本文選題：腦缺血/再灌注損傷 + 缺血后處理�。� 參考：《昆明醫(yī)科大學》2014年博士論文

【摘要】：目的：采用線栓法建立更符合人類常見缺血性卒中類型的大鼠大腦中動脈栓塞(MCAO)模型,于再灌注即刻給予缺血后處理。觀察缺血后處理對大鼠腦缺血/再灌注損傷的保護作用,并尋找其有效治療時間窗。選擇一個梗死面積和神經(jīng)功能評分與缺血2h再灌注組無明顯差異的最遠時間點給予缺血后處理,探討缺血后適應對炎癥反應及細胞凋亡的影響。 方法：本研究分為三部份進行。第一部份,缺血后處理對腦缺血/再灌注損傷的保護作用的研究。建立穩(wěn)定的大鼠MCAO模型,于再灌注即刻給予缺血后處理。對單純腦缺血/再灌注組和腦缺血/再灌注合并缺血后處理組的大鼠分別實施2h、3h、4h、4.5h、6h的腦缺血處理,觀察缺血后處理對不同組大鼠腦缺血/再灌注48h后神經(jīng)功能評分、腦梗死體積和腦水腫程度的影響,尋找有效的治療時間窗。根據(jù)第一部分實驗結(jié)果選擇一個梗死面積和神經(jīng)功能評分與缺血2h再灌注組無明顯差異的最遠時間點,進行第二、三部分實驗。第二部分,HE染色觀察大鼠腦組織的病理形態(tài)改變；采用免疫組化半定量測定腦缺血/再灌注組及腦缺血/再灌注合并缺血后處理組在2個時間點缺血側(cè)皮層內(nèi)TLR2和TLR4的表達變化。第三部分,采用流式細胞術、熒光定量PCR、Western-Blotting檢測腦缺血/再灌注組及腦缺血/再灌注合并缺血后處理組在2個時間點缺血側(cè)皮層內(nèi)TLR2和TLR4及其下游信號通路分子IRAK4和炎性細胞因子IL-1β蛋白和mRNA的表達及細胞凋亡情況。 結(jié)果：2h、3h、4h后處理組大鼠腦缺血/再灌注24h和48h的神經(jīng)功能評分較相同缺血時間點缺血組和后處理4.5h和6h組改善(p0.05)。2h、3h、4h后處理組大鼠腦缺血/再灌注48h的腦梗塞體積和相對腦水腫程度較相同缺血時間點缺血組和后處理4.5h和6h組明顯減輕(p0.05)。2h后處理組大鼠腦缺血/再灌注48h缺血側(cè)皮層內(nèi)TLR2和TLR4陽性細胞數(shù)量較2h缺血組和4.5h后處理組減少(p0.05)；4.5h后處理組TLR4陽性細胞數(shù)量較4.5h缺血組減少(p0.05)。2h后處理組大鼠腦缺血/再灌注48h缺血側(cè)皮層內(nèi)細胞凋亡比例較2h缺血組和4.5h后處理組明顯減少(p0.05)。2h后處理組大鼠腦缺血/再灌注48h缺血側(cè)皮層內(nèi)TLR2、TLR4、IL-1βmRNA和蛋白及IRAK4mRNA表達量較2h缺血組降低(p0.05)；2h缺血時間點后處理組TLR2、IL-1βmRNA和蛋白及TLR4蛋白表達量較4.5h后處理組降低(p0.05)。 結(jié)論：缺血后處理能減輕急性腦缺血/再灌注損傷,表現(xiàn)為神經(jīng)功能缺損的改善、腦梗塞體積和相對腦水腫程度的減輕,其保護作用的有效時間窗為腦缺血4.5h以內(nèi)。缺血后處理能有效改善大鼠腦缺血/再灌注損傷所致的細胞凋亡和炎癥反應,表現(xiàn)為2h后處理組缺血側(cè)皮層內(nèi)TLR2和TLR4及其下游信號通路分子IRAK4和炎性細胞因子IL-1β的表達及細胞凋亡受到明顯抑制。
[Abstract]:Aim: to establish a rat model of middle cerebral artery embolization (MCAO) which is more suitable to the common ischemic stroke type in human. To observe the protective effect of post-ischemic treatment on cerebral ischemia / reperfusion injury in rats and to find an effective time window for its treatment. A farthest time point with no significant difference between the infarct size and neurological function score and the ischemia 2 h reperfusion group was selected to study the effects of ischemic adaptation on inflammatory response and apoptosis. Methods: the study was divided into three parts. In the first part, the protective effect of post-ischemic treatment on cerebral ischemia / reperfusion injury was studied. A stable rat model of MCAO was established and treated immediately after reperfusion. The rats in the pure cerebral ischemia / reperfusion group and the cerebral ischemia / reperfusion combined with ischemic post-treatment group were treated with cerebral ischemia for 2 h, 3 h, 4 h and 4.5 h, respectively, and the neurological function scores were observed after 48 hours of cerebral ischemia / reperfusion in different groups. The effect of cerebral infarction volume and degree of cerebral edema to find an effective time window for treatment. According to the results of the first part of the experiment, a farthest time point with no significant difference between the infarct size and neurological function score and the ischemia 2h reperfusion group was selected, and the second and third parts of the experiment were carried out. The second part was to observe the histopathological changes of rat brain by HE staining. The expression of TLR2 and TLR4 in ischemic cortex of cerebral ischemia / reperfusion group and cerebral ischemia / reperfusion combined with ischemia group were measured by semi-quantitative immunohistochemical method at two time points. The third part, flow cytometry, Fluorescence quantitative PCR Western-blotting for the detection of TLR2 and TLR4 and their downstream signaling molecules IRAK4, IL-1 尾 protein and mRNA in cerebral ischemia / reperfusion group and cerebral ischemia / reperfusion combined with ischemic post-treatment group at two time points Expression and apoptosis. Results compared with ischemia group at the same ischemic time point and 4.5 h and 6 h post-treatment group, the neurological function scores of rats in the brain ischemia / reperfusion 24 h and 48 h after treatment with 1: 2 h + 3 h + 4 h improved the infarct volume and phase of cerebral ischemia / reperfusion 48h in the rats treated for 4 h after brain ischemia / reperfusion for 4 h. The amount of TLR2 and TLR4 positive cells in cerebral ischemic cortex of rats treated with cerebral ischemia / reperfusion for 48 h after cerebral ischemia and reperfusion was significantly reduced compared with that of ischemia group at 2 h and 4. 5 h and 6 h after treatment, compared with that of 2 h ischemia group and 4. 5 h post-treatment group. The number of TLR4 positive cells in the treatment group was significantly lower than that in the 4.5 h ischemia group compared with that in the 4.5 h ischemia group. The percentage of apoptosis in the ischemic cortex of the rats in the 48 h cerebral ischemia / reperfusion group was significantly lower than that in the 2 h ischemia group and the 4.5 h post-treatment group compared with the 4. 05 h ischemia group. The expression of IL-1 尾 mRNA, protein and IRAK4mRNA in the cerebral cortex of the cerebral ischemia / reperfusion 48 h group was lower than that in the 2h ischemia group. The expression of TLR2TLR4 尾 mRNA and protein and TLR4 protein in the post-treatment group was significantly lower than that in the control group (P 0.05). Conclusion: the acute cerebral ischemia / reperfusion injury can be alleviated after ischemic treatment, which is characterized by the improvement of neural function defect, the reduction of cerebral infarction volume and the relative degree of cerebral edema. The effective time window of its protective effect is within 4.5 hours of cerebral ischemia. The apoptosis and inflammatory response induced by cerebral ischemia / reperfusion injury were effectively improved after ischemic treatment in rats. The expression of TLR2, TLR4 and its downstream signaling pathway, IRAK4, IL-1 尾, and apoptosis were significantly inhibited in the ischemic cortex of 2 h post-treatment group.
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

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本文編號：1926504