本文關(guān)鍵詞：新生期驚厥腦損傷中驚厥急性期瘦素干預(yù)作用及機(jī)制初探

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【摘要】：目的:探討驚厥急性期瘦素干預(yù)對三氟乙醚誘導(dǎo)新生期大鼠長程反復(fù)驚厥遠(yuǎn)期神經(jīng)行為、學(xué)習(xí)記憶能力損傷的影響和分子機(jī)制。方法:7日齡(P7)的Sprague-Dawley(SD)大鼠共40只,隨機(jī)分為四組(n=10只/組),即:單純對照組(CON組)、瘦素對照組(CON+LEP組)、單純驚厥組(RS組)及瘦素驚厥組(RS+LEP組)。CON組每日予正常喂養(yǎng);RS組喂養(yǎng)同CON組,另連續(xù)7日,每日吸入三氟乙醚誘發(fā)驚厥發(fā)作一次,一次持續(xù)30min;RS+LEP組操作同RS組,但在每日驚厥后一小時(shí)腹腔注射4mg/kg瘦素;CON+LEP組除不吸入三氟乙醚外,操作同RS+LEP組。于P23、P30分別進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評分(平面翻正反射測試、懸崖回避反射測試、負(fù)向趨地反射測試、前肢懸吊測試)。于P23、P30分別進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn)測試。于P27-P33期間行Morris水迷宮測試。于P34取腦組織標(biāo)本,用Neo-Timm’s染色法檢測海馬苔蘚纖維發(fā)芽情況,免疫蛋白印跡技術(shù)檢測大腦皮層及海馬Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2比值、Cathepsin E、P53的表達(dá)。結(jié)果:1.神經(jīng)行為學(xué)評分顯示:RS組(P23、P30)平面反正反射、懸崖回避反射、負(fù)向趨地反射時(shí)間較CON組明顯延長(P㩳0.05);RS+LEP組(P23、P30)平面反正反射、懸崖回避反射、負(fù)向趨地反射時(shí)間趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05)。RS組(P23、P30)前肢懸吊時(shí)間較CON組明顯縮短(P㩳0.05);RS+LEP組(P23)前肢懸吊時(shí)間趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05)。2.曠場實(shí)驗(yàn)顯示:(1)RS組(P23、P30)延遲時(shí)間較CON組明顯延長(P0.05);RS+LEP組(P23、P30)延遲時(shí)間趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)RS組(P23、P30)水平得分較CON組明顯降低(P0.05);RS+LEP組(P23、P30)水平得分趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(3)RS組(P23、P30)垂直得分較CON組明顯降低(P0.05);RS+LEP組(P23、P30)垂直得分趨于正常較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(3)RS組(P23、P30)開場得分較CON組明顯降低(P0.05);(4)RS+LEP組(P23、P30)開場得分趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示:(1)逃避潛伏期:從P28至P32,四組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短,RS組(P29、P30、P31、P32)逃避潛伏期較CON組明顯延長(P㩳0.05);RS+LEP組逃避潛伏期趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05)。(2)空間探索測試:RS組(P34)穿越平臺(tái)次數(shù)較CON組明顯減少(P㩳0.05);RS+LEP組(P34)穿越平臺(tái)次數(shù)趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05)。4.Neo-Timm’s染色結(jié)果顯示:RS組CA3區(qū)及海馬齒狀回苔蘚纖維發(fā)芽程度較CON組明顯增加(P㩳0.05);RS+LEP組CA3區(qū)及海馬齒狀回苔蘚纖維發(fā)芽程度趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05)。5.Western blot結(jié)果顯示:(1)RS組皮層組織中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表達(dá)量較CON組明顯增高(P㩳0.05);RS+LEP組皮層組織中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表達(dá)量趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05)。(2)RS組海馬組織中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表達(dá)量較CON組明顯增高(P㩳0.05);RS+LEP組海馬組織中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E表達(dá)量趨于正常,較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05)。結(jié)論:1.急性期瘦素干預(yù),能顯著改善新生期長程反復(fù)驚厥所致遠(yuǎn)期神經(jīng)行為及學(xué)習(xí)記憶能力損傷,抑制海馬齒狀回及CA3區(qū)苔蘚纖維異常發(fā)芽,具有神經(jīng)保護(hù)作用。2.急性期瘦素干預(yù)可抑制新生期驚厥所致遠(yuǎn)期海馬和大腦皮層自噬信號(hào)通路相關(guān)蛋白Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53的過表達(dá)。3.本研究提示:驚厥急性期瘦素干預(yù)可能以自噬信號(hào)通路為靶點(diǎn)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R720.597;R742

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