本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)母細胞瘤表皮生長因子受體表達部位異質(zhì)性與腫瘤侵襲性的關(guān)系

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【摘要】：目的探討表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)與C6膠質(zhì)細胞瘤侵襲的關(guān)系以及GBM侵襲性的部位差異。方法為了確定C6膠質(zhì)瘤細胞中表皮生長因子受體表達水平對細胞侵襲及遷移能力的影響,應(yīng)用細胞侵襲實驗及細胞劃痕實驗檢測培養(yǎng)基中添加表皮生長因、使用吉非替尼阻斷表皮生長因子受體與外源EGF結(jié)合以及對照組C6膠質(zhì)瘤細胞的體外侵襲性及遷移性,所得數(shù)據(jù)行單因素方差分析進行統(tǒng)計學分析。采用立體定向技術(shù),于SD大鼠右側(cè)尾狀核接種C6膠質(zhì)瘤細胞系,構(gòu)建大鼠原位膠質(zhì)瘤模型。觀察大鼠接種后一般情況,體重變化,神經(jīng)功能評分(Bederson評分)。接種后第28天處死大鼠進行灌注取腦制作組織切片,HE染色觀察大鼠膠質(zhì)瘤的細胞形態(tài)。確定C6膠質(zhì)母細胞瘤原位模型構(gòu)建是否成功。腫瘤及腦組織切片行波形蛋白(vimentin)、微管蛋白(tubulin)及表皮生長因子受體(EGFR)的免疫組織化學及免疫熒光染色,觀察此三種蛋白的表達位置,應(yīng)用Image-Proplus 6.0軟件對三種蛋白的免疫組化切片中腫瘤不同部位及正常腦組織進行光密度值(optical density,OD)測量,并行單因素方差分析,比較每種蛋白不同區(qū)域的表達差異。結(jié)果在細胞侵襲實驗中24小時后“EGF”組、“吉非替尼+EGF”組及空白組穿過基質(zhì)膠的C6細胞數(shù)分別為:74±7個、52±8個、30±8個。數(shù)據(jù)經(jīng)單因素方差分析,兩兩比較,其P值均0.001,三組各自穿過基質(zhì)膠的細胞數(shù)共同比較,F=73.59,P0.001,存在顯著差異。細胞劃痕實驗中,24小時“EGF”組、“吉非替尼+EGF”組及空白組的細胞遷移的距離分別為:5093.33±1662.24mm、1310.00±570.00mm及1623.33±515.01mm。36小時“EGF”組、“吉非替尼+EGF”組及空白組的細胞遷移的距離分別為:12966.67±2365.51mm、2340.00±841.49mm及4300±840.18mm。兩時間點遷移距離經(jīng)單因素方差分析,F值分別為11.83及41.06,P值均0.05。除空白組與“吉非替尼+EGF”組比較,兩時間點的P0.05,無統(tǒng)計學差異外,其余兩兩比較P均0.05。說明加入外源EGF,激動細胞表面EGFR后,C6細胞侵襲和遷移能力得到了明顯提高,而阻斷激動后可抑制C6細胞的侵襲和遷移能力。大鼠接種術(shù)后,假手術(shù)組大鼠一般狀況較前無明顯改變,Bederson評分0分。接種組大鼠于實驗終止時體重較術(shù)前明顯減輕,實驗終止時大鼠Bederson評分均為3分。大鼠腦組織大體標本可見腫瘤呈浸潤性生長,腫瘤中心可見出血壞死。HE染色鏡下可見膠質(zhì)瘤細胞長梭形緊密排列,瘤的外周部分區(qū)域可見典型的柵欄樣壞死區(qū)域。證實大鼠原位膠質(zhì)母細胞瘤模型構(gòu)建成功。波形蛋白免疫組化染色,可見其呈棕黃色表達于腫瘤細胞的胞漿內(nèi)。腫瘤實質(zhì)部位的光密度值為8711.33±3138.35,腫瘤邊界光密度為3952.63±1525.29,正常腦組織內(nèi)的光密度值則為1257.94±960.39。兩兩比較,其P值均0.001,三區(qū)域的光密度值共同比較,F=48.93,P0.001,存在顯著差異。波形蛋白表達強度由正常腦組織、腫瘤邊緣到腫瘤實質(zhì)部位依次增高。微管蛋白免疫組化染色可見其于正常腦組織細胞胞漿內(nèi)均勻表達。腫瘤實質(zhì)部位的光密度值為223.44±57.69,腫瘤邊緣光密度值為3280.82±1447.74,正常腦組織內(nèi)的光密度值則為10808.52±6389.99,兩兩比較,P值均0.05。三區(qū)域的光密度值共同比較,F=31.04,P0.001,存在顯著差異。微管蛋白表達強度由正常腦組織、腫瘤邊緣到腫瘤實質(zhì)部位依次減低。免疫熒光檢測可發(fā)現(xiàn),波形蛋白表達于腫瘤組織上,微管蛋白則表達于正常的腦組織,腫瘤邊緣同時存在兩種蛋白的表達。綜上所述,應(yīng)用波形蛋白和微管蛋白可以很好的標記腫瘤組織及正常腦組織。表皮生長因子受體組化切片中可見其呈褐黃色表達于細胞的細胞質(zhì)內(nèi),該蛋白于正常腦組織內(nèi)、腫瘤組織邊界及腫瘤內(nèi)部均有不同程度表達。其于腫瘤實質(zhì)部位的光密度值為14123.09±9397.98,腫瘤邊界光密度值為22101.43±9705.92,正常腦組織內(nèi)的光密度值則為7122.46±5294.36,經(jīng)兩兩比較,P值均0.05,三區(qū)域的光密度值共同比較,F=12.01,P0.001,存在顯著差異。因此表皮生長因子受體在腫瘤內(nèi)部表達稍高,腫瘤邊緣表達強度最高,正常組織中最弱。表皮生長因子受體與波形蛋白的免疫熒光染色示EGFR于腫瘤組織高表達,并且其部分表達區(qū)域與波形蛋白的表達區(qū)域重合,位于腫瘤邊界。結(jié)論EGFR促進膠質(zhì)瘤細胞C6的侵襲及遷移,瘤體中EGFR高表達于腫瘤邊界,高于周圍腦組織甚至高于瘤體內(nèi)部。提示EGFR促進GBM侵襲的功能可能存在部位優(yōu)勢,其表達于腫瘤高侵襲性的部位。本研究促進了對GBM生物學特性的理解,為開發(fā)新的膠質(zhì)瘤的診療方案提供了實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 異質(zhì)性 表皮生長因子 波形蛋白 微管蛋白
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 實驗研究13-42
• 1.1 材料與方法13-22
• 1.1.1 實驗材料13-15
• 1.1.2 實驗方法15-21
• 1.1.3 結(jié)果判定方法21-22
• 1.1.4 統(tǒng)計學分析方法22
• 1.2 結(jié)果22-33
• 1.2.1 大鼠C6膠質(zhì)瘤細胞的培養(yǎng)22
• 1.2.2 EGFR表達情況對C6膠質(zhì)瘤細胞侵襲性的影響22-23
• 1.2.3 EGFR表達情況對C6膠質(zhì)瘤細胞遷移能力的影響23-25
• 1.2.4 大鼠造模后一般生存狀況及體重改變25-27
• 1.2.5 正常對照組與接種組標本的肉眼觀察及接種組HE染色鏡下組織形態(tài)學觀察27-28
• 1.2.6 大鼠腦組織切片中Vimentin、Tubulin及EGFR表達的免疫組織化學及免疫熒光染色檢測28-33
• 1.3 討論33-37
• 1.4 小結(jié)37
• 參考文獻37-42
• 第2章 綜述 膠質(zhì)瘤的相關(guān)分子標志物和異質(zhì)性的研究進展42-54
• 2.1 膠質(zhì)瘤的異質(zhì)性42-43
• 2.2 膠質(zhì)瘤的分子標記物43-48
• 2.2.1 異檸檬酸脫氫酶（IDH）突變43-44
• 2.2.2 染色體 1p/19q44-45
• 2.2.3 表皮生長因子受體（EGFR）突變45-46
• 2.2.4 O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）啟動子甲基化46
• 2.2.5 人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶（h TERT）啟動子突變46-47
• 2.2.6 ATRX突變47
• 2.2.7 P53突變47-48
• 2.2.8 其他分子標記物48
• 2.3 未來與挑戰(zhàn)48-49
• 參考文獻49-54
• 結(jié)論54-55
• 致謝55-56
• 導(dǎo)師簡介56-57
• 作者簡介57-58
• 學位論文數(shù)據(jù)集58

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本文編號：1120093