發(fā)布時間：2018-06-07 01:09

  本文選題：克魯佩爾因子2 + 血流動力學�。� 參考：《第二軍醫(yī)大學》2014年博士論文

【摘要】：第一部分KLF2在血流動力學誘導的動脈瘤動物模型中的表達 目的：觀察不同方法構建的血流動力學誘導動脈瘤模型中克魯佩爾因子2（KLF2）的表達及與基底動脈血流速度變化的相關性。 方法：雄性新西蘭白兔144只，隨機分成三組：假手術組、單側頸總動脈結扎組、雙側頸總動脈結扎組，每組48只，每組各分為術后1周、2周、3周和4周組，每組12只。假手術組僅切開頸部暴露頸總動脈不結扎，單側結扎組統(tǒng)一結扎右側頸總動脈，雙側結扎組進行雙側頸總動脈結扎。各組分別在術后1周、2周、3周、4周行經(jīng)顱多普勒超聲測量基底動脈血流速度。然后在各時間點處死動物，每組每個時間點取6只基底動脈分叉部進行HE染色、EVG染色、Masson染色、KLF2免疫組化染色等病理檢測，另外6只基底動脈行KLF2western blot蛋白分析。 結果：各組基底動脈平均血流速度測量結果，在假手術組術后不同時間點變化不明顯，單側頸總動脈結扎組術后血流速度較假手術組增加，但統(tǒng)計學結果提示無顯著差異（P＞.05）。雙側頸總動脈結扎組流速明顯快于假手術組和單側頸總動脈結扎組，有顯著統(tǒng)計學意義（p＜0.05）。病理學檢查結果提示按照動脈瘤評價標準，假手術組基底動脈尖端管腔平滑，內(nèi)皮細胞完整，內(nèi)彈力膜完整，無斷裂和變薄，全組無動脈瘤形成。右側結扎組中24只動物模型中有1只基底動脈尖端略向外膨出，但膨出程度比較低。雙側結扎組中有12只向外凸出的動脈瘤樣突起，統(tǒng)計分析表明三組間具有顯著統(tǒng)計學差異（p＜0.05）。KLF2western blot定量分析提示假手術組基底動脈的KLF2蛋白表達隨時間變化無明顯變化，而單側結扎組蛋白表達隨時間變化有所增加，但增加較少。雙側結扎組KLF2蛋白表達在術后1W起即有顯著增加，隨后一直維持在較高水平，統(tǒng)計結果顯示與假手術組和單側結扎組相比具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。KLF2蛋白表達與血流速度變化相關分析表明二者具有顯著正相關性（r=0.845， P＜0.05）。 結論：1、采用兔雙側頸總動脈結扎法建立的單純血流動力學誘導的動脈瘤模型引起的血流動力學變化最為明顯，更適合做為動脈瘤研究的動物模型。 2、KLF2的表達變化與血流速度變化具有一致性，相關分析提示二者明顯正相關，，提示其表達受血流動力學調(diào)控。 第二部分KLF2上游調(diào)控因子miR-92a在血流動力學誘導動脈瘤動物模型中的表達 目的：利用不同方法構建的血流動力學誘導的動脈瘤模型，采用RT-PCR法檢測各組基底動脈分叉部miRNA-92a的表達差異，探討其對KLF2的表達的調(diào)控作用。 方法：雄性新西蘭白兔72只，隨機分成假手術組、單側頸總動脈結扎組、雙側頸總動脈結扎組各24只，每組各分為術后1周、2周、3周和4周組，每組6只。然后在各時間點處死動物，取基底動脈分叉部進行RT-PCR檢測miRNA-92a的表達差異。其表達結果與基底動脈血流速度進行相關分析。 結果：單側結扎組和雙側結扎組基底動脈分叉部mir-92a mRNA表達水平較假手術組明顯降低。雙側結扎組降低最為明顯，與假手術組和單側結扎組相比具有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。mir-92a的mRNA表達水平與KLF2蛋白表達相關分析表明二者顯著呈負相關（r=-0.768, P＜0.01），而與基底動脈血流速度相關分析提示二者亦呈負相關（r=-0.709, P＜0.01）。 結論： miRNA-92a mRNA表達隨血流速度的增加而表達下降，且與血流速度的變化具有負相關性；說明miRNA-92a mRNA表達受血流動力學調(diào)控。miRNA-92a表達與KLF2表達趨勢相反，二者呈顯著負相關。 第三部分辛伐他汀對KLF2及下游因子在動脈瘤模型中的表達影響 目的：探討KLF2/eNOS、VCAM-1、MMP-9通路在動脈瘤發(fā)生中的作用機制及辛伐汀抑制動脈瘤生長的作用。 方法：新西蘭白兔72只，隨機分成二組：雙側頸總動脈結扎后辛伐他汀干預組、雙側頸總動脈結扎組各36只，每組各分為術后1周、4周，每組18只。辛伐他汀組自動物雙側頸總動脈結扎術后當天起，即給予辛伐他汀25mg/kg/d，自由進食水不限。此后每隔24h投予相同劑量的辛伐他汀，直至術后1周、4周。雙側結扎組術后除不予藥物處理外，余同辛伐他汀組。每組術后1周、4周分別取6只兔子基底動脈行病理切片觀察，另外每組12只分別行PCR和Western blot檢測。另取6只假手術組兔子基底動脈作為對照檢測eNOS、VCAM-1和MMP-9mRNA表達。 結果：二組在1W和4W時基底動脈分叉部動脈瘤樣改變在發(fā)生數(shù)量上無顯著差異，但在辛伐他汀干預組基底動脈分叉部內(nèi)彈力膜薄弱長度縮短（P＜0.05）、中層平滑肌變薄程度輕（P＜0.05）和瘤體最長徑較雙側結扎組縮小，具有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。辛伐他汀組基底動脈分叉部樣本中，VCAM-1和MMP-9mRNA在術后1W和術后4W其表達均下降，而eNOS mRNA表達上升，且與雙側結扎組相同時間點比較具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。KLF2Western-blot蛋白半定量結果發(fā)現(xiàn)： KLF2的表達升高，在4W時升高更為明顯，與雙側結扎組比較，其表達具有顯者的統(tǒng)計學差異(P＜0.05) 結論：辛伐他汀在25mg/kg/d的劑量，能顯著上調(diào)雙側結扎組KLF2的表達。KLF2/eNOS、VCAM-1、MMP-9途徑參與了顱內(nèi)動脈瘤發(fā)生。辛伐他汀能夠減輕基底動脈分叉部動脈瘤樣凸起的病理改變。
[Abstract]:The expression of the first part of klF2 in the animal model of aneurysm induced by hemodynamics

Objective : To observe the expression of kulele factor 2 and its correlation with the changes of arterial blood flow velocity in aneurysm model induced by hemodynamics induced by different methods .

Methods : 144 New Zealand white rabbits were randomly divided into three groups : sham operation group , unilateral carotid artery ligation group and bilateral common carotid artery ligation group .

Results : The results showed that there was no significant difference between the two groups ( P > 0.05 ) . The results showed that there was no significant difference between the two groups ( P > 0.05 ) .

Conclusion : 1 . The hemodynamic changes induced by simple hemodynamics induced by the ligation of bilateral common carotid artery were the most obvious and more suitable for the animal model of aneurysm research .

2 . There was agreement between the change of expression and the change of blood flow velocity , and the correlation analysis suggested that both were positively correlated , suggesting that the expression was regulated by hemodynamics .

The expression of miR - 92a upstream regulatory factor miR - 92a in the animal model induced by hemodynamics

Objective : To investigate the expression of miRNA - 92a in each group of basilar artery bifurcation by means of RT - PCR , and to explore its regulation and control effect .

Methods : 72 male New Zealand white rabbits were randomly divided into two groups : sham operation group , unilateral common carotid artery ligation group and bilateral common carotid artery ligation group . Each group was divided into 1 week , 2 week , 3 week and 4 week group . The expression of miRNA - 92a was detected by RT - PCR at each time point .

Results : The expression level of mir - 92a mRNA in bilateral ligation group and bilateral ligation group was significantly lower than that in sham operation group ( P < 0.05 ) . Compared with sham operation group and unilateral ligation group , the expression level of mir - 92a was significantly negative ( r = - 0.768 , P < 0.01 ) , but also negative correlation with the basal arterial blood flow velocity correlation analysis ( r = - 0.709 , P < 0.01 ) .

Conclusion : The expression of miRNA - 92a mRNA decreased with the increase of blood flow velocity and negatively correlated with the changes of blood flow velocity .
The expression of miRNA - 92a mRNA was regulated by hemodynamics .

Effect of the third part of simvastatin on the expression of klF2 and downstream factors in the aneurysm model

Objective : To investigate the mechanism of MMP - 1 and MMP - 9 in the pathogenesis of aneurysm and the effect of simvastatin on aneurysm growth .

Methods : 72 New Zealand white rabbits were randomly divided into two groups : simvastatin intervention group and bilateral common carotid artery ligation group . Each group was divided into 1 week and 4 weeks after operation .

Results : Compared with bilateral ligation group , the expression of VCAM - 1 and MMP - 9 mRNA decreased significantly ( P & lt ; 0.05 ) , and the expression of VCAM - 1 and MMP - 9 mRNA was significantly higher than that in bilateral ligation group ( P & lt ; 0.05 ) .

Conclusion : The dose of simvastatin in 25 mg / kg / d can significantly increase the expression of klF2 in the bilateral ligation group , which is involved in the occurrence of intracranial aneurysms .
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743

【共引文獻】

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本文編號：1988977