本文選題：腦缺血 + 糖尿病　； 參考：《寧夏醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:使用高乳酸模擬體外糖尿病伴隨腦缺血模型,研究其對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷作用及與線粒體通路的關(guān)系,為進(jìn)一步理解糖尿病加重腦缺血損傷的機(jī)制提供新的思路。研究方法:本研究利用體外培養(yǎng)的MA-h小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。待細(xì)胞傳代至第二代時(shí),為了探討高乳酸對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷作用及其機(jī)制,將MA-h細(xì)胞進(jìn)行以下分組:(1)對(duì)照組:使用DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(2)使用含有2.5mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(3)使用含有5mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(4)使用含有10mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(5)使用含有15mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察不同濃度乳酸對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響,MTT法檢測(cè)細(xì)胞生存率;DHE熒光探針檢測(cè)ROS的含量;TMRM熒光探針檢測(cè)線粒體膜電位情況;Western Blot及免疫細(xì)胞熒光檢測(cè)MA-h細(xì)胞胞漿與胞核中凋亡相關(guān)因子caspase-3,線粒體通路相關(guān)因子caspase-9,AIF、CytC以及總PKA和磷酸化的PKA在不同處理組中的表達(dá)情況。研究結(jié)果:(1)倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),與對(duì)照組相比較,2.5mM乳酸干預(yù)后星形膠質(zhì)細(xì)胞密度減少,胞體大小不一,突起變小變短,細(xì)胞間的連接減少,隨著乳酸濃度的增加,細(xì)胞密度進(jìn)一步減少,部分細(xì)胞由貼壁狀態(tài)轉(zhuǎn)為懸浮狀態(tài),死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片增多。(2)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:使用2.5mM的乳酸干預(yù)后,星形膠質(zhì)細(xì)胞的存活率由對(duì)照組的(0.35±0.02)降低至(0.25±0.05),隨著乳酸濃度的增加,細(xì)胞存活率持續(xù)下降,干預(yù)乳酸濃度為15m M時(shí),存活率僅為(0.18±0.03)。(3)DHE熒光探針檢測(cè)ROS實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):各組別的熒光強(qiáng)度在600nm紫外光激發(fā)下達(dá)到最強(qiáng),相同波長的紫外光激發(fā)下,2.5mM乳酸干預(yù)組的熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組(P0.05),5mM乳酸干預(yù)組的熒光強(qiáng)度高于2.5m M乳酸干預(yù)組(P0.05)。(4)TMRM熒光探針實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):各組別的熒光強(qiáng)度在580nm紫外光激發(fā)下達(dá)到最強(qiáng),相同波長的紫外光激發(fā)下,2.5mM乳酸干預(yù)組的熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組(P0.05)。(3)Western Blot及免疫細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn)顯示:高乳酸干預(yù)組星形膠質(zhì)細(xì)胞胞漿中中凋亡相關(guān)因子caspase3、線粒體通路相關(guān)因子AIF、CytC、caspase-9的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組(P0.05),且乳酸濃度越高,增加效果越明顯,而胞核中AIF的表達(dá)無明顯差異(P0.05);乳酸干預(yù)組T-PKA的表達(dá)高于對(duì)照組(P0.05),5mM乳酸能使胞漿中PKA的磷酸化水平顯著升高(P0.05),而胞核中PKA的磷酸化水平隨著干預(yù)乳酸濃度的增加而不斷降低。結(jié)論:(1)高乳酸能造成星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷,存活率下降,乳酸濃度越高,損傷作用越明顯.(2)線粒體膜電位下降,ROS產(chǎn)生增加參與了高乳酸對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷。(3)高乳酸通過線粒體通路損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞
[Abstract]:Objective: to study the effects of high lactate on astrocyte injury and mitochondrial pathway in order to provide a new idea for further understanding the mechanism of diabetes mellitus exacerbating cerebral ischemia. Methods: MA-h mouse hippocampal astrocytes were cultured in vitro. In order to investigate the damage effect of high lactic acid on astrocytes and its mechanism, MA-h cells were divided into the following groups: control group: DMEM/F12 complete culture medium (37 鈩，

本文編號(hào)：1911006