并快速分離海馬組織，用Western Blot方法檢測p38MAPK及p-p38MAPK的表達水平，并用流式細胞術PI染色技術檢測海馬神經(jīng)元凋亡率。 結(jié)果： 1.行為學觀察①達到第一次Ⅴ級發(fā)作所需的累積電刺激數(shù)：與模型組（10.17±0.31）相比，電刺激+α-LA高劑量組（11.50±0.43）明顯增多（P0.05）；電刺激+α-LA低劑量組（11.17±0.31）與模型組和電刺激+α-LA高劑量組相比差異無統(tǒng)計學意義（P0.05)。②達到第一次Ⅴ級發(fā)作所需的累積ADD：與模型組（235.83±5.00）相比，電刺激+α-LA低劑量組（191.17±5.82）和電刺激+α-LA高劑量組（184.83±7.60）明顯縮短（P0.05）；電刺激+α-LA高劑量組與電刺激+α-LA低劑量組相比差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。③點燃前后的ADT：模型組點燃后的ADT（133.33±12.29）較點燃前（273.33±24.59）明顯降低（P0.05）；電刺激+α-LA高劑量組點燃后的ADT（200.00±17.13）較點燃前（286.67±22.31）明顯降低（P0.05）；電刺激+α-LA低劑量組點燃后ADT（153.33±19.78）較點燃前（280.00±30.55）明顯降低（P0.05）。④點燃后ADT：與模型組相比，電刺激+α-LA高劑量組明顯增高（P0.05）；電刺激+α-LA低劑量組與模型組和電刺激+α-LA高劑量組相比差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。假手術組、正常對照組、α-LA組大鼠均無癲癇發(fā)作。 2.Western Blot檢測結(jié)果假手術組、正常對照組、α-LA組的海馬組織內(nèi)p-p38MAPK表達水平分別為0.55±0.06、0.62±0.05、0.64±0.05，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。與電刺激+α-LA低劑量組(2.20±0.04)和電刺激+α-LA高劑量組(1.26±0.93)相比，模型組海馬p-p38MAPK表達水平(3.39±0.09)明顯增高（P0.05）；與電刺激+α-LA高劑量組相比，電刺激+α-LA低劑量組的海馬p-p38MAPK表達水平明顯增高（P0.05）；與假手術組、正常對照組、α-LA組相比，模型組、電刺激+α-LA低劑量組、電刺激+α-LA高劑量組的海馬p-p38MAPK表達水平明顯增高（P0.05）。 3. PI染色結(jié)果假手術組、正常對照組、α-LA組的海馬神經(jīng)元凋亡率分別為1.91±0.60、1.72±0.46、1.53±0.37，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。與電刺激+α-LA低劑量組(11.71±0.52)和電刺激+α-LA高劑量組(8.65±0.38)相比，模型組海馬神經(jīng)元凋亡率（14.83±0.60）明顯增高（P0.05）；與電刺激+α-LA高劑量組相比，電刺激+α-LA低劑量組的海馬神經(jīng)元凋亡率明顯增高（P0.05）；與假手術組、正常對照組和α-LA組相比，模型組、電刺激+α-LA低劑量組、電刺激+α-LA高劑量組的海馬神經(jīng)元凋亡率明顯增高（P0.05）。 結(jié)論: 1.本實驗采用杏仁核電點燃方法成功建立了慢性癲癇大鼠模型。 2.癲癇發(fā)作可導致海馬組織中p-p38MAPK表達上調(diào)、神經(jīng)元凋亡數(shù)量增加。 3.α-硫辛酸能夠降低癲癇發(fā)作等級、縮短后發(fā)放持續(xù)時間、下調(diào)海馬組織內(nèi)p-p38MAPK的表達水平、降低神經(jīng)元凋亡率。從而推測α-硫辛酸可能通過抗凋亡途徑來發(fā)揮癲癇后的神經(jīng)保護作用，，進而降低癲癇大鼠對電刺激的敏感性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R742.1

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本文編號：2255215