【摘要】：目的:最近研究發(fā)現(xiàn),在神經膠質瘤細胞中多梳蛋白家族在表觀遺傳學水平發(fā)揮著轉錄抑制作用并與膠質瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關,與此同時一些長鏈非編碼RNA(lncRNAs)被發(fā)現(xiàn)在神經膠質瘤異常表達并與腫瘤的分級和分型相互關聯(lián)。通過分析惡性神經膠質瘤U87細胞誘導分化過程中長鏈非編碼RNA表達變化以及上調和下調神經系統(tǒng)多梳蛋白1(NSPc1)表達后候選互作lncRNAs的表達變化,鑒定在膠質瘤細胞U87中可能與NSPc1存在功能性相互作用的lncRNAs分子。方法:首先,檢測不同惡性程度的膠質瘤細胞系H4、U251、U87中NSPc1的表達差異并實時定量PCR檢測候選互作lncRNAs的表達水平;然后,利用10-6mol/L的維甲酸誘導U87細胞分化,檢測NSPc1基因在誘導分化過程中的表達變化,同時分析在U87細胞分化過程中候選lncRNAs的表達變化;隨即,通過lipo2000脂質體轉染上調或敲低NSPc1基因的表達,同時檢測轉染前后U87細胞中候選lncRNAs的表達變化。隨后,通過細胞增殖能力實驗和RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)技術鑒定篩選出在U87細胞內與NSPc1可能存在功能性相互作用關系的lncRNAs分子。結果:1不同神經膠質瘤細胞系中,NSPc1表達量與細胞系的惡性程度成正相關,各候選互作lncRNAs的表達水平存在顯著差異。2在惡性度較高的神經膠質瘤細胞系U87的0~10天維甲酸誘導分化過程中,NSPc1的表達先下降再升高,在第6天達到最低;各候選lncRNAs的表達呈逐漸下降趨勢。3在U87細胞中上調或下調NSPc1的表達量后,多個候選互作lncRNAs的表達發(fā)生顯著變化,其中MALAT1、ANRIL變化尤其明顯。4在U87細胞中敲低MALAT1、ANRIL后,細胞的生長受到抑制,細胞的凋亡比例增加。5 RIP技術發(fā)現(xiàn)U87細胞內MALAT1、ANRIL等lncRNAs分子與NSPc1蛋白存在相互作用的關系,并且在細胞誘導分化過程中NSPc1對ANRIL的富集量與NSPc1的表達量呈正相關。結論:1 NSPc1在神經膠質瘤中表達,并與神經膠質瘤的惡性度成正相關。2 MALAT1、ANRIL能促進U87細胞的增長,抑制細胞的凋亡。3 NSPc1與MALAT1、ANRIL相互作用,并且ANRIL在U87細胞分化過程中與NSPc1存在功能性相互作用。
[Abstract]:Objective: recent studies have found that the multicomb protein family plays a transcriptional inhibitory role at the epigenetic level in glioma cells and is closely related to the genesis and development of glioma. At the same time, some long-chain non-coding RNA (lncRNAs) have been found to be abnormal in gliomas and correlated with tumor grading and typing. The changes of long chain noncoding RNA expression in U87 cells induced by malignant glioma and the expression of candidate interacted lncRNAs after up-regulating and down-regulating the expression of multicomb protein 1 (NSPc1) in the nervous system were analyzed. The functional interaction between U87 and NSPc1 was identified. Methods: first, we detected the difference of NSPc1 expression in different malignant glioma cell line H4U251U87 and detected the expression level of candidate interacted lncRNAs by real-time quantitative PCR, and then differentiated U87 cells by 10 ~ (-6) mol / L retinoic acid. The expression of NSPc1 gene in U87 cells was detected, and the expression of candidate lncRNAs was analyzed during the differentiation of U87 cells. Then, the expression of NSPc1 gene was up-regulated or down-regulated by lipo2000 liposome transfection. The expression of candidate lncRNAs in U87 cells was also detected before and after transfection. Subsequently, the functional interaction between NSPc1 and U87 cells was identified by cell proliferation assay and RNA-binding protein immunoprecipitation (RIP) technique. Results the expression of NSPc1 in different glioma cell lines was positively correlated with the malignancy of the cell lines. There was significant difference in the expression level of LNSPcRNAs among the candidates. 2 the expression of NSPc1 decreased at first and then increased during the differentiation of U87 glioma cell line U87 on the 10th day after induction of retinoic acid, and reached the lowest level on the 6th day. After upregulation or down-regulation of NSPc1 expression in U87 cells, the expression of multiple candidate interacted lncRNAs changed significantly, especially after MALAT1 ANRIL was knocked down in U87 cells. The growth of U87 cells was inhibited and the proportion of cell apoptosis increased. 5 RIP technique showed that there was interaction between LNSPcRNAs and NSPc1 protein in U87 cells, such as MALAT1 and ANRIL. The enrichment of ANRIL by NSPc1 was positively correlated with the expression of NSPc1. Conclusion the expression of 1 / 1 NSPc1 in gliomas is positively correlated with the malignancy of gliomas. 2 MALAT1 ANRIL can promote the growth of U87 cells and inhibit the interaction between MALAT1 and MALAT1 ANRIL. And ANRIL has functional interaction with NSPc1 during U87 cell differentiation.
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

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本文編號：2133530