【摘要】：目的:探討TUSC4在非腫瘤腦組織和膠質瘤中的表達水平以及在NHA和不同膠質瘤細胞株中的表達差異,觀察其抑制膠質瘤增殖的作用及分子機制。方法:1.收集重慶醫(yī)科大學病理科2006-2013年的84例星型膠質細胞瘤石蠟包埋組織和12例非腫瘤腦組織標本,IHC檢測各組織中TUSC4表達并用Kaplan-meier法分析TUSC4與患者生存的關系;2.收集2013-2014年重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院神經外科8例膠質瘤手術標本和相對應的瘤旁組織,WB觀察腫瘤及瘤旁組織中TUSC4表達差異;3.培養(yǎng)人正常星形膠質細胞NHA和不同膠質瘤細胞株(U373,SHG44,U118,U87,U251,A172),WB檢測各細胞中TUSC4表達;4.慢病毒上調(LV-TUSC4)或下調(LV-SiRNA-TUSC4)不同膠質瘤細胞株中TUSC4表達,CCK-8和FCM檢測改變膠質瘤細胞中TUSC4對細胞活力和周期運行的抑制作用;5.分析TUSC4對皮下裸鼠成瘤體積和瘤組織增殖指數(shù)的影響;6.WB和酶活性檢測法觀察TUSC4對下游信號通路PDK1-AKT1和靶基因(p21,p27,CDK2,CDK4)表達及活性變化的調控作用。結果:1.TUSC4在膠質瘤組織中表達較非腫瘤腦組織明顯下調,與腫瘤惡性等級成負相關,表達越低患者生存時間越短;2.TUSC4在膠質瘤組織中表達顯著低于對應的瘤旁組織;3.TUSC4在U373,SHG44,U118,U87,U251和A172膠質瘤細胞株中表達較NHA明顯降低;4.TUSC4能有效抑制膠質瘤細胞活力,并促進細胞周期停滯在G1期,抑制其從G1期向S期運行;5.TUSC4抑制裸鼠皮下移植瘤的形成,降低瘤組織內增殖指數(shù);6.TUSC4能夠抑制PDK1Tyr9和AKT1Thr308磷酸化水平而失活PDK1-AKT1信號通路,促進靶基因p21和p27表達增加,降低CDK2和CDK4活性,發(fā)揮抑癌作用。結論:膠質瘤中TUSC4表達隨惡性程度的增加而下調,導致其對PDK1-AKT1信號通路的抑制作用降低,促進了膠質瘤的惡性生長。提高膠質瘤中TUSC4的表達水平有望成為一種新穎的靶基因治療方案。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression level of TUSC4 in non-tumor brain tissue and glioma and the difference in expression between NHA and different glioma cell lines, and to observe its inhibitory effect on glioma proliferation and its molecular mechanism. Method 1: 1. The expression of TUSC4 in 84 cases of astrocytoma embedded in paraffin wax and 12 cases of non-tumor brain tissue from 2006 to 2013 in the Department of Pathology of Chongqing Medical University were collected to detect the expression of TUSC4 in each tissue and the relationship between TUSC4 and patient survival was analyzed by Kaplan-meier method. The differences of TUSC4 expression in tumor and adjacent tissues of 8 cases of glioma in neurosurgery department of the second affiliated Hospital of Chongqing Medical University from 2013 to 2014 were analyzed. The expression of TUSC4 in cultured human astrocytes (NHA) and different glioma cell lines (U373HG4HG4U118U87U251A172) was detected by Western blot. Expression of TUSC4 in different glioma cell lines up-regulated by lentivirus (LV-TUSC4) or down-regulated (LV-SiRNA-TUSC4). The detection of CCK-8 and FCM changes the inhibitory effect of TUSC4 on cell viability and cell cycle in glioma cells. To analyze the effect of TUSC4 on tumorigenesis volume and proliferation index of tumor tissue in nude mice. The effect of TUSC4 on the expression of PDK1-AKT1 and target gene (p21p27CDK2CDK4) in downstream signaling pathway was observed by using WB and enzyme activity assay. Results 1. The expression of TUSC4 in gliomas was significantly lower than that in non-tumor brain tissues, which was negatively correlated with the grade of malignancy. 2. The expression of TUSC4 in glioma tissues was significantly lower than that in the corresponding adjacent tissues. 3. The expression of TUSC4 in U373SHG4U118U87 U251 and A172 glioma cell lines was significantly lower than that of NHA. 4. TUSC4 could effectively inhibit the viability of glioma cells. It also promoted cell cycle arrest in G1 phase and inhibited the formation of subcutaneous xenograft tumor in nude mice. TUSC4 inhibited the formation of subcutaneous transplanted tumor in nude mice, and reduced the proliferation index of tumor tissue. 6. TUSC4 could inhibit the phosphorylation of PDK1Tyr9 and AKT1Thr308 and inactivate the PDK1-AKT1 signaling pathway. Promote the expression of target gene p21 and p27, decrease the activity of CDK2 and CDK4, and play a role in tumor suppression. Conclusion: the expression of TUSC4 in gliomas is down-regulated with the increase of malignant degree, which leads to the decrease of PDK1-AKT1 signaling pathway and promotes the malignant growth of gliomas. Increasing the expression of TUSC4 in gliomas is expected to be a novel target gene therapy.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4

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