本文關鍵詞： 載脂蛋白E 星形膠質細胞 基質金屬蛋白酶-9 基質金屬蛋白酶組織抑制劑-1 血腦屏障　出處：《廣西醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的探討載脂蛋白E(ApoE)對星形膠質細胞基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)表達的作用及機制。方法體外培養(yǎng)C57BL/6J種屬的ApoE基因敲除型(ApoE-/-)和野生型(WT)乳鼠的星形膠質細胞。用抗星形膠質纖維酸性蛋白(Anti astrocyte acidic protein,GFAP)抗體鑒定星形膠質細胞純度,用抗MMP-9抗體檢測星形膠質細胞以確定其定性表達MMP-9。將ApoE-/-和WT的星形膠質細胞分別分為對照組、活化組、抗體組(分為“活化組+抗TNF-α”、“活化組+抗IL-12”、“活化組+抗IL-6”和“活化組+抗IFN-γ),對照組不進行任何干預,活化組加百日咳毒素(PTX)、熱滅活的結核分枝桿菌H37Ra刺激,在活化組的基礎上設置抗體組,抗體組為4種不同處理,分別加入抗TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ抗體,以抑制其相應的炎癥因子。用ELISA方法檢測對照組、活化組及抗體組的4個亞組中MMP-9、TIMP-1濃度,以確定活化組相對于對照組、抗體組的4個亞組相對于活化組的MMP-9和TIMP-1濃度變化情況;接著檢測三組培養(yǎng)液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ炎癥因子的濃度,其中抗體組根據(jù)加入不同抗體的情況,只對抗體對應的炎癥因子進行檢測。結果ApoE-/-和WT的星形膠質細胞均定性表達MMP-9。ApoE-/-和WT的星形膠質細胞活化組相對于對應對照組MMP-9的濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),抗體組中的4個亞組相對于活化組則明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而TIMP-1的濃度分別在ApoE-/-和WT的星形膠質細胞各種情況之間沒有明顯差異,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);ApoE-/-和WT的星形膠質細胞的活化組相對于對照組炎癥因子濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而加入抗體干預后的4個亞組,抗體組的4個亞組相對于活化組其對應的炎癥因子濃度均明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),ApoE-/-乳鼠的活化組的炎癥因子濃度均高于WT乳鼠,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論ApoE可通過調節(jié)星形膠質細胞分泌炎癥因子影響MMP-9的表達,從而影響血腦屏障的完整性。ApoE、炎癥因子、MMP-9三者之間的關系可以作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病防治的新的切入點。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of apolipoprotein (ApoE) on matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in astrocytes. Methods in vitro culture of C57BL / 6J species of ApoE gene knockout type ApoE-r-) and wild type WTA). Astrocytes of neonatal rats. Anti astrocyte acidic protein was treated with anti-astrocyte fibrillary acidic protein (AFAP). GFAP antibody was used to identify the purity of astrocytes. The astrocytes of ApoE-r- and WT were divided into control group and activated group respectively by detecting astrocytes with anti MMP-9 antibody to determine the qualitative expression of MMP-9. The antibody group was divided into three groups: "activated group anti-TNF- 偽", "activated group anti-TNF- 偽", "activated group anti-TNF- 偽", "activated group anti-#en1#" and "activated group anti-IFN- 緯". The activated group was stimulated with pertussis toxin PTXX, and the heat-inactivated Mycobacterium tuberculosis H37Ra was stimulated. The antibody group was set up on the basis of the activated group. The antibody group was treated with four different treatments and anti-TNF- 偽 was added respectively. IL-12, IL-6 and IFN- 緯 antibodies were used to inhibit the corresponding inflammatory cytokines. MMP-9 was detected by ELISA in four subgroups of control group, activated group and antibody group. In order to determine the concentration of MMP-9 and TIMP-1 in the activated group and the four subgroups of the antibody group relative to the activated group, the concentration of MMP-9 and TIMP-1 in the activated group and the antibody group were determined. Then the concentration of TNF- 偽 IL-12 IL-6 IFN- 緯 inflammatory factor in the three groups was detected, and the antibody group was based on the addition of different antibodies. Results both ApoE-r- and WT astrocytes qualitatively expressed MMP-9.ApoE-r- and WT's astrocyte activation group compared with the control group. The concentration of MMP-9 in the control group was significantly increased. The difference was statistically significant (P 0.05), and the four subgroups in the antibody group were significantly lower than those in the activated group (P 0.05). However, there was no significant difference in the concentration of TIMP-1 between ApoE-r- and WT astrocytes, but the difference was not statistically significant (P 0.05). The concentration of inflammatory cytokines in ApoE-r- and WT activated astrocytes was significantly higher than that in control group (P 0.05). The concentration of inflammatory cytokines in the four subgroups of the antibody group was significantly lower than that in the activated group (P 0.05). The concentrations of inflammatory cytokines in activated group were higher than those in WT group. Conclusion ApoE can affect the expression of MMP-9 by regulating the secretion of inflammatory factors by astrocytes, thus affecting the integrity of blood-brain barrier. The relationship between MMP-9 and MMP-9 may be a new entry point for the prevention and treatment of demyelinating diseases in the central nervous system.
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R744.51

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