本文選題：透明質(zhì)酸酶 + 生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血(Germinal matrix intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是新生兒期最常見的顱內(nèi)出血類型,同時(shí)也是造成早產(chǎn)兒腦白質(zhì)受損的重要原因。隨著醫(yī)學(xué)進(jìn)步,超早產(chǎn)兒的成活率逐步增長,GM-IVH患兒數(shù)量也趨之升高。嚴(yán)重的GM-IVH患兒會(huì)遺留如腦癱、學(xué)習(xí)困難,認(rèn)知功能障礙等神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,即便是輕度顱內(nèi)出血,也可對(duì)患兒預(yù)后造成一定影響,且目前仍無有效治療手段。近年來隨著對(duì)GM-IVH繼發(fā)性損傷研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)GM-IVH后的繼發(fā)炎癥反應(yīng)可對(duì)腦組織造成不可逆性損傷。透明質(zhì)酸是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,同時(shí)也是一種炎性介質(zhì),與受體CD44結(jié)合后會(huì)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的進(jìn)行,在許多炎癥性疾病中可見透明質(zhì)酸的積累。透明質(zhì)酸酶是透明質(zhì)酸的特異性水解酶,有研究證明使用透明質(zhì)酸酶能夠治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病。那么,通過應(yīng)用透明質(zhì)酸酶是否能夠減輕GM-IVH后的繼發(fā)炎性損傷,關(guān)于這方面的研究國內(nèi)外少有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用早產(chǎn)兔GM-IVH動(dòng)物模型,旨在研究:1.GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織中透明質(zhì)酸受體CD44及腫瘤壞死因子(TNF-a)的表達(dá)情況;2.透明質(zhì)酸酶干預(yù)后GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織中透明質(zhì)酸受體CD44及TNF-a的表達(dá)情況;方法:1選取42只孕29天新西蘭大白兔所生早產(chǎn)乳兔(正常孕足月乳兔為32天),生后迅速保暖,并進(jìn)行奶粉飼養(yǎng)。隨機(jī)分為正常組、模型組(單純GM-IVH模型)和治療組(GM-IVH模型+透明質(zhì)酸酶),每組各14只。參照腹腔注射丙三醇誘發(fā)GM-IVH的步驟,制備早產(chǎn)兔GM-IVH動(dòng)物模型。具體步驟為:對(duì)模型組和治療組早產(chǎn)兔在出生后3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行50%丙三醇(10ml/Kg)腹腔注射,制作GM-IVH動(dòng)物模型,正常組不進(jìn)行任何處理。在生后1天內(nèi)對(duì)三組早產(chǎn)兔進(jìn)行顱腦超聲檢查,觀察治療組和模型組早產(chǎn)兔是否伴有顱內(nèi)出血。對(duì)治療組早產(chǎn)兔在生后第2天、第4天、第6天給予側(cè)腦室注射透明質(zhì)酸酶(1U/μL),劑量為20μL/kg,對(duì)照組在相同時(shí)間點(diǎn)給予側(cè)腦室注射生理鹽水,劑量為20μL/kg,正常組不予任何處理,精心飼養(yǎng)各組早產(chǎn)兔。2將每組早產(chǎn)兔隨機(jī)分為第3天、第7天兩個(gè)亞組,每組7只,在第3天、第7天對(duì)各組早產(chǎn)兔進(jìn)行麻醉處死,迅速剝離腦組織,觀察標(biāo)本形態(tài)后在冰上快速提取腦室周圍腦組織并對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào),將一部分標(biāo)本放入-80℃冰箱中保存,供蛋白印跡實(shí)驗(yàn)使用。其余標(biāo)本置于4%多聚甲醛中固定,進(jìn)行免疫組化染色和蘇木精-伊紅染色。3應(yīng)用免疫組化法觀察三組標(biāo)本中腫瘤壞死因子、CD44的表達(dá)是否存在差異。采取蛋白印跡實(shí)驗(yàn)對(duì)比三組標(biāo)本中腫瘤壞死因子、CD44的表達(dá)情況。4統(tǒng)計(jì)方法:使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件及Microsoft Excel 2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料若符合正態(tài)分布,則用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)描述,比較前先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),若方差齊,兩個(gè)樣本均數(shù)比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Independent Samples Test),多樣本均數(shù)比較采用LSD檢驗(yàn),若不滿足方差齊性檢驗(yàn)則采用秩和檢驗(yàn)(rank-sum test)的方法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)為0.05,P小于0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)意義。結(jié)果:1成功復(fù)制GM-IVH動(dòng)物模型對(duì)懷孕29天的孕兔進(jìn)行剖腹產(chǎn),獲得29天早產(chǎn)兔,在生后三小時(shí)內(nèi)給予丙三醇腹腔注射,誘發(fā)顱內(nèi)出血。通過對(duì)各組早產(chǎn)兔完善顱腦超聲檢查、觀察早產(chǎn)兔大體標(biāo)本形態(tài)及進(jìn)行顯微鏡觀察等途徑證明成功復(fù)制了GM-IVH早產(chǎn)兔動(dòng)物模型。2早產(chǎn)兔腦組織中CD44的表達(dá)模型組GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中CD44的表達(dá)在生后第3天最高,第7天降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。治療組和正常組早產(chǎn)兔腦組織中CD44的表達(dá)在生后第7天高于第3天,差異達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在同時(shí)間段比較(3天、7天),模型組兔腦組織標(biāo)本中CD44表達(dá)最高,正常組最低,治療組位于兩者之間,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3早產(chǎn)兔腦組織中TNF-a的表達(dá)模型組和治療組GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中TNF-a的表達(dá)在生后第3天高于生后第7天,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。正常組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本在生后第3天和第7天比較,TNF-a的表達(dá)無差異(P0.05)。在相同時(shí)間段里(3天、7天),TNF-a在模型組腦組織標(biāo)本中表達(dá)最高,其次為治療組,正常組表達(dá)最低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:早產(chǎn)兔發(fā)生GM-IVH后腦組織中TNF-a含量升高,提示GM-IVH存在繼發(fā)性炎癥反應(yīng),提示隨時(shí)間進(jìn)展,炎癥反應(yīng)由強(qiáng)逐漸減弱。此外,早產(chǎn)兔GM-IVH后同樣存在透明質(zhì)酸受體CD44的高表達(dá),隨時(shí)間進(jìn)展CD44表達(dá)逐漸降低,提示GM-IVH后腦組織中存在透明質(zhì)酸的積累,透明質(zhì)酸可與其受體CD44結(jié)合后共同參與GM-IVH后的繼發(fā)炎癥反應(yīng)。當(dāng)對(duì)GM-IVH早產(chǎn)兔給予側(cè)腦室注射透明質(zhì)酸酶后,發(fā)現(xiàn)TNF-a和CD44在相同時(shí)間段里(3天、7天)治療組中表達(dá)低于模型組,提示透明質(zhì)酸酶可以通過水解透明質(zhì)酸來抑制CD44的表達(dá)活性,繼而減輕GM-IVH后的繼發(fā)炎癥反應(yīng)。
[Abstract]:Objective : To study the expression of hyaluronic acid receptor CD44 and tumor necrosis factor ( TNF - a ) in brain tissue of premature infants . The results showed that the expression of CD44 in the brain tissue of premature rabbit was higher than that in the third day after birth , and the difference was statistically significant ( P0.05 ) . It was suggested that the expression of hyaluronic acid in the brain tissue was lower after GM - IVH . The expression of hyaluronic acid in the brain tissue was lower than that in the model group after GM - IVH was injected into the lateral ventricle .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.34

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1790253