本文選題：少突膠質(zhì)細(xì)胞 + 少突膠質(zhì)前體細(xì)胞��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：神經(jīng)退行性疾病是一類(lèi)慢性、進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病的總稱(chēng)。其發(fā)病率高、病期長(zhǎng)、并且缺乏特異性治療方法與措施。該類(lèi)疾病給個(gè)人、家庭、社會(huì)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)與社會(huì)負(fù)擔(dān)的雖然這類(lèi)疾病的病變部位及原因各不相同,但髓鞘產(chǎn)生不同程度破壞或發(fā)生脫髓鞘病變是它們的共同點(diǎn)。主要表現(xiàn)為伴隨著少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte,OL)的減少以及脫髓鞘。雖然對(duì)于這類(lèi)疾病有很多的研究,少突膠質(zhì)細(xì)胞的損傷和再生修復(fù)的的具體機(jī)制依然不清楚。少突膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)唯一的髓鞘形成細(xì)胞。其前體細(xì)胞-少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(oligodendrocyte progenitor cell,OPC)具有良好的增殖能力,能在體內(nèi)增殖、遷移,最后形成成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞,為髓鞘形成發(fā)揮極其重要的作用。無(wú)論內(nèi)源性誘導(dǎo)還是外源性移植,如何獲取大量的OPC,或者促進(jìn)OPC再生成為治療脫髓鞘疾病的關(guān)鍵。我們前期發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocytes,AST)與OPC在接觸共培養(yǎng)的條件下促進(jìn)其增殖,但具體調(diào)控增殖的機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)探討了ASTs影響OPCs增殖的具體機(jī)制。為治療脫髓鞘疾病提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)與理論基礎(chǔ)。本研究分為以下三個(gè)部分:第一部分:星形膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)cx47促進(jìn)opcs增殖本部分通過(guò)使用星形膠質(zhì)細(xì)胞與opc不同的培養(yǎng)方式,利用細(xì)胞流式、edu檢測(cè)細(xì)胞周期及增殖。采用二代測(cè)序分析了不同培養(yǎng)條件下所有的差異基因,篩選有效的差異基因cx47。構(gòu)建有效的cx47sirna,wb、pcr檢測(cè)cx47蛋白基因變化,細(xì)胞流式檢測(cè)細(xì)胞周期、edu檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。主要結(jié)果如下:1.opcs與asts直接接觸共培養(yǎng)后,光鏡、流式、edu檢測(cè)顯示asts促進(jìn)opcs增殖較單獨(dú)培養(yǎng)組與上清培養(yǎng)組更明顯,處于細(xì)胞周期s期細(xì)胞比例明顯增加(p0.05),新生細(xì)胞數(shù)目占總細(xì)胞數(shù)比例顯著增加(p0.001)。2.opcs與asts直接接觸共培養(yǎng)中,cx47促進(jìn)了opcs增殖。3.干擾cx47后,cx47蛋白與基因表達(dá)明顯下降(p0.001),細(xì)胞周期阻滯(p0.01),增殖能力降低(p0.001)。上述結(jié)果說(shuō)明asts促進(jìn)opcs的增殖可能通過(guò)直接接觸的cx47。第二部分:星形膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)cx47促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞s1pr3表達(dá)誘導(dǎo)其增殖在證實(shí)接觸共培養(yǎng)更能促進(jìn)opcs增殖的前提下,我們進(jìn)一步比較了共培養(yǎng)與單獨(dú)培養(yǎng)條件下下游膜信號(hào)的變化,利用接觸式共培養(yǎng)組差異表達(dá)基因go細(xì)胞組分分析,顯示主要位于細(xì)胞外基質(zhì)、胞外區(qū)、細(xì)胞膜。以g-proteincoupledreceptoractivity聚類(lèi)分析顯示,在s1prs家族中表達(dá)三個(gè)亞型,s1pr1、s1pr3、s1pr5,尤以s1pr3在接觸共培養(yǎng)組較單獨(dú)opcs培養(yǎng)組差異性最為顯著。本部分在asts與opcs接觸共培養(yǎng)與單獨(dú)培養(yǎng)的條件下,進(jìn)一步檢測(cè)了cx47影響少突膠質(zhì)前體細(xì)胞增殖的機(jī)制,流式、共聚焦檢測(cè)cx47干擾后ca2+的表達(dá),wb、pcr檢測(cè)下游的s1pr3表達(dá),流式檢測(cè)細(xì)胞周期。edu檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。利用s1pr3的拮抗劑后,wb檢測(cè)了s1pr3,edu檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。主要結(jié)果如下:1.cx47干擾后,流式檢測(cè)ca2+濃度下降(p0.05),與共聚焦結(jié)果一致(p0.001)。2.下游受體信號(hào)的變化以s1prs家族在共培養(yǎng)與單獨(dú)培養(yǎng)差異最為顯著,尤以s1pr3最為明顯。3.干擾cx47后s1pr3的蛋白表達(dá)下降(p0.001)、基因表達(dá)下降(p0.01)。4.拮抗s1pr3后,相比單獨(dú)培養(yǎng)組,在共培養(yǎng)組opcs細(xì)胞周期g1期阻滯(p0.05),edu檢測(cè)新生細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)比例下降(p0.001)。以上結(jié)果表明opcs與asts接觸共培養(yǎng)中,cx47觸發(fā)ca2+內(nèi)流,上調(diào)s1pr3的表達(dá)調(diào)控opcs的增殖。第三部分:asts通過(guò)上調(diào)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞s1pr3激活erk/p21通路誘導(dǎo)其增殖本部分在asts與opcs接觸共培養(yǎng)與單獨(dú)培養(yǎng)的條件下,主要探討了Cx47調(diào)控S1PR3表達(dá)促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞增殖的下游通路。S1PR3拮抗后,WB檢測(cè)了ERK1/2、p-ERK1/2、p21的蛋白變化。PCR檢測(cè)了Id4的變化。EdU檢測(cè)細(xì)胞增殖。主要結(jié)果如下:1.S1PR3拮抗后,p-ERK1/2降低(p0.001),p21表達(dá)增高(p0.05),細(xì)胞增殖能力下降(p0.001)。2.ERK1/2阻斷后,Id4表達(dá)減少(p0.05),細(xì)胞周期阻滯(p0.05),細(xì)胞增殖能力下降(p0.001)。3.S1PR3可以增加ERK1/2磷酸化,減少OPCs的G1期所占比例,促進(jìn)OPCs進(jìn)入S期,從而調(diào)控其增殖。以上結(jié)果表明星形膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)上調(diào)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞S1PR3表達(dá)激活ERK1/2通路誘導(dǎo)其增殖。
[Abstract]:In this study , we found that astrocytes ( AST ) and OPC ( OPC ) could be used as the sole myelinated cells in the central nervous system . The expression of s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 and s1pr3 were detected .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1846333