【摘要】：腦中風(fēng)(Stroke)是現(xiàn)代社會成年人群中最為普遍的一類高致死、高致殘性疾病之一。缺血性腦中風(fēng)(Ischemic stroke)是臨床最為主要的腦中風(fēng)類型。血栓形成后堵塞血管引起腦血流量降低而使腦組織發(fā)生缺血缺氧、軟化甚至壞死,是導(dǎo)致缺血性腦中風(fēng)的主要原因。因此,溶栓治療以及減緩神經(jīng)損傷、加速神經(jīng)功能恢復(fù)是治療缺血性腦中風(fēng)的關(guān)鍵。目前雖然已有FDA批準的溶栓藥物tPA(Tissue plasminogen activator)用于腦中風(fēng)治療,但tPA容易加重血腦屏障(Blood-brain barrier,BBB)損傷誘發(fā)腦出血,毒副作用大。而與溶栓治療相比,影響缺血性腦中風(fēng)患者神經(jīng)修復(fù)進程的因素復(fù)雜,越來越多的證據(jù)表明,神經(jīng)炎癥在其中發(fā)揮重要作用。神經(jīng)炎癥像是一把雙刃劍,一方面加重神經(jīng)元損傷,另一方面促進組織修復(fù)和髓鞘再生。因此,如何保護血腦屏障、減少tPA毒副作用,配合溶栓治療;同時,探討神經(jīng)炎癥形成機制、尋找干預(yù)神經(jīng)炎癥進程新措施,將對缺血性腦中風(fēng)防治具有重要意義。本論文圍繞上述兩個關(guān)鍵科學(xué)問題開展研究。論文第一部分圍繞神經(jīng)炎癥重要參與者,腦內(nèi)居留巨噬細胞—小膠質(zhì)細胞,研究糖代謝重塑調(diào)控小膠質(zhì)細胞極化,參與神經(jīng)元損傷的作用及機制;論文第二部分圍繞唯一被FDA批準的溶栓藥物tPA,探討視黃酸(Retinoic acid,RA)調(diào)控血腦屏障完整性,減弱tPA誘發(fā)的腦出血綜合癥相關(guān)研究。第一部分糖代謝重塑影響小膠質(zhì)細胞極化參與缺血性腦中風(fēng)的作用及機制研究小膠質(zhì)細胞作為腦內(nèi)居留巨噬細胞,在免疫監(jiān)視、吞噬、修剪突觸結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)神經(jīng)炎癥中發(fā)揮重要功能。與外周巨噬細胞一樣,小膠質(zhì)細胞具有極強的可塑性,不同刺激激活的小膠質(zhì)細胞表型及功能多樣。近年研究較多的巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞表型主要有兩種:促進炎癥反應(yīng)的經(jīng)典型活化(Classicalactivation,M1)和發(fā)揮抗炎作用的替代型活化(Alternative activation,M2)。雖然M1/M2不能全面反映巨噬細胞/小膠質(zhì)細胞的多樣性活化,但代表了小膠質(zhì)細胞活化的兩種極端表型及其介導(dǎo)的不同炎癥反應(yīng)。因此,為了研究小膠質(zhì)細胞在神經(jīng)炎癥中的雙面性,本論文仍延用"classical M1-like"和"alternative M2-like"描述小膠質(zhì)細胞的兩種極化類型,分別代表促進炎癥-組織損傷和抗炎-組織修復(fù)的兩種作用。神經(jīng)炎癥主要由激活的小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞及它們產(chǎn)生的細胞因子、趨化因子等所導(dǎo)致的,是治療缺血性腦中風(fēng)發(fā)生以后短期和長期預(yù)后的關(guān)鍵性決定因素。小膠質(zhì)細胞作為腦內(nèi)居留巨噬細胞,極化激活后直接參與神經(jīng)炎癥發(fā)生。揭示小膠質(zhì)細胞極化機制對于控制神經(jīng)炎癥及相關(guān)疾病防治具有重要意義。越來越多的證據(jù)表明,代謝重編程參與巨噬細胞極化。M1型巨噬細胞中糖酵解關(guān)鍵調(diào)控酶 PFKFB3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase-3)表達升高,糖酵解速率明顯增加;但是在M2型巨噬細胞中糖酵解被抑制,脂代謝(Fatty acid oxidation,FAO)和氧化磷酸化則明顯增強。葡萄糖被認為是腦內(nèi)最主要的能量來源。已有研究表明,葡萄糖代謝重塑與小膠質(zhì)細胞極化密切相關(guān)。在體外培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞系中,LPS/IFN-y通過上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運體1(Glucose transport 1,GLUT1)表達、提高己糖激酶和乳酸脫氫酶活性來提升糖酵解速率。糖酵解終產(chǎn)物乳酸鹽不能長期貯存在細胞內(nèi),主要經(jīng)乳酸鹽轉(zhuǎn)運體排除體外。在缺血性腦中風(fēng)大鼠模型中,乳酸鹽轉(zhuǎn)運體MCT1(Monocarboxylate transporter 1)和MCT2在激活的小膠質(zhì)細胞中的表達都顯著升高。然而MCTs及糖酵解過程在小膠質(zhì)細胞極化和炎癥反應(yīng)中的作用仍然沒有報道。綜上,本論文重點研究MCTs介導(dǎo)的乳酸鹽轉(zhuǎn)運及相關(guān)糖酵解在小膠質(zhì)細胞極化和缺血性腦中風(fēng)神經(jīng)炎癥中的作用。一、缺血再灌注小鼠腦內(nèi)"classical M1-l ike"型小膠質(zhì)細胞及其表達的MCT1、MCT2和MCT4顯著升高MCAO(Middle cerebral artery occlusion)是一類常用的缺血性腦中風(fēng)模型,被廣泛用來研究缺血再灌注之后神經(jīng)元損傷和神經(jīng)炎癥反應(yīng)。因此,本課題首先利用MCAO模型來探究缺血再灌注之后參與神經(jīng)炎癥的小膠質(zhì)細胞極化類型以及糖酵解相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白MCT的表達變化。免疫熒光實驗檢測小鼠MCAO之后"classical" like小膠質(zhì)細胞標志物—Iba1和CD86的表達。結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,小鼠缺血再灌注1天和3天后缺血區(qū)半暗帶區(qū)域Iba1+/CD86+雙陽性細胞數(shù)明顯增多,提示MCAO后小膠質(zhì)細胞向"classical" like型極化的數(shù)量增多。同時通過CD86和MCT1、MCT2或者MCT4免疫雙熒光染色發(fā)現(xiàn),MCAO之后缺血區(qū)半暗帶部位"classical" like小膠質(zhì)細胞中MCT1、MCT2和MCT4表達明顯升高。二、M1(LPS)型小膠質(zhì)細胞中乳酸鹽轉(zhuǎn)運體MCT1、MCT4及糖酵解關(guān)鍵調(diào)控酶PFKFB3表達顯著升高1、LPS刺激顯著促進BV2小膠質(zhì)細胞系MCT1、MCT4和PFKFB3表達為探究MCTs及糖酵解與"classical M1-like"小膠質(zhì)細胞極化之間的關(guān)系,體外培養(yǎng)BV2小膠質(zhì)細胞系后分別給予LPS和IL-4刺激,然后檢測BV2細胞中M1、M2標志分子和糖酵解關(guān)鍵調(diào)控分子MCTs、PFKFB3的變化。RT-PCR結(jié)果顯示,LPS處理明顯促進iNOS、IL-1β、IL-6和STAT1表達;而IL-4刺激上調(diào)Arg1和CD206表達水平。同時檢測MCTs和PFKFB3的表達發(fā)現(xiàn),只有LPS刺激顯著上調(diào)MCT1、MCT4和PFKFB3的表達水平,IL-4刺激后無顯著變化。MCT2在LPS和IL-4刺激后雖然都有上升趨勢,但與對照組相比沒有顯著差異。2、LPS刺激顯著促進原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞MCT1、MCT4和PFKFB3表達為進一步驗證上述結(jié)果,原代分離新生小鼠小膠質(zhì)細胞,LPS和IL-4分別刺激原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞。RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS處理特異性地促進MCT1、MCT4和PFKFB3的表達,但IL-4處理后無明顯變化。上述結(jié)果顯示,在LPS誘導(dǎo)的M1型小膠質(zhì)細胞中,糖酵解相關(guān)調(diào)節(jié)分子MCT1、MCT4和PFKFB3表達顯著升高,提示糖酵解與M1(LPS)型極化存在著密切的關(guān)系。三、MCT1以PFKFB3依賴方式促進糖酵解,增強LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞M1型極化1、干擾MCT1抑制LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞M1型標志分子的表達為研究MCTs能否決定小膠質(zhì)細胞M1型極化,分別設(shè)計MCT1、MCT2和MCT4的干擾慢病毒。BV2細胞感染慢病毒和LPS刺激后檢測M1型小膠質(zhì)細胞標志分子的表達。RT-PCR和Western b1ot結(jié)果顯示,與對照組相比,干擾MCT1顯著抑制LPS誘導(dǎo)的iNOS的表達,但干擾MCT2和干擾MCT4對LPS誘導(dǎo)的iNOS的表達都無明顯作用。同時,干擾MCT1顯著抑制LPS誘導(dǎo)的IL-1β、IL-6和STAT1的表達。以上結(jié)果證實MCT1對于LPS誘導(dǎo)小膠質(zhì)細胞M1型極化是必不可少的。2、干擾MCT1抑制LPS誘導(dǎo)小膠質(zhì)細胞中的糖酵解為進一步評估MCT1調(diào)控小膠質(zhì)細胞極化過程中糖酵解變化,利用乳酸鹽試劑盒檢測培養(yǎng)液中乳酸鹽水平。結(jié)果顯示,LPS刺激BV2顯著促進乳酸鹽釋放;干擾MCT1抑制上述過程。然而,干擾MCT2和干擾MCT4對于LPS誘導(dǎo)的乳酸鹽的釋放無顯著影響。同時,干擾MCT1顯著降低糖酵解調(diào)控酶PFKFB3的表達,但是干擾MCT2和干擾MCT4對PFKFB3的表達無作用。以上結(jié)果提示,MCT1通過促進糖酵解速率來調(diào)控LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞M1型極化。3、外源性乳酸鹽抑制LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞M1型極化為驗證MCT1介導(dǎo)的乳酸鹽轉(zhuǎn)運在小膠質(zhì)細胞M1型極化中的作用,外源加入乳酸鹽抑制BV2細胞中乳酸鹽向細胞外轉(zhuǎn)運。結(jié)果表明,乳酸鹽顯著抑制LPS誘導(dǎo)的iNOS的表達。同時乳酸鹽也逆轉(zhuǎn)了 LPS介導(dǎo)的PFKFB3表達升高。上述結(jié)果證實MCT1通過促進糖酵解過程參與LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞M1型極化。4、MCT1通過上調(diào)糖酵解關(guān)鍵酶PFKFB3表達促進小膠質(zhì)細胞M1型極化為研究PFKFB3在MCT1介導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞M1型極化中的作用,設(shè)計并構(gòu)建PFKFB3過表達慢病毒。MCT1干擾慢病毒和PFKFB3過表達慢病毒同時感染BV2細胞后在給予LPS刺激,收集細胞。RT-PCR結(jié)果表明,過表達PFKFB3能夠逆轉(zhuǎn)干擾MCT1對iNOS,IL-1β、IL-6表達的抑制作用。然而,干擾MCT1和過表達PFKFB3對Arg1和CD206都無顯著影響。四、干擾MCT1抑制LPS介導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞STAT1磷酸化文獻報道,STAT1參與小膠質(zhì)細胞和巨噬細胞M1型極化以及炎癥相關(guān)基因的表達。為了進一步確定MCT1促進小膠質(zhì)細胞M1極化的作用,我們檢測了STAT1和p-STAT1的水平。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)LPS刺激24小時后,干擾MCT1明顯抑制LPS誘導(dǎo)的STAT1表達。另外,LPS刺激條件下,過表達PFKFB3可以消除干擾MCT1對STAT1表達的抑制作用。文獻表明,LPS刺激小膠質(zhì)細胞3小時即可以促使STAT1的磷酸化達到一個峰值。為探究MCT1對STAT1磷酸化的影響,檢測LPS刺激3小時后p-STAT1的水平。結(jié)果表明,LPS刺激3小時后,干擾MCT1顯著抑制LPS誘導(dǎo)的STAT1磷酸化。另外,過表達PFKFB3也明顯抑制干擾MCT1對p-STAT1的影響。上述結(jié)果表明MCT1調(diào)控的糖酵解過程可能是通過影響STAT1的磷酸化介導(dǎo)小膠質(zhì)細胞M1型極化。五、MCT1通過促進小膠質(zhì)細胞向"classical M1-l ike"極化加重糖氧剝奪介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷糖氧剝奪實驗(Oxygen-glucose deprivation,OGD)是體外研究缺血再灌注過程的經(jīng)典模型。為研究MCT1介導(dǎo)的糖酵解促進小膠質(zhì)細胞"classical M1-like"型極化后對神經(jīng)元細胞損傷的影響,將小膠質(zhì)細胞系BV2和神經(jīng)元細胞系SH-SY5Y共培養(yǎng)并經(jīng)歷糖氧剝奪實驗。1、糖氧剝奪處理顯著促進小膠質(zhì)細胞中MCT1、MCT4和PFKFB3表達首先將培養(yǎng)的BV2進行糖氧剝奪2小時處理,檢測BV2細胞中MCTs和PFKFB3等表達。結(jié)果顯示,糖氧剝奪之后M1型標志分子iNOS、IL-1β、IL-6和STAT1表達顯著升高。同時,糖氧剝奪顯著促進MCT1、MCT4和PFKFB3表達。上述結(jié)果表明,糖氧剝奪促進BV2細胞向"classical M1-like"型極化,并上調(diào)糖酵解相關(guān)分子MCT1、MCT4和PFKFB3的表達。2、干擾小膠質(zhì)細胞MCT1表達顯著抑制糖氧剝奪處理介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷利用Transwell來共培養(yǎng)BV2和SH-SY5Y。首先利用干擾慢病毒抑制小膠質(zhì)細胞中MCT1表達,然后將它們進行糖氧剝奪處理。24小時后,采用MTT法檢測SH-SY5Y細胞活性。結(jié)果顯示,糖氧剝奪明顯減弱SH-SY5Y的存活,干擾小膠質(zhì)細胞MCT1表達顯著抑制糖氧剝奪介導(dǎo)的SH-SY5Y的損傷。但是干擾MCT2卻無顯著作用。3、干擾小膠質(zhì)細胞MCT1表達顯著抑制炎癥相關(guān)因子IL-1β、IL-6和TNF-α的釋放為探討干擾小膠質(zhì)細胞MCT1表達對小膠質(zhì)細胞促進炎癥反應(yīng)的影響,RT-PCR檢測小膠質(zhì)細胞中炎癥因子IL-1β,IL-6和TNF-a的mRNA水平,以及ELISA檢測小膠質(zhì)細胞釋放到胞外的炎癥因子的蛋白水平。結(jié)果表明,干擾MCT1明顯抑制糖氧剝奪促進的IL-1β,IL-6和TNF-α的表達。第二部分視黃酸保護血腦屏障減緩tPA介導(dǎo)的腦出血在缺血性腦中風(fēng)中的作用及機制研究完整的血腦屏障(Blood-brainbarrier,BBB)是維持突觸和神經(jīng)元正常功能的微環(huán)境結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。血腦屏障主要由腦血管內(nèi)皮細胞及細胞間連接復(fù)合體、星形膠質(zhì)細胞終足和周細胞等組成。研究發(fā)現(xiàn),在缺血性腦中風(fēng)病人和動物模型中都發(fā)現(xiàn)了明顯的血腦屏障損傷。究其原因,主要是血管內(nèi)皮細胞間連接復(fù)合體相關(guān)蛋白 VE-cadherin(vascular endothelial cadherin)、ZO-1(zonula occludens-1)、claudin-5、Occludin和PECAM-1等明顯降低改變了血腦屏障滲透性導(dǎo)致的。另外,研究報道稱FDA批準使用的強效溶栓藥物tPA是造成血腦屏障損傷的充分必要條件。TPA 可以通過激活 PDGF-CC(platelet-derived growth factor-CC)與其受體PDGF-α結(jié)合,進一步加重腦缺血病人中血腦屏障損傷,進而導(dǎo)致腦出血發(fā)生。這一原因極大地限制了 tPA的使用范圍。因此,通過血腦屏障保護來減輕tPA介導(dǎo)的腦出血副作用是治療缺血性腦中風(fēng)的重要策略。視黃酸(Retinoic acid,RA)作為具有生物活性的維生素A的衍生物,在脊椎動物早期器官發(fā)生中發(fā)揮關(guān)鍵作用。有報道證明放射狀膠質(zhì)細胞來源的視黃酸通過上調(diào)VE-cadherin,ZO-1和Occludin等血腦屏障相關(guān)蛋白參與調(diào)節(jié)早期小鼠胚胎血腦屏障的發(fā)育形成。然而,視黃酸在缺血性腦中風(fēng)中血腦屏障損傷及tPA介導(dǎo)的腦出血綜合癥中的作用尚不清楚。本課題擬從體內(nèi)外實驗中共同探討視黃酸保護血腦屏障減緩tPA介導(dǎo)腦出血的作用機制。一、視黃酸預(yù)處理減輕MCAO大鼠血腦屏障損傷,并增加神經(jīng)保護作用1、視黃酸顯著提升血腦屏障相關(guān)蛋白ZO-1和VE-cadherin的表達研究表明視黃酸通過調(diào)控血腦屏障相關(guān)蛋白參與小鼠早期胚胎血腦屏障的形成。為研究視黃酸對成年大鼠腦內(nèi)血腦屏障相關(guān)蛋白的表達調(diào)控,大鼠腹腔連續(xù)四天注射不同劑量的視黃酸后從背外側(cè)皮層部位取材提取mRNA進行RT-PCR。結(jié)果發(fā)現(xiàn),5mg/kg和25mg/kg濃度的視黃酸特異性增加ZO-1和VE-cadherin表達水平,但是對Claudin-5、Occludin和PECAM-1等表達沒有影響。2、視黃酸預(yù)處理顯著減弱MCAO導(dǎo)致的血腦屏障損傷為探究視黃酸預(yù)處理對于缺血性腦中風(fēng)導(dǎo)致的血腦屏障損傷的作用,選取MCAO作為缺血性腦中風(fēng)模型。SD大鼠MCAO后向頸靜脈內(nèi)注射伊文思藍,結(jié)果發(fā)現(xiàn),視黃酸預(yù)處理明顯抑制缺血性腦中風(fēng)導(dǎo)致的伊文思藍向腦內(nèi)擴散,這一結(jié)果證實視黃酸可以保護缺血性腦中風(fēng)中血腦屏障損傷。3、TTC染色實驗證明視黃酸預(yù)處理減弱MCAO導(dǎo)致的腦梗死面積文獻表明,完整的血腦屏障可以減弱缺血性腦中風(fēng)中神經(jīng)元死亡和神經(jīng)功能學(xué)損傷。為探究視黃酸對血腦屏障的保護能否改善神經(jīng)損傷,大鼠MCAO后大腦進行TTC染色。結(jié)果表明,視黃酸預(yù)處理顯著減小MCAO導(dǎo)致的梗死區(qū)域,以上結(jié)果提示視黃酸在缺血性腦中風(fēng)中發(fā)揮神經(jīng)保護作用。4、視黃酸預(yù)處理減弱MCAO大鼠中溶血栓藥物tPA介導(dǎo)的血腦屏障損傷為進一步研究視黃酸對tPA介導(dǎo)的血腦屏障損傷的影響,SD大鼠MCAO后進行tPA注射。伊文思藍實驗證明,與MCAO大鼠注射PBS組相比,tPA注射明顯增加腦內(nèi)伊文思藍水平。視黃酸預(yù)處理組注射tPA后顯著減少伊文思藍向腦內(nèi)擴散。以上結(jié)果提示視黃酸預(yù)處理顯著減輕tPA導(dǎo)致的血腦屏障損傷。二、視黃酸預(yù)處理顯著抑制缺血性腦中風(fēng)大鼠ZO-1和VE-cadherin的降低ZO-1和VE-cadherin作為腦血管內(nèi)皮細胞之間連接蛋白復(fù)合體的重要組成成分,對BBB的完整性的維持起著非常重要的作用。為檢測視黃酸對MCAO后ZO-1和VE-cadherin表達的影響,利用免疫熒光和western blot實驗來檢測它們的表達。實驗表明,與假手術(shù)組相比,MCAO降低了 ZO-1和VE-cadherin的表達。視黃酸預(yù)處理顯著逆轉(zhuǎn)了 MCAO導(dǎo)致的ZO-1和VE-cadherin的降低,這一結(jié)果表明,視黃酸可能通過提升ZO-1和VE-cadherin的表達對血腦屏障起到保護作用。三、視黃酸通過RARα受體上調(diào)ZO-1和VE-cadher i n表達并減弱血腦屏障滲透性1、抑制RARα受體顯著抑制視黃酸對內(nèi)皮細胞滲透性及ZO-1和VE-cadherin表達的調(diào)控為探究視黃酸對血腦屏障保護作用的分子機制,選擇體外培養(yǎng)的大鼠腦血管內(nèi)皮細胞系RBE4作為體外的血腦屏障模型。視黃酸配合使用RARα或RARβ受體抑制劑加入RBE4細胞,將RBE4進行缺氧乏糖處理。經(jīng)檢測FITC-dextran的透過率來反應(yīng)血腦屏障滲透性。結(jié)果顯示,視黃酸降低了 FITC-dextran的透過率。RARα拮抗劑明顯破壞了視黃酸對FITC-dextran通透性的抑制作用,但是RARβ拮抗劑無顯著作用,以上結(jié)果表明,視黃酸通過RARα受體調(diào)控血腦屏障滲透性。同時檢測血腦屏障相關(guān)蛋白表達,結(jié)果表明,視黃酸處理上調(diào)ZO-1和VE-cadherin的表達,但不影響Claudin-5的表達。RARα拮抗劑可以阻斷視黃酸對ZO-1和VE-cadherin的促進效應(yīng)。但是RARβ拮抗劑對視黃酸調(diào)控的ZO-1和VE-cadherin的表達沒有影響。2、RNA干擾實驗證實視黃酸通過上調(diào)ZO-1和VE-cadherin來調(diào)控血腦屏障滲透性為探究視黃酸對血腦屏障的保護作用與上調(diào)ZO-1和VE-cadherin表達之間的相關(guān)性,分別合成了兩者的siRNA寡聚核苷酸鏈。結(jié)果表明,干擾ZO-1和VE-cadherin都可以一定程度上減弱視黃酸對血腦屏障滲透性的調(diào)節(jié),提示著視黃酸通過調(diào)節(jié)ZO-1和VE-cadherin的表達來發(fā)揮血腦屏障保護作用。綜上,本論文證實視黃酸通過RARα受體特異性上調(diào)血腦屏障相關(guān)蛋白ZO-1和VE-cadherin的表達,進而減弱缺血性腦中風(fēng)介導(dǎo)的血腦屏障損傷。四、視黃酸減弱MCAO大鼠中tPA介導(dǎo)的腦出血和神經(jīng)行為學(xué)損傷1、視黃酸治療減弱MCAO大鼠tPA注射導(dǎo)致的腦出血為研究視黃酸對tPA導(dǎo)致的腦出血的作用,采用文獻中一種常用的高糖加tPA介導(dǎo)腦出血動物模型。與PBS組相比,TPA注射后缺血側(cè)腦內(nèi)血紅蛋白的量明顯增加。MCAO后立即給予視黃酸治療顯著降低tPA導(dǎo)致的缺血側(cè)血紅蛋白水平,以上結(jié)果說明,視黃酸配合tPA治療有效阻止了 tPA導(dǎo)致的腦出血副作用。2、視黃酸治療改善MCAO大鼠tPA介導(dǎo)的ZO-1和VE-cadherin的降低文獻表明,tPA通過破壞ZO-1、Claudin-5和VE-cadherin等連接蛋白加重血腦屏障損傷。為檢測視黃酸對tPA降低的ZO-1和VE-cadherin的影響,western blot和免疫熒光實驗檢測兩者蛋白水平。結(jié)果表明,tPA明顯降低ZO-1和VE-cadherin的表達,視黃酸顯著減輕tPA導(dǎo)致的ZO-1和VE-cadherin的降低。3、視黃酸處理改善MCAO大鼠tPA導(dǎo)致的神經(jīng)功能學(xué)損傷為探究缺血性腦中風(fēng)中視黃酸對tPA加重的神經(jīng)功能學(xué)損傷的影響,采用Neurological scores和Tape removal test兩種行為檢測模型。結(jié)果表明,tPA注射顯著加重神經(jīng)功能學(xué)評分和tape撕掉的時間,說明tPA單獨治療加重神經(jīng)行為學(xué)損傷。視黃酸配合tPA治療后,動物的神經(jīng)功能學(xué)評分和tape撕掉的時間都顯著降低。以上結(jié)果提示,視黃酸在缺血性腦中風(fēng)中顯著改善tPA導(dǎo)致的神經(jīng)功能學(xué)損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R743.3
，

本文編號：2181370