本文關鍵詞：經(jīng)鼻rhEPO對慢性腦缺血大鼠行為學及神經(jīng)元凋亡的影響

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【摘要】：目的:觀察人重組促紅細胞生成素(rh EPO)對大鼠慢性腦缺血后行為學及神經(jīng)元凋亡的影響,探索rh EPO在慢性腦缺血大鼠神經(jīng)保護作用的機制。方法:將60只健康雄性SD大鼠,隨機分為假手術組,2VO組(雙側頸總動脈結扎),2VO+rh EPO組,2VO+rh EPO+AG490組(JAK2的特異性拮抗劑),2VO+AG490組(n=12)。采用雙側頸總動脈結扎法(2VO)建立永久性慢性腦缺血模型。造模3天后給藥,各組分別腹腔注射DMSO(AG490的溶媒)或AG490(5mg/kg),30min后鼻腔緩慢注入生理鹽水或rh EPO(150U/125μl),每周1次,共8次。第8次給藥結束24小時后行Morris水迷宮實驗測試大鼠空間學習和記憶能力。行為學實驗結束后,取標本分別進行HE染色觀察神經(jīng)元形態(tài)學變化;免疫組化法檢測JAK2,P-JAK2(Tyr1007 1008),STAT3,P-STAT3(Tyr705),Bcl-2,Bax蛋白的表達水平;原位末端標記法(TUNEL)法檢測凋亡細胞數(shù);實時定量RT-PCR檢測Bcl-2,Bax的m RNA的表達水平。結果:1.Morris水迷宮實驗測試結果:評價大鼠學習并獲取空間信息的能力和空間記憶能力。(1)定位航行實驗:實驗檢測到訓練期間大鼠平均速度無顯著差異,且每天各組之間比較無明顯差異。隨著訓練日期增加,5組大鼠平均逃避潛伏期明顯縮短,差異具有統(tǒng)計學意義(F=23.648,p0.0001);2VO+rh EPO組逃避潛伏期較2VO組明顯縮短,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),與假手術組比較差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);2VO+rh EPO+AG490組逃避潛伏期較2VO+rh EPO組延長,從第二天開始兩者差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2VO組,2VO+rh EPO+AG490組,2VO+AG490組逃避潛伏期差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。(2)空間探索實驗:2VO+rh EPO組目標象限停留時間與穿越平臺次數(shù)較2VO組均明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),與假手術組比較差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。2VO+rh EPO+AG490組目標象限停留時間與穿越平臺次數(shù)均較2VO+rh EPO明顯縮短,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2VO組,2VO+rh EPO+AG490組,2VO+AG490組目標象限停留時間、穿越平臺次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。2.HE染色結果顯示:假手術組神經(jīng)元形態(tài)學未見明顯缺血性改變,細胞結構緊密,排列整齊。2VO組神經(jīng)元缺失較多,殘留的神經(jīng)細胞邊緣模糊,排列松散不規(guī)則,胞漿皺縮,邊緣出現(xiàn)空泡,核深染,核固縮、核溶解。2VO+rh EPO組神經(jīng)元形態(tài)學有輕微改變,排列較整齊。2VO組,2VO+rh EPO+AG490組,2VO+AG490組,神經(jīng)元形態(tài)學改變類似。3.免疫組化及實時定量RT-PCR的結果:(1)與假手術組比較,2VO組中P-JAK2和P-STAT3表達增強,上調(diào)Bcl-2、Bax的表達(p0.05)。(2)與2VO組比較,2VO+rh EPO組增強P-JAK2、P-STAT3蛋白的表達,并上調(diào)Bcl-2的表達和下調(diào)Bax的表達(p0.05)。(3)與2VO+rh EPO組比較,2VO+rh EPO+AG490組可抑制EPO誘導的P-JAK2、P-STAT3的表達,下調(diào)Bcl-2的表達和上調(diào)Bax的表達(p0.05)。(4)2VO+AG490組中P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax的表達與2VO組和2VO+rh EPO+AG490組組間比較無統(tǒng)計學差異(p0.05)。4.TUNEL結果:造模后各組陽性細胞數(shù)均較假手術組增多,各組間比較差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論:rh EPO可能通過激活JAK2/STAT3信號轉導通路,促進Bcl-2上調(diào)和Bax下調(diào),減緩慢性腦缺血大鼠神經(jīng)細胞凋亡,從而改善慢性腦缺血大鼠的認知功能。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳濤;章軍建;余芬;詹雪春;;促紅細胞生成素對慢性腦缺血大鼠空間學習記憶能力的影響[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2006年02期

2 姜春娟;許倩;徐凱;代海洋;吳文娟;張追陽;;EPO干預后大鼠腦缺血再灌注區(qū)域STAT1和STAT3蛋白表達與細胞凋亡[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;2013年10期

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