本文選題：Wilson病　切入點(diǎn)：ATP7B　出處：《鄭州大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：課題背景肝豆?fàn)詈俗冃?Hepatolenticular degeneration,HLD)是一種難治性的常染色體隱性遺傳病,該病伴隨典型的銅離子代謝障礙。1912年,由Wilson首次報(bào)告該病,因此肝豆?fàn)詈俗冃杂直环Q之為Wilson病(Wilson disease,WD),但目前導(dǎo)致該病出現(xiàn)銅代謝異常的分子機(jī)制仍不明確。肝豆?fàn)詈俗冃砸蚧A(chǔ)代謝障礙導(dǎo)致膽汁排銅明顯減少,肝臟中銅不能通過和α2球蛋白結(jié)合生成銅藍(lán)蛋白,導(dǎo)致血清中銅藍(lán)蛋白減少,多余的血清銅與組織中蛋白結(jié)合沉積在相應(yīng)的組織器官,進(jìn)而導(dǎo)致出現(xiàn)多種功能障礙。銅在肝臟、腦組織、腎臟、胰腺、皮膚、關(guān)節(jié)、心臟、角膜等器官均可沉積,造成相應(yīng)的組織器官損傷,其臨床表現(xiàn)多以肝臟損害和神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀為主。研究表明,早期肝豆?fàn)詈俗冃曰颊呤强梢灾委煹?但是晚期患者常因出現(xiàn)多器官不可逆損傷導(dǎo)致治療效果不理想。因此早期明確診斷,盡早治療就極其重要。但是由于該病常累及多器官多系統(tǒng),因此臨床表現(xiàn)多種多樣,目前尚無特異性診斷標(biāo)準(zhǔn),誤診率較高,因此總結(jié)肝豆?fàn)詈俗冃缘呐R床特點(diǎn),探討疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,將為該病的診斷提供重要的參考。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)制定的肝豆?fàn)詈俗冃缘脑\斷與治療指南(2008年),按照臨床表現(xiàn)對(duì)肝豆?fàn)詈俗冃赃M(jìn)行臨床分型,將肝豆?fàn)詈俗冃苑譃?.肝型;2.腦型;3.其它類型;4.混合型。按照臨床分型對(duì)該病進(jìn)行探討,可以更好的總結(jié)臨床病例,根據(jù)臨床表現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對(duì)疾病的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行總結(jié),有助于該病的診斷和治療。13q14 21號(hào)染色體上的P型ATP酶功能(Copper transport Ing P type ATPase,ATP7B)發(fā)生基因突變,是肝豆?fàn)詈俗冃缘母緳C(jī)制。A T P 7 B是轉(zhuǎn)運(yùn)銅的一類特殊的功能蛋白,如果編碼A T P 7 B的基因發(fā)生突變,導(dǎo)致翻譯的A T P 7 B蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)異常,進(jìn)而出現(xiàn)結(jié)合銅離子障礙,即銅藍(lán)蛋白合成減少,銅不能通過ATP7B跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)出體外。體內(nèi)多余的銅在諸如肝臟、腦組織、腎臟、胰腺、皮膚、關(guān)節(jié)等相應(yīng)的器官組織積聚,出現(xiàn)多種臨床表現(xiàn)。伴隨著醫(yī)療技術(shù)檢驗(yàn)手段和分子生物學(xué)的發(fā)展,基因的診斷方法也越來越多的應(yīng)用于多種遺傳病的診斷中,并且通過基因檢測可以發(fā)現(xiàn)多種疾病的致病基因。在臨床癥狀表現(xiàn)不典型患者、兒童及老年患者的診斷中,基因診斷技術(shù)就顯得尤為重要,基因診斷是肝豆?fàn)詈俗冃栽缙诖_診的最有效方法。通過探討,對(duì)研究肝豆?fàn)詈俗冃缘陌l(fā)病機(jī)制、疾病進(jìn)展、臨床治療以及預(yù)后轉(zhuǎn)歸有著及其重要的參考意義。近年來,關(guān)于肝豆?fàn)詈俗冃曰蛲蛔兒团R床表型關(guān)系的研究國內(nèi)外學(xué)者已進(jìn)行較多研究,但因肝豆?fàn)詈俗冃曰颊呋蛐投鄻?臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變,并且不同地域不同種族其臨床表現(xiàn)和基因突變類型均存在較大差異,因此目前尚無統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。目前肝豆?fàn)詈俗冃缘闹委熑砸运幬镏委煘橹?青霉胺作為銅離子螯合劑,具有療效肯定、藥源充足、廉價(jià)、使用方便等優(yōu)點(diǎn),因此是我國目前治療肝豆?fàn)詈俗冃缘闹饕幬镏�。根�?jù)基因突變的研究結(jié)果,觀察不同基因突變類型患者使用青霉胺治療的效果,可以為肝豆?fàn)詈俗冃詡�(gè)體化治療奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.根據(jù)肝豆?fàn)詈俗冃曰颊叩呐R床特點(diǎn),按照臨床分型進(jìn)行回顧性分析,提高對(duì)肝豆?fàn)詈俗冃缘脑\斷意識(shí),發(fā)現(xiàn)疾病進(jìn)展的規(guī)律,對(duì)不同臨床癥狀的肝豆?fàn)詈俗冃曰颊弑M早明確診斷。2.發(fā)現(xiàn)我國肝豆?fàn)詈俗冃曰颊吒哳l突變位點(diǎn)和新的基因突變位點(diǎn),為建立有效地基因篩查及早期診斷提供參考依據(jù)。3.研究我國肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧饕蛲蛔兾稽c(diǎn)的基因型與臨床表型的相關(guān)性,探討肝豆?fàn)詈俗冃缘陌l(fā)病機(jī)制,為肝豆?fàn)詈俗冃缘念A(yù)防、診斷、治療提供參。4.探討肝豆?fàn)詈俗冃圆煌蛲蛔冾愋蛯?duì)應(yīng)用青霉胺治療的差別,分析臨床治療效果是否與基因突變類型有相關(guān)性,為肝豆?fàn)詈俗冃詡�(gè)體化治療提供指導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)方法本課題共包括四部分內(nèi)容:第一章肝豆?fàn)詈俗冃?13例流行病學(xué)研究收集我院確診為肝豆?fàn)詈俗冃曰颊叩幕九R床資料,并收集整理統(tǒng)計(jì)相關(guān)檢驗(yàn)、檢查結(jié)果。根據(jù)臨床表現(xiàn)將肝豆?fàn)詈俗冃赃M(jìn)行臨床分型,將肝豆?fàn)詈俗冃苑譃楦涡�、腦型、其它類型、混合型。按照臨床分型對(duì)該病的首發(fā)癥狀、性別、血清銅、血清銅藍(lán)蛋白、24h尿銅、血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alan Ine am Inotra nsferase,ALT)、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)、Ⅲ型前膠原(precollagen typeⅢ,PCⅢ)、層黏蛋白(laminin,LN)、Ⅳ型膠原(collagenⅣ,CⅣ)的變化水平進(jìn)行探討。第二章WD基因突變位點(diǎn)的檢測與分析收集我院2013年5月—2015年5月神經(jīng)內(nèi)科就診治療的患者52例,均確診為肝豆?fàn)詈俗冃?選取50例無親緣關(guān)系的健康個(gè)體作為對(duì)照者,經(jīng)檢驗(yàn)24小時(shí)尿銅量、肝功能、血清銅藍(lán)蛋白濃度、K-F環(huán)檢查、腹部彩超等無異常,臨床排除肝豆?fàn)詈俗冃砸约捌渌卮蠹膊�。提取基因組DNA并進(jìn)行P CR擴(kuò)增,將PCR產(chǎn)物經(jīng)Qiaquick Spin柱(德國Qiagen公司)純化后,進(jìn)行雙向測序,對(duì)ATP7B基因的21個(gè)外顯子及其啟動(dòng)子序列進(jìn)行檢查,查找所檢樣品中ATP7B基因中所存在的多態(tài)性位點(diǎn)。第三章肝豆?fàn)詈俗冃曰颊呋蛐秃团R床表型關(guān)系的研究選取基因測序的52例WD患者為研究對(duì)象,收集上述患者的臨床資料,以該研究中突變頻率較高的第8外顯子Arg778Leu突變、第13號(hào)外顯子上Pro992Leu突變及突變類型作為基因型,將臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍(lán)蛋白、24小時(shí)尿銅、ALT、肝纖維化血清學(xué)結(jié)果作為臨床表型進(jìn)行比較。探討中國人WD患者高頻基因突變位點(diǎn)的基因型與臨床表型的相關(guān)性。第四章肝豆?fàn)詈俗冃圆煌蛲蛔冾愋颓嗝拱分委煼治鋈虢M病例包括40例首診的肝豆?fàn)詈俗冃曰颊?將患者分為Arg778Leu突變組和非Arg778Leu突變組,均使用青霉胺進(jìn)行驅(qū)銅治療,定期于治療后1、3、6、12月檢測:血清銅、血清銅藍(lán)蛋白、24小時(shí)尿銅、ALT、HA、PCIII、LN和IV-C,探討不同基因突變類型的治療效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果第一章肝豆?fàn)詈俗冃?13例流行病學(xué)研究1.入組病例包括肝型245例(47.8%),腦型180例(35.1%),其他類型35例(6.8%),混合型53例(10.3%)。以肝癥狀為首發(fā)癥狀者為271例(52.8%),以神經(jīng)系統(tǒng)首發(fā)癥狀為201例(39.2%),以其他癥狀為首發(fā)癥狀者為41例(8%)。2.該研究發(fā)現(xiàn),肝型、腦型與其他類型相比血清銅藍(lán)蛋白水平存在顯著差異;肝型、腦型、其他類型與混合型相比,血清銅藍(lán)蛋白的改變具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。混合型血清銅藍(lán)蛋白降低更為明顯。3.和腦型與混合型相比,肝型患者中血清ALT平均值顯著升高(P0.05)。4.HA、PCⅢ、LN、CⅣ在各臨床分型間均在顯著差異。其他類型的血清HA值與肝型、腦型和混合型存在顯著差異;血清PCⅢ檢測發(fā)現(xiàn),其他類型與肝型、腦型和混合型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清LN檢測發(fā)現(xiàn),腦型、其他類型、混合型和肝型相比,腦型與混合型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;血清CⅣ檢測,肝型、腦型與混合型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.肝纖維化或肝硬化各臨床分型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝型患者中82%的患者超聲檢查顯示肝纖維化或肝硬化,腦型、其他類型和混合型肝纖維化或肝硬化所占比例分別為:66%、43%、68%。因此肝型患者出現(xiàn)肝纖維化或肝硬化的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他類型的肝豆?fàn)詈俗冃曰颊摺５诙耊D基因突變位點(diǎn)的檢測與分析1.發(fā)現(xiàn)62個(gè)ATP7B變異位點(diǎn),其中23個(gè)為已知的致病突變位點(diǎn),6個(gè)為首次發(fā)現(xiàn)的錯(cuò)義、插入和缺失突變。2.第8、11、12和13外顯子為高頻率突變熱點(diǎn),并且堿基替換較其他突變類型更為常見,提示我們在WD患者人群中堿基替換是主要的突變類型。其中,位于第8外顯子2333GT檢出頻率最高(即Arg778Leu),達(dá)到47%。13號(hào)外顯子2975C→T位點(diǎn)突變頻率達(dá)22%。第三章肝豆?fàn)詈俗冃曰颊呋蛐秃团R床表型關(guān)系的研究1.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠥rg778Leu突變患者與非Arg778Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍(lán)蛋白、ALT、肝纖維化指標(biāo)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠵ro992Leu突變與非Pro992Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、24小時(shí)尿銅、血清銅和銅藍(lán)蛋白、肝纖維化指標(biāo)的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠥rg778Leu突變24小時(shí)尿銅水平低于非Arg778Leu突變患者(P0.05)。4.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠵ro992Leu突變患者其ALT水平低于非Pro992Leu突變組(P0.05)。第四章肝豆?fàn)詈俗冃圆煌蛲蛔冾愋颓嗝拱分委煼治?.青霉胺治療12個(gè)月后,Arg778Leu攜帶者24小時(shí)尿銅下降水平的更為明顯(P0.05)。2.青霉胺治療12個(gè)月后,Arg778Leu突變組的IV-C的下降更為明顯(P0.05)。3.青霉胺治療后Arg778Leu與血清銅、血清銅藍(lán)蛋白、ALT、HA、PCIII和LN均未見明顯相關(guān)性。結(jié)論1.各臨床分型相比ALT、HA、PCⅢ、LN、CⅣ的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,肝纖維化或肝硬化與臨床分型顯著相關(guān)。2.發(fā)現(xiàn)有62個(gè)ATP7B變異位點(diǎn),其中23個(gè)為已知的致病突變位點(diǎn),6個(gè)為首次發(fā)現(xiàn)的錯(cuò)義、插入和缺失突變。3.第8、12和13外顯子為我國人群高頻率突變位點(diǎn)。4.52例Arg778Leu突變24小時(shí)尿銅水平低于非Arg778Leu突變患者;Pro992Leu突變患者其ALT水平低于非Pro992Leu突變組。5.52例Arg778Leu突變患者與非Arg778Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍(lán)蛋白、ALT、肝纖維化指標(biāo)之間無顯著性差異。6.52例P ro992Leu突變與非Pro992Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、24小時(shí)尿銅、血清銅和銅藍(lán)蛋白、肝纖維化指標(biāo)之間無顯著性差異。7.青霉胺治療后12個(gè)月Arg778Leu突變組較非Arg778Leu突變組24小時(shí)尿銅下降的更為明顯;青霉胺治療后12個(gè)月Arg778Leu突變組較非Arg778Leu突變組IV-C的下降更為明顯。8.青霉胺治療后Arg778Leu突變組較非Arg778Leu突變組血清銅、血清銅藍(lán)蛋白、ALT、HA、PCIII和LN的改變未見明顯差異。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1564031