本文關鍵詞：誘導干細胞向神經(jīng)細胞分化的中藥單體化合物的篩選及應用研究

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【摘要】：腦缺血是嚴重危害人類健康的常見腦血管疾病,腦缺血所致神經(jīng)功能損傷的根本原因是由腦損傷引起的神經(jīng)細胞死亡或凋亡。因此,減輕腦缺血后神經(jīng)功能損傷和促進神經(jīng)功能恢復是治療腦缺血的重點。腦內(nèi)神經(jīng)元的再生能力極差,中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后,恢復神經(jīng)功能非常困難。雖然大腦內(nèi)有神經(jīng)干細胞,這些神經(jīng)干細胞可以分化成神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞等神經(jīng)細胞,但神經(jīng)干細胞存在的部位和數(shù)量有限,將神經(jīng)干細胞用于神經(jīng)功能損傷修復存在局限性。骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone-Marrow Mesenchymal Stem Cells, BMSCs)是來自成體的非造血干細胞,具有自我更新和分化能力。研究發(fā)現(xiàn),體外在特定培養(yǎng)條件下,骨髓間充質(zhì)干細胞可向神經(jīng)干細胞、神經(jīng)元以及少突膠質(zhì)細胞等神經(jīng)細胞分化,這為神經(jīng)損傷后修復以及再生提供了有利的證據(jù)。中藥治療腦缺血病變(中風及其后遺癥)已有數(shù)千年歷史并且療效確切,從這個寶貴的資源庫中挖掘高效的中藥單體化合物或其單體復方以誘導BMSCs向神經(jīng)細胞分化,對開發(fā)治療腦缺血藥物并闡明其作用機理具有重要的臨床和理論意義。我們課題組前期構建了一種用于腦缺血藥物篩選的細胞模型,該細胞含調(diào)控熒光素酶基因表達的質(zhì)粒,當用藥物刺激該細胞時,如果熒光素酶表達上調(diào),則表明該藥物具有促進基因表達的功效,這使得我們可以快速、定量篩選具有促神經(jīng)生長作用的中藥單體或復方。本研究首先利用細胞模型對6種中藥單體進行基因表達上調(diào)劑的初篩；再利用初篩陽性的化合物誘導BMSCs,采用實時熒光定量PCR和免疫熒光技術檢測五種神經(jīng)細胞標志物的mRNA及蛋白表達情況,從而判斷陽性化合物能將BMSC誘導為何種神經(jīng)細胞。通過初篩,我們獲得了2種對基因轉錄有激活作用的中藥單體；再用初篩的2種中藥單體化合物在不同時間段、不同濃度誘導處理大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(rMSCs)。實時熒光定量PCR結果表明,用同一時間段不同濃度誘導rMSCs后,五種神經(jīng)細胞標志物的mRNA表達具有一定的藥物劑量依賴性；分別用3μM,10μM濃度誘導處理rMSC時,5號,6號化合物對上述五種mRNA表達都有上調(diào),且誘導處理72h后,mRNA表達量第一次達到高峰。隨后,在用免疫熒光技術檢測這五種神經(jīng)細胞標志蛋白的表達時,發(fā)現(xiàn)rMSCs誘導處理72h后,兩種蛋白有陽性表達。由此可以初步判斷,化合物5和6具有一定的誘導rMSCs向神經(jīng)細胞分化的潛能。本研究篩選出2種中藥單體化合物能夠誘導rMSCs向神經(jīng)細胞分化,這為從中藥中大規(guī)模篩選更加高效的治療腦缺血的單體化合物或復方提供了良好范例,也為進一步闡釋這兩種化合物的功效和分子機理提供了支持。
【學位授予單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R743

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本文編號：1155005