發(fā)布時(shí)間：2017-11-14 05:07

  本文關(guān)鍵詞：大自噬在小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥及多巴胺神經(jīng)元損傷中的作用

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【摘要】：目的:大自噬在小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥及多巴胺神經(jīng)元損傷中的作用。方法:以BV2細(xì)胞和原代小膠質(zhì)細(xì)胞為研究對(duì)象,采用腫瘤壞死因子(TNF-α)和細(xì)菌脂多糖(LPS)建立細(xì)胞炎癥模型。第一部分:采用Western blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3(microtubule-associated protein light chain 3)、p62及Beclin1的表達(dá)水平;Q-PCR法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞M1和M2表型marker的m RNA水平的變化;第二部分:采用定量和逆轉(zhuǎn)錄PCR(Quantitative and reverse transcription PCR)檢測(cè)M1表型marker(i NOS、IL-1β)以及M2表型marker(Arginase、Ym1/2)m RNA水平的變化;用研究自噬的工具藥(雷帕霉素,白藜蘆醇,3甲基腺嘌呤)、血清剝奪和敲減自噬相關(guān)基因Atg5,Q-PCR法檢測(cè)M1及M2表型marker m RNA水平的變化;第三部分:將原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)的上清以1:2的比例和神經(jīng)元培養(yǎng)基混合后,和原代中腦神經(jīng)元共同培養(yǎng)24h,通過(guò)CCK8檢測(cè)不同組別原代中腦神經(jīng)元細(xì)胞的活力,并通過(guò)免疫熒光以MAP-2標(biāo)記神經(jīng)元觀察神經(jīng)元突起的變化。結(jié)果:第一部分:TNF-α(1ng/ml和5ng/ml)作用于小膠質(zhì)細(xì)胞可以使自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1、p62升高(P0.05),激活自噬;TNF-α(5ng/ml)作用于小膠質(zhì)細(xì)胞,可以使小膠質(zhì)細(xì)胞M1 marker(i NOS、IL-1β)的m RNA水平升高(P0.05),而M2marker(Arginase、Ym1/2)的m RNA水平下降(P0.05)。第二部分:在TNF-α(5ng/ml)和LPS(100ng/ml)作用于小膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞模型上,用研究自噬的工具藥上調(diào)自噬,可以發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞M1 marker(i NOS、IL-1β)的m RNA水平下降(P0.05)而M2 marker(Arginase、Ym1/2)的m RNA水平升高(P0.05);而下調(diào)自噬,觀察到相反的變化。第三部分:通過(guò)CCK8檢測(cè)神經(jīng)元活力發(fā)現(xiàn),和單獨(dú)TNF-α作用組的小膠質(zhì)細(xì)胞上清共培養(yǎng)后神經(jīng)元活力下降;神經(jīng)元和抑制自噬組的小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)上清共培養(yǎng)后,中腦神經(jīng)元活力下降更明顯;同樣和抑制自噬組的小膠質(zhì)細(xì)胞上清共培養(yǎng),中腦神經(jīng)元的突起明顯的縮短;與增強(qiáng)自噬的小膠質(zhì)細(xì)胞上清共培養(yǎng)觀察到相反的變化。結(jié)論:大自噬可以調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥并且增強(qiáng)自噬觀察到小膠質(zhì)細(xì)胞向M2表型趨化,并減弱小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)中腦損傷元的損傷作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.5

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本文編號(hào)：1183965