本文選題：低氧 + 膠質(zhì)瘤��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:(1)探討21%氧氣濃度和5%氧氣濃度的培養(yǎng)環(huán)境對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、自我更新能力和侵襲遷移能力的影響;(2)初步探究常氧及低氧環(huán)境下Wnt通路與腫瘤增殖及侵襲的關(guān)系。方法:(1)于21%氧氣濃度和5%氧氣濃度培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞,經(jīng)過1d、2d、3d、4d、5 d、6d、7d后,顯微鏡下觀察并拍照,CCK-8實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞增殖,細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)和單克隆實(shí)驗(yàn)測定成球能力,Real Time-q PCR實(shí)驗(yàn)檢測Wnt通路相關(guān)m RNA水平及Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測相關(guān)蛋白表達(dá)水平;(2)于21%氧氣濃度和5%氧氣濃度培養(yǎng)箱培養(yǎng)培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞,培養(yǎng)24小時(shí)后,分別以劃痕實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞遷移能力,細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞侵襲能力,Real Time-q PCR實(shí)驗(yàn)檢測EMT相關(guān)m RNA水平及Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)以CCK-8實(shí)驗(yàn)證明低氧環(huán)境下膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖活力增強(qiáng),細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)及單克隆實(shí)驗(yàn)證明膠質(zhì)瘤細(xì)胞在5%的低氧氣濃度條件下自我更新能力和21%氧氣濃度組增強(qiáng),PCR實(shí)驗(yàn)及Western實(shí)驗(yàn)證實(shí)Wnt/β-catenin經(jīng)典通路標(biāo)志蛋白β-catenin表達(dá)上調(diào),而介導(dǎo)該蛋白數(shù)量平衡的GSK-3β的表達(dá)減少。作為是經(jīng)典Wnt通路下游靶蛋白c-Myc明顯上調(diào)。低氧環(huán)境能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖;(2)通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的觀察和對細(xì)胞遷移距離的計(jì)算,可以確定經(jīng)低氧環(huán)境處理的腫瘤細(xì)胞的遷移速率明顯高于常氧組。而在細(xì)胞侵襲試驗(yàn)中5%低氧氣濃度組細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)多于21%濃度組。結(jié)合WB實(shí)驗(yàn)和PCR實(shí)驗(yàn),低氧環(huán)境處理的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中EMT(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)正性上游調(diào)節(jié)因子的表達(dá)增加,E-cad表達(dá)下調(diào)而N-cad表達(dá)明顯增加。因此可以進(jìn)一步認(rèn)為低氧微環(huán)境通過對腫瘤細(xì)胞的EMT過程的啟動(dòng)和維持參與到腫瘤的侵襲和遷移過程。結(jié)論:(1)低氧氣濃度能夠啟動(dòng)Wnt通路并上調(diào)有關(guān)的下游靶蛋白使膠質(zhì)瘤的增殖能力,自我更新能力增強(qiáng)。(2)低氧氣濃度上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的Vim、N-cad蛋白上調(diào),下調(diào)E-cad等,啟動(dòng)和維持EMT過程,提高膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移能力。本課題為國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號:81271316):平滑肌前體細(xì)胞移植介導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞基因甲基化作用早期干預(yù)動(dòng)脈硬化性腦梗塞的分子機(jī)制研究。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of 21% oxygen concentration and 5% oxygen concentration on the proliferation, self-renewal and invasion of glioma cells. (2) to explore the relationship between Wnt pathway and tumor proliferation and invasion in normoxic and hypoxic environment. Methods glioma cells were cultured in 21% oxygen concentration incubator and 5% oxygen concentration incubator respectively. After 1 d ~ 2 d ~ 3 d ~ 4 ~ 5 d ~ 5 ~ 5 d ~ (-1) ~ 6 d ~ (-1) after 7 days, CCK-8 cell proliferation was observed and photographed under microscope, and CCK-8 assay was used to determine the proliferation of glioma cells. Glioma cells were cultured in 21% oxygen and 5% oxygen concentration incubators by real Time-q PCR assay and Western Blot assay. After cultured for 24 hours, the cell migration ability was measured by scratch assay, the cell invasion ability was measured by real Time-q PCR assay, and the expression of EMT related protein was detected by Western Blot assay and real Time-q PCR assay. Results CCK-8 assay showed that the proliferation activity of glioma cells was increased under hypoxia. Cell sphericity and monoclonal assay showed that glioma cells had the ability of self-renewal at low oxygen concentration of 5%, and the enhancement of the expression of 尾 -catenin in Wnt/ 尾 -catenin classic pathway was confirmed by Western assay and enhanced polymerase chain reaction with 21% oxygen concentration, and the expression of 尾 -catenin in glioma cells was up-regulated. However, the expression of GSK-3 尾 mediated the quantitative balance of the protein decreased. C-Myc, the downstream target protein of classical Wnt pathway, was upregulated significantly. Through the observation of cell scratch test and the calculation of cell migration distance, it can be concluded that the migration rate of tumor cells treated with hypoxic environment is significantly higher than that of normoxic group. In the cell invasion test, the number of transmembrane cells in the 5% low oxygen concentration group was more than that in the 21% concentration group. In combination with WB assay and PCR assay, the expression of positive upstream regulatory factor of EMT(Epithelial-mesenchymal transitionship was increased in cultured glioma cells treated with hypoxia. The expression of E-cad was down-regulated and the expression of N-cad was increased significantly. It is suggested that hypoxia microenvironment is involved in tumor invasion and migration through the initiation and maintenance of the EMT process of tumor cells. Conclusion low oxygen concentration can activate the Wnt pathway and up-regulate the downstream target proteins and enhance the ability of glioma to proliferate and self-renew. 2) low oxygen concentration can up-regulate the Vim-N-cad protein and down-regulate E-cad in glioma cells. To initiate and maintain the EMT process and improve the invasion and migration of glioma cells. This paper is a project of National Natural Science Foundation of China (No.: 81271316): the molecular mechanism of endothelial progenitor cell gene methylation mediated by smooth muscle precursor cell transplantation in early intervention of arteriosclerotic cerebral infarction.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

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本文編號：1825704