本文選題：神經(jīng)膠質(zhì)瘤 + 3D水凝膠��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：目的:膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)發(fā)病率最高的腫瘤,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiform,GBM)惡性度最高,預(yù)后最差,GBM呈侵襲性生長,手術(shù)難以全切,殘余腫瘤復(fù)發(fā)率較高,是導(dǎo)致腫瘤難治性的主要原因之一。因而,抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移,成為治療膠質(zhì)瘤的重要策略。Rho蛋白屬于Ras超家族成員之一,在惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移方面發(fā)揮重要作用,Rac1和Rho A是Rho亞家族重要成員,分別介導(dǎo)間質(zhì)運(yùn)動和變形蟲樣運(yùn)動,是惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞兩種重要的侵襲遷移方式的主要調(diào)控因子。近期有研究通過劃痕實(shí)驗(yàn)抑制Rac1的活性可以降低細(xì)胞的遷移能力,然而在3D基質(zhì)中未見相關(guān)研究。本研究基于3D水凝膠模型,建立細(xì)胞三維培養(yǎng)環(huán)境,探討Rac1和Rho A在膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲遷移中的作用機(jī)制,分別抑制Rac1活性和Rho A信號通路,觀察間質(zhì)運(yùn)動和變形蟲樣運(yùn)動是否被抑制,細(xì)胞的侵襲遷移能力如何變換,以及兩種運(yùn)動形式是否發(fā)生轉(zhuǎn)換;同時(shí)抑制Rac1活性和Rho A信號通路,觀察細(xì)胞的運(yùn)動形式和侵襲遷移能力的改變,從而為膠質(zhì)瘤的抗侵襲遷移治療提供理論依據(jù)。方法:利用French數(shù)據(jù)庫分析Rac1和Rho A蛋白的表達(dá)情況與膠質(zhì)細(xì)胞瘤病人總生存率之間的關(guān)系,利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析Rac1和Rho A蛋白分別在低級別膠質(zhì)瘤(low grade glioma,LGG)和高級別膠質(zhì)瘤(high grade glioma,HGG)中的表達(dá)情況,分析二者之間的關(guān)系;利用免疫組化檢測Rac1和Rho A在非腫瘤性對照腦組織和人腦各級別膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中的表達(dá)水平;通過劃痕實(shí)驗(yàn)檢測經(jīng)NSC23766和Y27632抑制后細(xì)胞的遷移能力;在3D水凝膠中培養(yǎng)細(xì)胞,分別應(yīng)用NSC23766和Y27632處理細(xì)胞,通過激光共聚焦活細(xì)胞工作站觀察腫瘤細(xì)胞的三維形態(tài)及運(yùn)動形式轉(zhuǎn)換;應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察不同處理?xiàng)l件下整合素表達(dá)特征。利用3D趨化實(shí)驗(yàn),在活細(xì)胞工作站下觀察細(xì)胞的運(yùn)動趨化效應(yīng),利用軟件計(jì)算細(xì)胞運(yùn)動的速度、路程,描述細(xì)胞運(yùn)動軌跡,觀察不同處理?xiàng)l件下細(xì)胞的侵襲遷移能力變化。結(jié)果:通過French和TCGA數(shù)據(jù)庫分析,Rac1和Rho A表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病人總生存期呈負(fù)相關(guān)(p=1.6e 0.6),與腫瘤級別呈正相關(guān)(p0.05);免疫組化顯示Rac1和Rho A蛋白在非腫瘤性對照腦組織中低表達(dá),在各級別膠質(zhì)瘤中均有表達(dá),表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤級別成正相關(guān);在劃痕實(shí)驗(yàn)中,與對照組相比較,當(dāng)應(yīng)用NSC23766和Y27632及聯(lián)合應(yīng)用兩種抑制劑時(shí),細(xì)胞的遷移能力明顯受到抑制;在以3D水凝膠為基質(zhì)的細(xì)胞三維培養(yǎng)條件下,可以觀察到呈變形蟲樣運(yùn)動的類圓形細(xì)胞,也可觀察到呈間質(zhì)運(yùn)動的梭形的細(xì)胞;通過共聚焦活細(xì)胞工作站,可以觀察到部分細(xì)胞由梭形轉(zhuǎn)變?yōu)閹в型怀瞿遗莸念悎A形形態(tài),細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)-變形蟲運(yùn)動形式轉(zhuǎn)換(mesenchymal-amoeboid transition,MAT),部分細(xì)胞由類圓形轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮?細(xì)胞發(fā)生變形蟲-間質(zhì)運(yùn)動形式轉(zhuǎn)換(amoeboid-mesenchymal transition,AMT),發(fā)生MAT的細(xì)胞整合素表達(dá)降低,而發(fā)生AMT的細(xì)胞整合素表達(dá)增加;在活細(xì)胞工作站趨化實(shí)驗(yàn)中,NSC23766處理組與對照組相比較,細(xì)胞的運(yùn)動速度、路程均增加(P0.05),細(xì)胞的運(yùn)動能力反而增強(qiáng),說明細(xì)胞在單一抑制劑作用下,細(xì)胞由一種運(yùn)動形式轉(zhuǎn)換為另外一種速度更快的運(yùn)動形式;在相同條件下,與對照組相比,Y27632組細(xì)胞運(yùn)動速度、路程降低,細(xì)胞運(yùn)動能力相對減弱(P0.05),在NSC23766和Y27632聯(lián)合作用下,細(xì)胞的運(yùn)動速度、路程明顯降低(P0.05),細(xì)胞的運(yùn)動能力明顯減弱,沒有觀察到細(xì)胞形態(tài)改變。結(jié)論:1.Rac1和RhoA表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤總生存率呈負(fù)相關(guān),與膠質(zhì)瘤病理級別正相關(guān)。2.當(dāng)降低Rac1活性后,劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的遷移能力減弱,而3D趨化實(shí)驗(yàn)證實(shí)細(xì)胞的侵襲遷移能力增強(qiáng),因細(xì)胞在3D水凝膠中發(fā)生MAT。3.單一抑制Rac1或Rho A不能有效降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力,聯(lián)合抑制Rac1活性和Rho A信號通路可有效降低細(xì)胞的侵襲遷移能力,從而為膠質(zhì)瘤的抗侵襲遷移治療提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between the expression of Rac1 and RhoA in the invasion and migration of malignant glioma cells , and to investigate the relationship between the expression of Rac1 and RhoA in the invasion and migration of malignant glioma cells . 鍦，

本文編號：1752643