本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)EGFR在人類黑色素瘤腦轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系H1中的影響

  更多相關(guān)文章： 表皮生長因子受體 表皮生長因子 轉(zhuǎn)化生長因子α 黑色素瘤

【摘要】：背景與目的黑色素瘤是一種具有高度侵襲及轉(zhuǎn)移性的惡性腫瘤,它盡管只占據(jù)了皮膚腫瘤中的4%,卻導(dǎo)致了皮膚腫瘤相關(guān)疾病死亡率中的80%。在過去的60年中,黑色素瘤的發(fā)生率提高了近700%,而死亡率也提高了165%。現(xiàn)在,黑色素瘤的首選治療方案仍然是手術(shù)切除,但是治愈率卻很大程度上取決于其是否能早期診斷。黑色素瘤轉(zhuǎn)移迅速,由于預(yù)后因素復(fù)雜且對標(biāo)準(zhǔn)化療的反應(yīng)率較低,轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的存活時(shí)間中位數(shù)低于一年。雖然全世界不少學(xué)者致力于黑素瘤的研究,但是至今為止黑色素瘤發(fā)展及轉(zhuǎn)移的機(jī)制仍未闡述清楚。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是170KD大小具有酪氨酸激酶活性的膜受體,可被表皮樣生長因子如表皮生長因子(EGF)和轉(zhuǎn)化生長因子α (TGF-α)等激活,同ErbB2 (HER2 or Neu), ErbB3 (HER3)和ErbB4 (HER4)一樣隸屬于ErbB受體家族。EGFR被證實(shí)與很多人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展及不良預(yù)后有關(guān),同樣其也參與了黑色素瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移。我們的研究目的是探索EGFR在黑色素瘤轉(zhuǎn)移過程中的作用,從而為黑色素瘤的靶向治療提供可能的理論依據(jù)。材料與方法選用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立的人黑色素瘤腦轉(zhuǎn)移瘤的細(xì)胞系(H1),病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染野生型EGFR使其呈EGFR過表達(dá)狀態(tài)細(xì)胞(HIEGFRwt),同時(shí)對照組轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白GFP (H1GFP)。觀察不同濃度的表皮生長因子(EGF)以及轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-α)刺激下的創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果,集落形成實(shí)驗(yàn)來觀察EGFR對細(xì)胞獨(dú)立生存能力和集落形成能力的影響,免疫印跡實(shí)驗(yàn)(western blot)探索不同濃度的EGF以及TGF-a刺激下EGFR激活的信號(hào)通路。將H1EGFRwt細(xì)胞和H1GFP細(xì)胞注入免疫缺陷小鼠心臟,采用磁共振成像(MRI)方法觀察腫瘤形成和轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中過表達(dá)的EGFR在EGF和TGF-a的刺激下均提高了H1細(xì)胞的遷移能力,與對照組相比愈合速度明顯增快(P0.05)。集落形成實(shí)驗(yàn)證實(shí)EGFR過表達(dá)H1細(xì)胞的獨(dú)立生存以及集落形成能力與對照組相比明顯提高。Western blot結(jié)果顯示EGFR可在EGF的刺激下激活下游信號(hào)磷酸化磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C(pPLCg)、磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子5 (pSTAT5)、磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3 (pSTAT3)、磷酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶(p-AKT) (Ser473)和磷酸化有絲裂原活化蛋白激酶(pMAPK),然而當(dāng)予以相同濃度TGF-a刺激時(shí),以上信號(hào)通路均不能激活。MRI結(jié)果顯示,H1EGFRwt細(xì)胞植入后,只可以在小鼠腦部檢測到腫瘤信號(hào),其他器官均為發(fā)現(xiàn),且與對照組相比無明顯差異。結(jié)論過表達(dá)的EGFR在人黑色素瘤轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系H1細(xì)胞的轉(zhuǎn)移機(jī)制中提高了細(xì)胞的獨(dú)立生存和集落形成能力,在EGF和TGF-a的刺激下可明顯提高H1EGFRwt的遷移能力。此外,在EGF的刺激下可激活pPLC γ、pSTAT 5、pSTAT 3、pAKT和pMAPK等下游信號(hào),但我們無法解釋TGF-a的刺激下所測信號(hào)均不能激活的原因。同樣,對于實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù),我們認(rèn)為仍需更多的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以及可動(dòng)態(tài)監(jiān)測腫瘤生長轉(zhuǎn)移情況的PET-CT檢測結(jié)果才可進(jìn)一步得出結(jié)論。綜上所述,EGFR對黑色素瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制有一定的促進(jìn)意義,但仍需要更多的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)研究,EGFR有可能成為黑色素瘤轉(zhuǎn)移治療中的靶向目標(biāo),我們的研究可能為此也提供了一定的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：表皮生長因子受體 表皮生長因子 轉(zhuǎn)化生長因子α 黑色素瘤
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 符號(hào)說明13-14
• 前言14-17
• 材料和方法17-24
• 1.1 材料17
• 1.1.1 細(xì)胞17
• 1.1.2 試劑17
• 1.1.3 抗體17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-24
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)分析H1細(xì)胞系中EGFR的表達(dá)18
• 1.2.3 EGFR的過表達(dá)與分選18-19
• 1.2.4 創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)19-20
• 1.2.5 集落形成實(shí)驗(yàn)20-21
• 1.2.6 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)21-23
• 1.2.7 磁共振檢測23-24
• 結(jié)果24-33
• 1.1 H1細(xì)胞系的EGFR表達(dá)24-25
• 1.2 創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-30
• 1.3 集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果30
• 1.4 Western blot結(jié)果30-31
• 1.5 MRI檢測結(jié)果31-33
• 討論33-43
• 1.1 EGFR在黑色素瘤中的表達(dá)與意義33-34
• 1.2 EGFR與黑色素瘤轉(zhuǎn)移間的關(guān)系34-36
• 1.3 EGFR激活的信號(hào)通路36-37
• 1.4 EGF和TGF-α37-40
• 1.4.1 TGF-α及其功能37-39
• 1.4.2 EGF及其功能39-40
• 1.4.3 TGF-α與EGF40
• 1.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)40-41
• 1.6 EGFR相關(guān)的靶向治療41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄58-59
• 附件59

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 紀(jì)小龍,徐薪,申明識(shí);黏膜黑色素瘤的常見臨床病理特點(diǎn)[J];診斷病理學(xué)雜志;2002年02期

2 李凌,徐慶中;黑色素瘤高頻超聲表現(xiàn)1例[J];中華超聲影像學(xué)雜志;2002年09期

3 陳燁 ,劉敏賢 ,安秀珍 ,林昌萬 ,姜影;淚囊黑色素瘤1例報(bào)告[J];吉林醫(yī)學(xué);2003年01期

4 蔡振鑫;黑色素瘤:預(yù)測致死性特征的30年臨床經(jīng)驗(yàn)[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2004年02期

5 Helsing P.,Loeb M. ,馮義國;小直徑黑色素瘤:挪威黑色素瘤隨訪項(xiàng)目[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2005年04期

6 Murray C.S.;Stockton D.L.;Doherty V.R. ;黨倩麗;;增厚的黑色素瘤:長久面對的挑戰(zhàn)[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2005年08期

7 High W.A. ,Quirey R.A. ,Guillén D.R ,R.S. Taylor,劉超;7例甲單元原位黑色素瘤的臨床表現(xiàn)、組織病理和臨床預(yù)后[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2005年02期

8 Curtin J.A.;Fridlyand J.;Kageshita T. ;B.C. Bastian;黨倩麗;;黑色素瘤不同位置的基因改變[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2006年02期

9 Blaise S.;Rumeau-Trividic M.;Le Brun V.;周少娜;;黑色素瘤伴亞急性原發(fā)性纖維蛋白溶解[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2006年04期

10 Weatherhead S.C.;Lawrence C.M. ;潘敏;;黑色素瘤篩查診所:檢出更多的黑色素瘤還是使患者消除顧慮?[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2006年Z1期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李東;謝遵江;賀業(yè)春;劉穎;劉麗;;在黑色素瘤組織中免疫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察[A];中國解剖學(xué)會(huì)第八屆組織學(xué)與胚胎學(xué)專業(yè)青年研討會(huì)論文集[C];2004年

2 安菊生;吳令英;李寧;俞高志;劉麗影;;原發(fā)女性生殖道黑色素瘤42例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 陳陸霞;孫保存;張?jiān)娢?賀忠江;;眼內(nèi)移植性黑色素瘤微循環(huán)模式的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

4 楊志濤;陸洪光;;死亡受體和黑色素瘤的抗凋亡作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 鐘傳華;楊文治;王曉蘭;;黑色素瘤與痔診治失誤的啟迪[A];2012醫(yī)學(xué)前沿——中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)肛腸分會(huì)第十四次全國肛腸學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文精選[C];2012年

6 郭軍;;黑色素瘤最新進(jìn)展和未來趨勢[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 孫保存;張?jiān)娢?劉志勇;張丹芳;郭華;;多西環(huán)素影響黑色素瘤微循環(huán)模式的形成[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

8 郭偉;;口腔頜面-頭頸黏膜黑色素瘤的個(gè)體化診治與思考[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

9 孫保存;張丹芳;張?jiān)娢?郭華;張文治;趙秀蘭;;缺血缺氧對黑色素瘤局部浸潤的相關(guān)分子機(jī)制影響的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

10 唐亮;;手術(shù)治療足跟底部皮膚黑色素瘤6例臨床分析[A];2013年全國激光醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)聯(lián)合會(huì)議暨2013年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)整形美容學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王倫邋王晨;早期發(fā)現(xiàn)黑色素瘤可挽救生命[N];科技日報(bào);2007年

2 倪方;黑色素瘤早治療可痊愈（三）[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2008年

3 健康時(shí)報(bào)特約記者 管九蘋;澳大利亞免費(fèi)普查黑色素瘤[N];健康時(shí)報(bào);2010年

4 實(shí)習(xí)生 易立;黑色素瘤,是否無藥可治？[N];科技日報(bào);2011年

5 記者 張e，

本文編號(hào)：997678