本文關鍵詞： 早產兔 生發(fā)基質-腦室內出血 動物模型 2 3-二羥基-6-硝基氨-磺酰苯喹喔啉 髓鞘堿性蛋白 微管相關蛋白-2　出處：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:生發(fā)基質-腦室內出血(germinal matrix-intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是早產兒最常見的腦損傷形式之一,GM-IVH占新生兒顱內出血中80%以上。在極低出生體重兒中GM-IVH的發(fā)生率在20%~25%,當體重在500~750g的早產兒發(fā)生GM-IVH的比例會上升至45%左右。研究表明,孕周越小、體重越低,GM-IVH的發(fā)生率越高。隨著我國圍產醫(yī)學的進步及新生兒重癥監(jiān)護技術的提高,早產兒、極早產兒、極低出生體重兒的出生率越來越高,伴隨而來的是,早產兒GM-IVH的發(fā)生率上升。GM-IVH多發(fā)生在孕周小于34周的早產兒,GM-IVH幸存患兒在后期隨訪中發(fā)現(xiàn)存在不同程度神經功能障礙、腦癱、認知障礙、行為缺陷等情況,嚴重影響早產兒的生存質量,給家庭、社會帶來沉重的負擔。因此,GM-IVH及其所致后遺癥是仍然是有待解決的重要問題。早產兒中樞神經系統(tǒng)發(fā)育不成熟,腦損傷機制復雜,腦損傷的發(fā)病機制之一是大量興奮性氨基酸分泌所致的興奮毒作用,谷氨酸是常見的興奮性氨基酸,發(fā)揮作用時必須與其受體結合,α-甲基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑基丙酸(AMPA)受體作為谷氨酸離子型受體之一,廣泛分布在海馬、大腦皮質、紋狀體和小腦中的膠質細胞和神經元上。腦損傷后,激活AMPA受體,谷氨酸結合位于少突膠質細胞及神經元表面的AMPA受體,誘發(fā)鈣超載,造成神經元細胞骨架蛋白降解、破壞,引起神經元損傷;作用于少突膠質細胞膜表面AMPA受體時,造成少突膠質細胞損傷、髓鞘形成障礙。2,3-二羥基-6-硝基氨-磺酰苯喹喔啉(NBQX)是AMPA受體的抑制劑,應用于GM-IVH患者,通過其抑制神經元及少突膠質細胞表面AMPA受體的表達,可否減輕神經元損害、保護少突膠質細胞,目前國內尚未研究報道。本研究通過已經建立的GM-IVH兔模型,探討(1)GM-IVH后髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)表達,檢測髓鞘損傷情況。(2)通過檢測微管相關蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)的表達,了解GM-IVH早產兔神經元損傷情況。(3)GM-IVH早產兔應用NBQX后,是否可以減輕GM-IVH后的脫髓鞘,以及發(fā)揮對神經元的保護作用。方法:1選取新西蘭孕兔,孕29天(足月孕32天),進行剖宮產,迅速取出幼兔。生后迅速給予保溫、奶粉喂養(yǎng),于生后3小時,給予一部分早產兔50%丙三醇腹腔注射,劑量為10ml/Kg。其余不給予任何處理。2生后24小時接受頭顱超聲檢查,觀察GM-IVH的發(fā)生情況。3將發(fā)生GM-IVH的早產兔隨機分為兩組,NBQX治療組(15只)和模型組(15只)。另取生后未給予任何處理的早產兔15只作為正常組。用劑量為10μL的NBQX對NBQX治療組進行前囟注射,對照組給予同等容積的生理鹽水。將NBQX治療組、模型組、正常組的早產兔隨機分為出生后3天、7天、14天三個亞組,按上述時間點給予處死,冰上剝離腦組織,一部分放入4%的多聚甲醛溶液中固定,供后期免疫組織化實驗使用。另一部分放置于-80℃冰箱中,供蛋白印跡試驗使用。4使用免疫組化的方法比較NBQX治療組、模型組、正常組中早產兔腦室周圍組織中微管相關蛋白-2(MAP-2)的表達情況。5使用蛋白印跡方法檢測NBQX治療組、模型組、正常組中早產兔腦室周圍組織中髓鞘堿性蛋白(MBP)的表達情況。6統(tǒng)計方法:采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件、Microsoft Excel2003進行統(tǒng)計學處理,計量資料以均數(shù)±標準差表示,檢驗方差齊性,多個樣本均數(shù)的比較采用LSD-t檢驗;若方差不齊采用秩和檢驗。檢驗水準定為0.05,P值0.05有統(tǒng)計學意義。結果:1成功復制了早產兔GM-IVH模型。對孕29天早產兔行剖宮產后獲得早產兔,通過組織樣本觀察后證實成功制備了早產兔GM-IVH模型。2腦組織中MBP的表達。用蛋白印跡實驗方法檢測腦組織中MBP的表達。出生后3天、7天、14天,正常組早產兔腦組織中MBP的表達量逐漸增加,三個時間點兩兩比較,3天和7天比較差異無統(tǒng)計學意義;3天和14天、7天和14天比較,差異有統(tǒng)計學意義。在3天、7天、14天時,模型組中MBP的表達量均低于正常組的表達量,差異有統(tǒng)計學意義。在NBQX治療組中,3天、7天、14天中MBP的表達量逐漸升高,3天與7天比較差異無統(tǒng)計學意義;3天與14天、7天與14天比較差異有統(tǒng)計學意義;在7天、14天時,NBQX治療組與模型組比較,MBP的表達差異有統(tǒng)計學意義。3腦組織中MAP-2的表達。應用免疫組化檢測腦組織中MAP-2的表達。MAP-2在正常組腦組織中排列整齊,成纖維狀,且隨著時間的延長,腦組織中MAP-2的表達增高,3天、7天、14天兩兩比較有統(tǒng)計學差異。模型組3天腦組織中MAP-2結構完整性較差,基本無染色,表達量降低;7天時腦組織中MAP-2的表達量稍有增高;14天時,腦組織中MAP-2排列相對完整,染色仍較淡,表達較前增強,模型組中任意兩時間點比較,MAP-2的表達差異有統(tǒng)計學意義。且模型組中MAP-2的表達量較正常組低,差異有統(tǒng)計學意義。NBQX治療組,3天、7天、14天表達量呈上升趨勢,任意時間點兩兩比較腦組織中MAP-2的表達,差異有統(tǒng)計學意義;在7天、14天時,同一時間點高于模型組的表達量,低于正常組的表達量,差異有統(tǒng)計學意義。結論:1早產兔發(fā)生GM-IVH后,腦組織中MBP的表達降低,提示GM-IVH后影響少突膠質細胞的成熟及髓鞘化進程。給予NBQX治療后,在一定程度上MBP的表達升高,提示NBQX干預有助于少突膠質細胞發(fā)育,改善預后。2早產兔發(fā)生GM-IVH后,腦組織中MAP-2的表達降低,提示GM-IVH后破壞神經元樹突結構完整性。給予NBQX治療后,在一定程度上MAP-2的表達升高,提示NBQX治療后神經元樹突結構相對完整,可能對神經元功能起到修復作用。
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【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743.34

【參考文獻】

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本文編號：1550028