本文關鍵詞：EGFR抑制劑對宮內感染仔鼠腦組織損傷的實驗研究

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【摘要】：背景目前認為,母體感染所繼發(fā)的宮內感染是胎兒罹患神經系統(tǒng)畸形的主要原因,病毒和細菌感染致流產和新生兒出生后神經功能障礙的病例多有報道,因此,慢性腦內炎癥反應有可能是其相關重要病理特征之一,而小膠質細胞近年來已成為研究神經系統(tǒng)炎癥的一個熱點。小膠質細胞是一種非常敏感的細胞,神經系統(tǒng)中極其微小的病變就可以引起小膠質細胞的激活,活化的小膠質細胞可以釋放多種細胞因子,如TNF-α、 IL-1β等,在腦內炎癥中起到損傷作用。小膠質細胞的激活機制可能與EGFR通路(Epithelial growthfactor receptor pathway)有關,EGFR通路中的某種信號轉導途徑可能促進小膠質細胞活化,從而使活化的小膠質細胞釋放相關炎性因子,進而造成中樞神經系統(tǒng)損害。LPS是最常用最經典的致炎劑,是小膠質細胞確定的活化因子之一,多次用來制作神經細胞的炎性損傷模型。C225是EGFR的特異性單克隆抗體,可以通過免疫結合抑制EGFR通路活化,故應用其作為EGFR抑制劑創(chuàng)建本研究的干預組。本實驗通過制作宮內感染動物模型探討了EGFR通路的活化對小膠質細胞的激活機制的影響,抑制EGFR通路后小膠質細胞的活化程度,以及EGFR抑制劑對宮內感染所致炎癥相關性中樞神經系統(tǒng)損傷和損傷后修復的影響。目的本研究擬通過建立孕鼠LPS動物模型,將孕鼠隨機分組并分別給予C225或等量生理鹽水進行干預后,腹腔注射LPS模擬孕鼠宮內炎癥,通過形態(tài)學及分子生物學等手段檢測EGFR通路對小膠質細胞的激活機制以及其相關下游炎癥因子水平變化的影響,觀察EGFR抑制劑對宮內感染仔鼠腦組織炎癥反應影響。探究了EGFR通路在活化小膠質細胞相關炎癥中的作用和抑制EGFR通路后對小膠質細胞激活造成的影響,以及EGFR抑制劑對宮內感染所致炎癥相關性中樞神經系統(tǒng)損傷和損傷后修復的關系。方法將雌性大鼠80只與雄性大鼠40只于20時以2：1合籠,次日上午8時查陰道涂片,以查得精子為妊娠第1天,孕鼠另籠飼養(yǎng)。將上述孕鼠隨機分為干預組(C225+LPS組)、模型組(LPS組)和對照組(NS組)。脂多糖凍干粉制劑溶于滅菌生理鹽水配制成1g/ml和0.5g/ml兩種規(guī)格,振蕩混勻,4-C保存?zhèn)溆�。每組取妊娠14天的大鼠,向模型組孕鼠腹腔注射濃度為0.5g/ml的脂多糖溶液0.2m1,向干預組孕鼠腹腔注射濃度1g/ml的脂多糖溶液0.1ml,同時注射含250 nM C225的生理鹽水0.1ml,向對照組孕鼠腹腔注射生理鹽水0.2m1,均連續(xù)注射5天。每組隨機取6只新生仔鼠,飼養(yǎng)至28天,通過簡化Morris水迷宮測試,了解其學習與記憶能力；分別取生后1、3、5天新生鼠,稱重后一部分做腦組織石蠟切片,一部分直接斷頭取腦,留取新鮮腦組織標本,先液氮保存,次日轉入-80℃冰箱保存?zhèn)溆�。進行TTC染色,觀察腦組織大體形態(tài)。進行HE染色,觀察其病理變化。用免疫組織化學法檢測OX42和磷酸化表皮生長因子受體(Phosphorylation of growth factor receptor, pEGFR)的表達。ELISA法檢測小膠質細胞活化產物TNF-a及IL-1p的表達水平。另各組孕鼠留取其胎盤,行HE染色觀察其病理變化。SPSS19.0進行統(tǒng)計分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果1.相同時間點相比,模型組所產新生大鼠體重較干預組及對照組新生大鼠均低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),對照組所產新生大鼠與干預組相比,體重較大,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且對照組及干預組所產新生大鼠體重增長較模型組快,模型組與干預組所產大鼠體重增長趨勢相當。水迷宮測試結果提示模型組所產仔鼠平均逃逸潛伏期較干預組及對照組長,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而干預組較對照組長,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.TTC染色顯示模型組孕鼠所產大鼠腦組織可見損傷病灶,腦組織HE染色顯示,模型組孕鼠所產新生大鼠腦組織細胞水腫、細胞排列紊亂,并伴有神經元的消失；干預組腦細胞仍可見正常的結構,細胞層次尚分明,部分可見少量炎細胞浸潤；對照組腦組織結構清楚,細胞層次分明。模型組及干預組孕鼠胎盤HE染色結果顯示有中性粒細胞浸潤,對照組孕鼠胎盤結構清晰,無中性粒細胞浸潤等炎癥反應。3.免疫組織化學法結果顯示,模型組、干預組所產大鼠腦組織內OX42及pEGFR標記陽性細胞表達量多于對照組所產新生大鼠,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)；模型組OX42及pEGFR陽性表達量明顯強于干預組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。組內比較,模型組3天組及5天組與1天組相比,OX42及pEGFR陽性表達量相對多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；模型組3天組與5天組相比,OX42及pEGFR陽性表達量相當,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。而干預組及對照組組內對比,OX42及pEGFR在各時間點的陽性表達量無差異(P0.05)。4. ELISA法結果顯示模型組孕鼠所產大鼠腦組織TNF-α及IL-1β含量較干預組及對照組均明顯高(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。干預組所產大鼠腦內TNF-α含量高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。而干預組所產大鼠腦內IL-1p含量與對照組相當,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。各組組內比較,模型組3天組及5天組與1天組相比,TNF-α及IL-1p含量相對多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而3天組及5天組無差別；而干預組及對照組組內對比,TNF-α及IL-1β含量在各時間點含量無差異(P0.05)。小結1.通過對模型組孕鼠所產大鼠體重監(jiān)測及損傷腦組織的病理學觀察證實宮內感染孕鼠模型制作成功；2.干預組仔鼠腦組織OX42陽性小膠質細胞的表達以及TNF-α、IL-1β的含量均低于模型組仔鼠腦組織,推測EGFR通路參與小膠質細胞的活化過程；3.利用EGFR抑制劑C225對宮內感染孕鼠模型進行干預可減輕仔鼠腦組織損傷程度,起到了神經保護作用；4. EGFR抑制劑C225可能會降低宮內炎癥暴露后的仔鼠腦損傷的發(fā)生率。
【關鍵詞】：小膠質細胞 表皮生長因子受體 EGFR抑制劑C225 宮內感染 新生大鼠
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-16
• 1 材料與方法16-25
• 2 結果25-39
• 3 討論39-47
• 4 小結47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述：小膠質細胞在腦損傷中的研究進展52-65
• 參考文獻59-65
• 附錄65-67
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 渠文生;方軍;楊琴;詹燕;李在望;王偉;田代實;;西妥昔對脂多糖誘導的小膠質細胞活化和遷移的影響[J];神經損傷與功能重建;2011年02期

2 李曉云;湯慕群;;宮內感染與早產兒腦損傷發(fā)生的相關性[J];中國美容醫(yī)學;2012年18期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張敏;小膠質細胞在單純皰疹病毒性腦炎中作用及機制研究[D];華中科技大學;2006年

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本文編號：1015393