本文關(guān)鍵詞： 帕金森病 神經(jīng)保護 deoxygedunin MPTP 帕金森病 天冬酰胺內(nèi)切酶 a-synuclein tau N368 帕金森病 AEP 魚藤酮 tau N368　出處：《華中科技大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分TrkB受體激動劑deoxygedunin對MPTP誘導的PD小鼠模型的保護作用及機制研究目的研究小分子酪氨酸受體激酶B (tyrosine receptor kinase B, TrkB)激動劑deoxygedunin對MPTP誘導PD小鼠模型的神經(jīng)保護作用。方法給予C57/BL6小鼠1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四羥吡啶(MPTP)腹腔注射(每次20mg/kg,2次/天,每次注射間隔2h)建立PD小鼠亞急性損傷模型。將36只8至9周大小的雄性C57/BL6小鼠隨機分為三組：正常組、PD組、deoxygedunin干預組(自造模開始deoxygedunin干預2周,5mg/kg/d, i.p.)。采用爬桿實驗評估MPTP小鼠的運動功能：酪氨酸羥化酶免疫組化評估deoxygedunin對MPTP小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體神經(jīng)纖維完整性的保護作用；免疫熒光雙標法檢測p-TrkB(Y816)與TH陽性神經(jīng)元的共表達情況;RT-PCR檢測中腦黑質(zhì)BDNF、a-synuclein及TrkB mRNA表達水平；Western blot法檢測MPTP小鼠中腦黑質(zhì)TH、BDNF、 p-TrkB/TrkB、p-MAPK/MAPK、p-Akt(S473)/Akt、caspase-3、Bcl-xl的表達變化。結(jié)果MPTP給藥后模型組C57/BL6小鼠體重隨給藥時間逐漸下降,deoxygedunin能夠緩解MPTP引起的小鼠體重下降。在MPTP小鼠爬桿實驗中,干預組小鼠頭轉(zhuǎn)向下時間(T-turn)及下至桿底時間(TLA)均較PD組小鼠明顯縮短(P0.05)。TH免疫組化發(fā)現(xiàn)經(jīng)干預組小鼠黑質(zhì)紋狀體酪氨酸羥化酶表達水平較PD模型組顯著升高(P0.05),同時中腦黑質(zhì)磷酸化TrkB的水平較PD模型組和正常對照組顯著升高(P0.05)。干預組和PD模型組小鼠黑質(zhì)BDNF mRNA表達較正常組升高,PD組a-synuclein mRNA表達較正常組和干預組升高,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05); deoxygedunin干預組TrkB mRNA表達水平較PD模型組和對照組顯著升高(P0.001)。在MPTP神經(jīng)毒性小鼠PD模型中,deoxygedunin干預組TH、 p-TrkB/TrkB、p-MAPK/MAPK、p-Akt (S473)/Akt、Bcl-xl蛋白表達均較PD模型組升高,caspase-3表達較對照組降低(P0.05)。結(jié)論deoxygedunin能夠改善MPTP神經(jīng)毒性小鼠模型的運動減少,可能通過激活TrkB受體及下游信號通路如PI3k/Akt及MAPK等,抑制凋亡信號通路,發(fā)揮多巴胺神經(jīng)元神經(jīng)保護作用。第二部分AEP特異性切割產(chǎn)物tau蛋白N368片段和a-synuclein在三種PD動物模型中的表達目的天冬酰胺內(nèi)切酶(asparagine endopeptidase, AEP)激活并特異性切割tauN368片段是AD病理改變中發(fā)現(xiàn)的新現(xiàn)象,黑質(zhì)紋狀體a-synuclein的磷酸化和異常聚集是帕金森病(Parkinson's disease,PD)的主要病理改變,本研究擬在3種經(jīng)典PD模型中檢測AEP特異性切割的tau N 368片段和a-synuclein蛋白在黑質(zhì)、紋狀體、海馬等不同腦區(qū)是否存在共表達。方法帕金森動物模型制備：(1)慢性MPTP PD小鼠模型：將20只8周齡C57 BL/6雄性小鼠,隨機分為對照組和模型組,給予模型組小鼠背部皮下注射MPTP(25mg/kg/次),每周2次,連續(xù)5周；對照組經(jīng)同樣注射方式給予同等體積的生理鹽水。(2)慢性小鼠魚藤酮PD模型：將20只C57BL/6雄性小鼠,隨機分為對照組和模型組,給予模型組小鼠背部皮下注射rotenone(1 mg/kg/d),連續(xù)注射50天;對照組按同樣方式給予同等體積的DMSO和生理鹽水混合液。(3)魚藤酮大鼠PD模型：將24只雌性SD大鼠,隨機分為對照組和模型組；給予模型組大鼠背部皮下注射rotenone (1.5mg/kg/day),連續(xù)注射5周：對照組按同樣方式給予同等體積的溶媒(DMSO和玉米油混合液)背部皮下注射。酪氨酸羥化酶免疫組化和熒光法評估不同PD模型黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的損傷情況;免疫熒光雙標法檢測三種PD模型海馬、皮質(zhì)、紋狀體和黑質(zhì)a-synuclein和tau N368共表達情況。采用免疫組織化學和Western blot方法檢測各組動物中腦黑質(zhì)、紋狀體、海馬磷酸化a-synuclein和tau N368表達水平。結(jié)果三種PD動物模型中腦黑質(zhì)致密部TH陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,提示PD模型造模成功。免疫熒光雙標法檢測發(fā)現(xiàn)魚藤酮誘導的PD小鼠模型中腦黑質(zhì)部位a-synuclein和tau N368存在共表達現(xiàn)象,且表達水平較對照組顯著增加,而在海馬和皮層中未發(fā)現(xiàn)顯著的共表達現(xiàn)象：魚藤酮PD小鼠模型海馬CA1區(qū)a-synuclein和tau N368表達與正常組相比未見明顯變化,而皮層tau N368表達較對照組明顯增多。MPTP誘導的小鼠PD模型黑質(zhì)和海馬CA1區(qū)tau N368表達增多,而在相同解剖部位的a-synuclein表達未見明顯變化;皮層的a-synuclein和tau N368表達組間均未見顯著變化。免疫組化提示魚藤酮誘導的PD大鼠模型紋狀體a-synuclein和tau N368表達均較對照組明顯增多,中腦黑質(zhì)磷酸化a-synuclein表達增多,同時黑質(zhì)和海馬tauN368表達組間未見顯著性差異。在模型組Western blot檢測同時發(fā)現(xiàn)三種PD動物模型紋狀體磷酸化a-synuclein (Ser129)和tau N368表達水平均較對照組增加,而在黑質(zhì)和海馬中表達存在不一致性：MPTP誘導的PD小鼠模型黑質(zhì)和海馬tau N368表達較對照組升高,而p-a-synuclein(S129)表達無明顯變化：魚藤酮誘導PD小鼠模型海馬p-a-synuclein(S129)和tau N368表達與對照組相比均未見明顯變化；魚藤酮誘導的PD大鼠模型海馬p-a-synuclein(S129)表達較對照組增加,而tau N368的表達無明顯變化。結(jié)論PD動物模型的中腦黑質(zhì)和紋狀體存在AEP激活后特異性切割tau蛋白現(xiàn)象,所特異性切割的tau蛋白片段N368和a-synuclein在紋狀體或黑質(zhì)存在共表達,提示AEP及其特異性切割作用可能參與了帕金森的發(fā)病過程。第三部分7,8-DHF通過調(diào)節(jié)AEP表達及其切割效應對魚藤酮誘導的PD大鼠模型的保護作用研究目的研究酪氨酸受體激酶B (tyrosine receptor kinase B, TrkB)激動劑7,8-DHF對魚藤酮誘導的PD大鼠模型的保護作用及作用機制。方法將36只9月齡的SD大鼠隨機分為三組：分布為照組(10只),模型組(13只),7,8-DHF干預組(13只)。給予PD模型組和干預組大鼠背部皮下注射魚藤酮(2mg/kg/day),連續(xù)注射5周：對照組按同樣方式給予同等體積的溶媒(如DMSO和玉米油混合液)背部皮下注射；自造模開始給予干預組大鼠7,8-DHF干預5周,5mg/kg/day, i.p.).采用曠場實驗評估PD大鼠的行為學：酪氨酸羥化酶TH免疫組織化學及免疫熒光評估大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元和紋狀體神經(jīng)纖維的完整性；免疫組化檢測黑質(zhì)p-TrkB (Y816)表達水平;Western blot法檢測各組大鼠中腦黑質(zhì)和紋狀體TH、BDNF、p-TrkB/TrkB、p-MAPK/MAPK、p-Akt (S473)/Akt、AEP、 p-tau(S396)、p-a synuclein (S129)、a-synuclein和tau N368的表達變化。結(jié)果魚藤酮造模后,曠場實驗組中模型組大鼠運動距離較正常組明顯減少,給予7,8-DHF干預可改善魚藤酮誘導的PD模型運動障礙。TH免疫熒光發(fā)現(xiàn)干預組大鼠黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)較模型明顯增多(P0.05),紋狀體TH免疫組織化學提示7,8-DHF能夠保護PD模型紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維的完整性。模型組大鼠黑質(zhì)和紋狀體的p-a-synuclein (Ser129)、p-tau(S396)、AEP表達及特異性切割產(chǎn)物tau N368表達均較正常組和干預組升高(P0.05)。與模型組相比較,干預組黑質(zhì)p-TrkB/TrkB及p-Akt/Akt水平顯著升高,p-MAPK/MAPK水平下降,紋狀體及黑質(zhì)AEP、 p-a-synuclein (Ser 129)、a-synuclein、p-tau(S396)及tau N368的表達減少(P0.05)。結(jié)論7,8-DHF能夠改善魚藤酮誘導PD模型大鼠的運動障礙,可能通過激活TrkB受體及下游信號通路Akt,降低MAPK、a-synuclein和tau的異常磷酸化水平,抑制AEP表達及其特異性切割作用,發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5;R-332

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張富興,黎振航,李金蓮,岑國欣 ,陳應城;Effects of different fixatives on the TrkB-immunoreactivity in rat brain[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2003年05期

2 高濤;王新軍;牛光明;;BDNF及其受體TrkB在顳葉癲沲組織中的表達及意義[J];中國實用神經(jīng)疾病雜志;2010年05期

3 李坤霞;李愛敏;張繼紅;;TrkB-BDNF信號通路對神經(jīng)母細胞瘤細胞分泌血管內(nèi)皮生長因子的影響[J];中國當代兒科雜志;2011年03期

4 常偉;潘立平;吳秋靜;宋毅軍;;miR-204對癲沲神經(jīng)元中BDNF/TrkB信號通路的影響[J];天津醫(yī)藥;2014年03期

5 林衛(wèi)紅;孟紅梅;呂玉丹;張淑琴;;BDNF及其受體TrkB在實驗性癲癇中的作用及意義探討[J];中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志;2007年01期

6 寧曉霞;師社會;胡海濤;張海英;劉濤;;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體TrkB在大鼠新皮質(zhì)的表達研究[J];陜西醫(yī)學雜志;2007年09期

7 盧金花;姜勁峰;王玲玲;陳麗智;;電針治療抑郁模型大鼠快速起效海馬區(qū)BDNF-TrkB機制研究[J];針灸臨床雜志;2011年05期

8 趙姝;韓大勇;王秀杰;;BDNF及其受體TrkB在不同程度癲癇患者顳葉或海馬中的差異性表達[J];黑龍江醫(yī)學;2011年09期

9 賴紅,趙�；�,曾亮,呂永利;老齡海馬的BDNF及TrkB mRNA表達與學習記憶的關(guān)系[J];解剖科學進展;2004年04期

10 ;Levetiracetam induces tyrosine kinase receptor B expression in SH-SY5Y cells[J];Neural Regeneration Research;2011年14期

相關(guān)會議論文 前10條

1 Qin Ou;Lina Liu;Guiming Zhu;Jinhua Piao;Didi Wang;;Effect of Nanometer preparation of dogwood on the BDNF/TrkB pathway of aging model rats induced by D-galactose[A];生命的分子機器及其調(diào)控網(wǎng)絡——2012年全國生物化學與分子生物學學術(shù)大會摘要集[C];2012年

2 姜佳美;周成芳;王春燕;唐小卿;;BDNF-TrkB pathway mediates the protection of hydrogen sulfide against formaldehyde-induced neurotoxicity by downregulation of ALDH2[A];湖南省生理科學會2013年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2013年

3 賴紅;趙海花;曾亮;呂永利;;老齡海馬的BDNF及TrkB mRNA表達與學習記憶的關(guān)系[A];中國解剖學會第八屆組織學與胚胎學專業(yè)青年研討會論文集[C];2004年

4 曲靜;陳暢;;組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(tTG)抑制神經(jīng)營養(yǎng)因子受體TrkB的降解[A];第十次中國生物物理學術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

5 陳暢;;tTG在SH-SY5Y細胞分化中對TrkB的調(diào)控作用[A];中國細胞生物學學會2005年學術(shù)大會、青年學術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

6 陳暢;;tTG在SH-SY5Y細胞分化中對TrkB的調(diào)控作用[A];第一屆全國腦與認知科學學術(shù)研討會論文集[C];2005年

7 李玲;祝明潔;陳峰;劉英;孫佳明;連娣;;TrkB受體對BDNF輔佐治療肺炎鏈球菌腦膜炎后的反應[A];中華醫(yī)學會第十七次全國兒科學術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2012年

8 陳金蘭;陳燕惠;陳珊;王勇;;早期環(huán)境對BDNF及其受體TrkB表達和腦發(fā)育的影響[A];中華醫(yī)學會第十七次全國兒科學術(shù)大會論文匯編（下冊）[C];2012年

9 鄧穎;張春虎;胡隨瑜;張海男;黃熙;范榮;王楊;;柴胡疏肝散對抑郁模型大鼠海馬、杏仁核、額葉BDNF及其受體TrkB的影響[A];第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論研究學術(shù)研討會暨第二屆湖南省中西醫(yī)結(jié)合學會肝病專業(yè)學術(shù)年會論文集[C];2010年

10 張春虎;鄧穎;胡隨瑜;張海男;程田力;;柴胡疏肝散對抑郁模型大鼠海馬、杏仁核、額葉BDNF及其受體TrkB的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學會精神疾病專業(yè)委員會第十屆學術(shù)會議論文集[C];2010年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 姜虹;酪氨酸激酶受體B在冠心病中的作用及機制研究[D];山東大學;2015年

2 孔淑貞;GABA遞質(zhì)系統(tǒng)和BDNF-TrkB通路下調(diào)及cofilinrod形成在癲癇發(fā)作中的作用機制研究[D];復旦大學;2014年

3 楊海麗;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)及其受體(TrkB)對小鼠體重和能量消耗的調(diào)控作用[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

4 吳俁;突觸活性通過APPL1介導的TrkB內(nèi)體樹突逆向運輸調(diào)控核內(nèi)ERK/CREB信號通路的機制研究[D];浙江大學;2017年

5 聶淑科;TrkB受體激動劑對帕金森病動物模型的保護作用及機制研究[D];華中科技大學;2016年

6 趙玲;神經(jīng)元活性調(diào)控TrkB受體細胞膜表面插入機制的研究[D];山東大學;2009年

7 范萌;受體型酪氨酸激酶TrkB通過抗脫落凋亡作用參與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的分子機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2014年

8 段珊;JIP 3介導TrkB受體順軸突轉(zhuǎn)運及增強BDNF引發(fā)的信號通路激活的功能研究[D];山東大學;2011年

9 李學智;RET和TrkB在神經(jīng)元膜表面分布水平不同以及神經(jīng)元活性依賴的RET膜表面插入的機制研究[D];山東大學;2012年

10 周柳青;大鼠單側(cè)迷路切除術(shù)后BDNF-TrkB信號在小腦前庭通路中變化的研究[D];華中科技大學;2013年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 劉挺;A549細胞中TrkB激活的調(diào)控機制研究[D];山東大學;2015年

2 張中偉;豐富環(huán)境對HIBD大鼠學習記憶能力及海馬CA1區(qū)TrkB、p-Akt的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2016年

3 郭云云;UCHLl對TrkB的去泛素化調(diào)節(jié)及其在學習記憶中的作用[D];山東大學;2016年

4 姚遠新;TrkB在腎透明細胞癌中的表達及功能研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2016年

5 王迎春;BDNF/TrkB通路抑制劑K252a體外抗卵巢癌機制的實驗研究[D];華北理工大學;2016年

6 黃靖云;管灸對家兔損傷面神經(jīng)修復再生及其BDNF/TrkB表達的影響[D];成都中醫(yī)藥大學;2016年

7 吳玉珊;補虛化瘀法對產(chǎn)后抑郁模型大鼠海馬ERα、ERβ、BDNF、TrkB表達作用機理研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2016年

8 趙君焱;TrkB受體激動劑7,8-DHF治療左旋多巴誘發(fā)帕金森病異動癥大鼠的實驗研究[D];蘇州大學;2016年

9 陳斯韻;BDNF-TrkB通路對心臟微血管內(nèi)皮細胞的影響[D];暨南大學;2010年

10 王玨;神經(jīng)元活性對TrkB受體再循環(huán)的調(diào)節(jié)作用及其機制研究[D];山東大學;2012年

，

本文編號：1479612