本文關(guān)鍵詞：腋臭發(fā)病機制的基因?qū)W研究及外科治療手段的探索

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【摘要】：第一部分腋臭發(fā)病機制的研究：中國腋臭人群中ABCC11基因SNP 538不同基因型的研究引言人類腋窩的皮下含有大量的腺體,包括大汗腺(頂泌汗腺)、小汗腺、皮脂腺等。在這些腺體作用下,該區(qū)域能分泌大量的氣化有機物質(zhì)(VOCs, Volatile organic compounds),形成特殊的體味,在某些國家將此定義為“腋臭”。腋臭在西方發(fā)病率高達(dá)95%以上,東方國家中,韓國的調(diào)查為低于5%。隨著對社交的發(fā)展、個人形象的重視,據(jù)調(diào)查,美國人每年花在腋臭外用藥方面的費用高達(dá)1.9億美元。在英國,超過90%的女性和80%以上男性把除臭劑和止汗劑作為日常用品。某種意義上,腋臭已經(jīng)不僅僅局限為一個生理學(xué)癥狀,而被定義為一種疾病,涉及到心理學(xué)、經(jīng)濟學(xué)等領(lǐng)域。對腋臭的發(fā)生機理、分子學(xué)機制也愈加重視。近來,隨著基因技術(shù)的突破,腋臭的基因?qū)W研究有了很大進(jìn)展,大量研究表明ABCC11基因與腋臭密切相關(guān)。ABC (ATP結(jié)合盒)蛋白是人類基因組編碼的蛋白大家族,其主要參與細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運過程。ABC家族目前發(fā)現(xiàn)有48個成員,分屬ABCA, ABCB和ABCC亞家族。C亞家族包括多耐藥相關(guān)蛋白(MRPs, Multidrug Resistance-associated Proteins),目前已知12個成員,包括由ABCC11(MRP8)基因編碼的轉(zhuǎn)運蛋白。ABCC1最早被發(fā)現(xiàn),其的結(jié)構(gòu)包括3個跨膜區(qū)和2個核苷酸結(jié)合區(qū)以及它們之間的連接部。2001年,ABCC11作為ABC轉(zhuǎn)運子被發(fā)現(xiàn)(位于染色體16q12.1)。在三維結(jié)構(gòu)上,ABCC2、ABCC3、ABCC6、ABCC10和ABCC1相似,而ABCC4、ABCC5、ABCC11和ABCC12的結(jié)構(gòu)因缺少第3個跨膜區(qū)MSDO而與之略有不同。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),ABCC11基因表達(dá)的蛋白位于頂泌汗腺的細(xì)胞內(nèi)顆粒和空泡膜上,提示直接影響或參與頂泌汗腺內(nèi)中性氣味前體和親脂性氣味物質(zhì)的轉(zhuǎn)運,包括氣體前體在內(nèi)的多種物質(zhì)在其作用下被轉(zhuǎn)運至大汗腺的管腔內(nèi),完成分泌過程。ABCC11基因的轉(zhuǎn)運包括一些親脂陰離子,如某些谷氨酰基結(jié)合體(Gln-3M2H、Gln-HMHA、SG-3M3SH)和白三烯,陰離子膽汁酸,甘氨膽酸等。其中3M2H、HMHA和3M3SH均已被證實為引起腋臭的主要“氣味前體”。然而ABCC11基因?qū)D(zhuǎn)運的影響是直接的還是間接調(diào)控的目前尚未清楚。單核苷酸多態(tài)性(SNPs)是ABCC家族的主要變異,這些突變頻率不一的變異分布于各個基因的內(nèi)含子和外顯子。位于編碼區(qū)內(nèi)的SNPs包括錯義突變、無義突變及同義突變。同義突變會導(dǎo)致mRNA的二級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,僅在表達(dá)水平上導(dǎo)致蛋白的改變,一般不會導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)的改變。Yoshiura等研究發(fā)現(xiàn)ABCC11基因多態(tài)性位點SNP538決定耳耵聹的性狀：-4A型多見于亞裔人群,表現(xiàn)為干性耳耵聹；而GA和GG型則多見于非洲及高加索人,表現(xiàn)為濕性耳耵聹。早在1937年Adachi有研究報道過耳耵聹形態(tài)與腋臭之間的聯(lián)系,提出腋臭患者多伴濕性耳耵聹,而無腋臭者多為干性耳耵聹。本研究旨在了解中國人群中腋臭患者及非腋臭患者的ABCC11基因多態(tài)位點SNP538的基因型,及兩者ABCC11基因表達(dá)量之間的區(qū)別,從基因水平進(jìn)一步揭示腋臭的發(fā)病機制。材料與方法(1)實驗對象分組：從2014年1月至2014年4月,本人所在機構(gòu)所有首診為“腋臭”的患者進(jìn)入實驗組候選隊列。最終有12名候選人進(jìn)入實驗組,其中男性4例,女性8例,平均年齡為21歲。同期在本機構(gòu)乳腺中心納入確診乳癌、擬行乳癌根治術(shù)+腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)的患者2例,為對照組。對照組2例均為女性,平均年齡48歲。本次研究的目的均在術(shù)前告知受試者,并簽署知情同意書及術(shù)前風(fēng)險告知書。(2)標(biāo)本采集1)實驗組：所有的實驗組受試者均由同一組整形外科醫(yī)生施行手術(shù)操作。6名患者施行術(shù)區(qū)皮下局部腫脹麻醉后,接受大汗腺抽吸術(shù)(具體手術(shù)方式參見論文第二部分),收集吸出的皮下混合組織。另6名患者施行術(shù)區(qū)皮下局部麻醉后,接受雙側(cè)大汗腺切除術(shù)(具體手術(shù)方式參見論文第二部分),直視下修剪腋窩皮下組織并獲取標(biāo)本。兩種方法獲取標(biāo)本均為含有脂肪與大汗腺的混合組織碎片。2)對照組：2例對照組患者由同一組乳腺外科醫(yī)生施行手術(shù)操作。手術(shù)在全麻下進(jìn)行。完成腋窩淋巴結(jié)清掃后,切取小塊腋下皮膚組織(不含淋巴結(jié))。(3)組織學(xué)腋下大汗腺組織經(jīng)福爾馬林固定后,行石蠟包埋、切片,HE染色,行光鏡組織學(xué)檢查。(4)大汗胞4BCC11基因mRNA的RT-PCR分析從每個樣品管中取出組織10mg,采用Trizol試劑盒提取總mRNA,瓊脂糖凝膠電泳,通過紫外透射儀觀察RNA。按逆轉(zhuǎn)錄酶說明書將3肛1總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。取cDNA加入ABI PRISM 7500 RT-PCR擴增儀,SYBR Green用作PCR擴增反應(yīng)。采取△△Ct法對目的基因的表達(dá)進(jìn)行相對定量；用目的基因與GAPDH/POLR2A的比值表示目的基因的相對表達(dá)水平。PCI產(chǎn)物測序(上海天昊生物有限公司提供)。(5)統(tǒng)計方法：數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,所有的數(shù)據(jù)進(jìn)行SPSS(19.0)分析。因為樣本數(shù)量偏少,無法滿足t檢驗的假設(shè),使用非參數(shù)方法的wilcoxon檢驗,以P0.05為差異有顯著性。結(jié)果(1)組織學(xué)表現(xiàn)HE染色顯示實驗組、對照組均可見明顯頂泌汗腺腺體,有完整的管腔結(jié)構(gòu),周圍的分泌部由腺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、基底膜帶所組成,但不同標(biāo)本內(nèi)的分泌部的腺細(xì)胞高度不一,推測可能與分泌活動相關(guān)。(2)基因型檢測結(jié)果本次實驗共收集14例標(biāo)本,其中實驗組12例,對照組2例。經(jīng)TRIZOL提取總mRNA, RT-PCR后,通過對ABCC11基因多態(tài)性位點SNP538的等位基因型檢測發(fā)現(xiàn)實驗組有11例為GA型,1例為GG型,對照組2例均為AA型。(3)目的基因表達(dá)水平本次實驗共收集14例標(biāo)本,其中實驗組12例,對照組2例。經(jīng)TRIZOL提取總mRNA, RT-PCR后,通過GAPDH、POLR2A雙內(nèi)參定量分析目的基因表達(dá)量。采取AACt法對目的基因的表達(dá)進(jìn)行相對定量,用目的基因與GAPDH / POLR2A的比值表示目的基因的相對表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)12例實驗組的標(biāo)本中ABCC11基因表達(dá)量較對照組的表達(dá)量明顯增高。經(jīng)wilcoxon檢驗,實驗組相對GAPDH ΔCt和相對POLR2A ACt的p值均為3.813e-07,有顯著差異。結(jié)論ABCC11基因多態(tài)位點SNP538的基因型與腋臭發(fā)生密切相關(guān)。腋臭患者的ABCC11基因表現(xiàn)型為GG或GA型,其在mRNA水平表達(dá)較AA型無腋臭患者明顯增高,提示ABCC11基因SNP538G→A導(dǎo)致該基因在mRNA水平的表達(dá)減弱。第二部分腋臭外科治療方式的探索：改良小切口大汗腺抽刮法與傳統(tǒng)大汗腺切除術(shù)的臨床對比試驗引言在高等哺乳類中,大汗腺能分泌一種特殊的氣味,該氣味承擔(dān)著化學(xué)信號的作用,實為嗅覺交際,以此來吸引異性、發(fā)現(xiàn)危險,以及標(biāo)記領(lǐng)地等,是一種生物學(xué)特征。人類的大汗腺也會分泌特殊的氣味,該氣味物質(zhì)某種程度上反映了個體的情感狀態(tài)、運動機能及疾病狀態(tài)。然而在一些東方國家的特殊文化中,認(rèn)為攜帶強烈腋下異味的個體是具體攻擊性的,易被大眾排斥,嚴(yán)重影響個人社交生活。甚至有部分亞洲國家將腋下異味視作一種疾病,稱為“腋臭”。對腋臭的治療經(jīng)歷了大半個世紀(jì),主要分為非手術(shù)和手術(shù)兩大類。非手術(shù)治療中包括藥物類的除臭劑、局部抗生素的應(yīng)用、大汗腺的激光燒灼、A型肉毒桿菌素局部注射等方式,但均屬于短暫時緩解癥狀,無法徹底治愈。手術(shù)的目的為去除大汗腺組織,包括各種大汗腺切除方式,經(jīng)歷了早期的腋下皮膚全層切除到之后的保留真皮下血管網(wǎng)的大汗腺切除術(shù)。早期的手術(shù)方式帶給患者不可逆轉(zhuǎn)的腋下疤痕,該方式漸漸被淘汰；經(jīng)典的真皮下大汗腺切除術(shù)式雖然保留了腋下的皮膚,卻依然存在皮膚壞死、血腫、傷口延遲愈合、手術(shù)疤痕、術(shù)后恢復(fù)時間長等一系列問題。近年來,源于脂肪抽吸技術(shù)的大汗腺微創(chuàng)抽吸術(shù)開始流行,其具有疤痕隱蔽、皮膚壞死率低、術(shù)后恢復(fù)快等優(yōu)勢,被認(rèn)為是安全有效的腋臭外科治療手段。但該術(shù)式的復(fù)發(fā)率一直存在爭議。本人自2009年開始采用改良的小切口大汗腺抽刮術(shù),并進(jìn)行了臨床配對試驗,與金標(biāo)準(zhǔn)的大汗腺切除術(shù)式進(jìn)行對比�，F(xiàn)將結(jié)果闡述與此。材料與方法(1)受試者從2009年2月至2014年2月,本人所在機構(gòu)所有首診為“腋臭”的患者進(jìn)入候選隊列。納入標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)臨床查體確診為雙側(cè)腋臭、且自愿參加此項臨床試驗的患者；曾經(jīng)接受過腋臭外科治療(包括激光)以及腋下區(qū)域有疤痕存在的患者被排除在外。本次研究均在術(shù)前告知受試者,并簽署知情同意書及術(shù)前風(fēng)險告知書。希望疤痕更隱蔽的患者被納入試驗組,接受腋下小切口大汗腺抽刮術(shù)；而其余所有患者進(jìn)入對照組,施行經(jīng)典的腋下大汗腺切除術(shù)式。兩組受試者以非同步的方式進(jìn)入研究隊列。所有受試者的年齡、性別資料均被錄入。最終有65名候選人進(jìn)入實驗組,超過300名歸入對照組。經(jīng)計算機統(tǒng)計配對,從對照組中隨機選出65名與試驗組性別一致、年齡差別Q歲的應(yīng)試者與之進(jìn)行配對。(2)手術(shù)方式1)實驗組：進(jìn)行術(shù)區(qū)及切口標(biāo)記,術(shù)區(qū)皮下進(jìn)行局部腫脹麻醉,單側(cè)150-200m1,范圍超過標(biāo)記外緣1cm。腫脹麻醉達(dá)成后,沿切口標(biāo)記切開皮膚(0.2cm),用抽吸針進(jìn)行皮下潛行分離,范圍為術(shù)前標(biāo)記的整個腋毛區(qū)。隨后將抽吸管一頭連于負(fù)壓吸引器,調(diào)節(jié)負(fù)壓為1.875mmHg。整個抽吸過程在15分鐘左右,分為兩階段。第一階段為“手壓式”抽吸,將真皮層與皮下脂肪層之間抽吸形成潛行腔隙(多隧道)；第二階段為“提捏式”抽吸,用左手拇指與食指提捏術(shù)區(qū)皮膚包繞抽吸管,同時旋轉(zhuǎn)抽吸管對該區(qū)域進(jìn)行270°抽吸。完成此過程后,對術(shù)區(qū)皮膚厚度進(jìn)行評估,應(yīng)能透過皮膚看到其下抽吸管的金屬光澤及抽吸孔的形狀。用50-80m1的生理鹽水對術(shù)區(qū)皮下淺腔進(jìn)行灌洗以除去游離的脂肪顆粒及大汗腺組織。術(shù)區(qū)切口無需縫合,整個術(shù)區(qū)加壓包扎。對側(cè)同法操作。術(shù)畢讓患者穿上醫(yī)用彈力腋套,目的為腋部加壓及固定敷料,一周內(nèi)禁止摘除。同時宣教患者術(shù)后一周內(nèi)禁止洗澡,并限制肩關(guān)節(jié)上舉活動。2)對照組：術(shù)區(qū)標(biāo)記完成后,進(jìn)行局麻。局麻達(dá)成后,沿術(shù)前標(biāo)記切開皮膚,用剪刀進(jìn)行皮下分離,形成對偶皮瓣。用左手食指及中指協(xié)助掀起皮瓣,修剪其皮下表面的脂肪組織及大汗腺組織,直至看到乳白色的真皮組織,盡可能保留真皮下血管網(wǎng)。徹底止血后沖洗創(chuàng)面,皮內(nèi)6-0尼龍線連續(xù)縫合切口。對側(cè)同法操作。術(shù)區(qū)用彈力繃帶加壓包扎,7天后解除。告知患者術(shù)后一周內(nèi)禁止洗澡,肩關(guān)節(jié)制動。(3)術(shù)后評估每位患者都進(jìn)行術(shù)后隨訪,方式為門診復(fù)診或電話隨訪,安排在術(shù)后1月、3月、6月。每次隨訪都記錄5項內(nèi)容：患者滿意程度、皮膚壞死情況、血腫、異味復(fù)發(fā)程度、疤痕。(4)數(shù)據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。所有的數(shù)據(jù)進(jìn)行SPSS(19.0)分析,使用Chi square test和Fisher's exact test作為統(tǒng)計方法,p值.05視為有統(tǒng)計意義。結(jié)果兩組的性別比例一致,女：男均為42：23。實驗組年齡從15歲至38歲,平均22.78歲；對照組年齡從16歲至39歲,平均22.91歲。實驗組的隨訪時間為3個月到40個月,平均7.69個月,對照組的隨訪時間為3個月到20個月,平均6.81個月。(1)患者滿意程度22名(33.85%)實驗組患者及8名(12.31%)對照組患者對術(shù)后結(jié)果完全滿意。相較于對照組,實驗組的患者滿意率更高,有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P=0.004, Chi square test).(2)皮膚壞死實驗組有3名(2.31%)患者經(jīng)歷了腋下皮膚壞死,而對照組發(fā)生壞死的為16名(12.31%)。其中實驗組只有1名患者的左側(cè)腋下術(shù)區(qū)為嚴(yán)重壞死,并接受了二期皮瓣修復(fù)術(shù)后痊愈。對照組有8名患者診斷為嚴(yán)重壞死,并均接受了再次手術(shù),包括重新清創(chuàng)縫合術(shù)(3例)、局部皮瓣修復(fù)術(shù)(5例)。發(fā)生嚴(yán)重壞死的患者,恢復(fù)時間均超過2周。實驗組的術(shù)后皮膚壞死率低于對照組,有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P=0.002, Chi square test,)。(3)血腫對照組發(fā)生3例(2.31%),實驗組未發(fā)現(xiàn)。數(shù)據(jù)無統(tǒng)計意義(P=0.25, Fisher' s exact test.(4)異味復(fù)發(fā)術(shù)后共有15名實驗組患者和6名對照組患者主訴有異味復(fù)發(fā),經(jīng)復(fù)診評估后,其中實驗組2名患者的3側(cè)腋窩、對照組1名患者的雙側(cè)腋窩復(fù)發(fā)癥狀較明顯,需要并接受了二次治療。其余主訴有復(fù)發(fā)癥狀的患者,復(fù)發(fā)程度均較輕,且都肯定了手術(shù)的效果。實驗組的術(shù)后復(fù)發(fā)率高于對照組,僅具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.041, Chi square test)。(5)疤痕對照組的術(shù)后疤痕更長(平均長度3.61cm,n=130),外形更難看,表現(xiàn)為疤痕增生或疤痕攣縮,部分疤痕寬度3mm (P=0.000, Chi square test)。實驗組的疤痕相對更隱蔽,(平均長度0.32cm,n=130),均不超過0.5cm。結(jié)論本次研究共有65位雙側(cè)腋臭患者接受雙側(cè)大汗腺改良抽吸術(shù),與接受傳統(tǒng)大汗腺切除術(shù)的對照組相比,試驗組術(shù)后皮膚壞死率更低(1.88%,p0.01),患者滿意率更高(33.85%,p0.01),異味復(fù)發(fā)率更高((11.54%,p0.05),疤痕更隱蔽美觀(0.77%,p0.01)。所以,我們認(rèn)為改良的大汗腺抽吸術(shù)是一種可供患者選擇的方法,尤其適合愛美、快節(jié)奏的都市人群。
【關(guān)鍵詞】：腋臭 單核苷酸多態(tài)性(SNP) ABCC11 RT-PCR 腋臭 治療 復(fù)發(fā) 抽吸
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R758.741
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-16
• 英文摘要16-27
• 縮略詞表27-31
• 第一部分：中國腋臭人群中ABCC11基因SNP 538不同基因型的研究31-61
• 緒論31-35
• 材料與方法35-43
• 結(jié)果43-48
• 討論48-56
• 結(jié)論56-57
• 下一步研究57-58
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 第二部分：改良小切口大汗腺抽刮法與傳統(tǒng)大汗腺切除術(shù)的臨床對比試驗61-86
• 緒論61-63
• 材料與方法63-72
• 結(jié)果72-77
• 討論77-81
• 結(jié)論81-82
• 下一步研究82-83
• 參考文獻(xiàn)83-86
• 綜述86-106
• 參考文獻(xiàn)98-106
• 作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果106-107

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10 陳輝;李承新;杜潔;李曉莉;陳紅艷;王穎娟;;漢族人腋臭大汗腺的分布及手術(shù)治療[A];中華醫(yī)學(xué)會整形外科學(xué)分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會學(xué)術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊鋒;少女何來下身腥臭味[N];大眾衛(wèi)生報;2003年

2 楊坤云;腋臭與種族有關(guān)[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

3 本報記者 郭靜 實習(xí)生 賈亞敏 王詩霖 通訊員 何婉蘋;輕松做“無味”女人[N];廣東科技報;2008年

4 君云;做一個清爽的老人[N];衛(wèi)生與生活報;2006年

5 吳志 羅金財;舉起手來,向狐臭說“拜拜”[N];科技日報;2012年

6 本報記者 皮澤紅;今夏跟體味說拜拜[N];廣東科技報;2004年

7 居紀(jì)全;微創(chuàng)手術(shù)可根治狐臭[N];大眾衛(wèi)生報;2002年

8 謝云;惱人的狐臭[N];民族醫(yī)藥報;2009年

9 張江林;腳臭不是病臭起來真難聞[N];大眾衛(wèi)生報;2003年

10 康大夫;治療腋臭有新法[N];甘肅日報;2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王萃;腋臭發(fā)病機制的基因?qū)W研究及外科治療手段的探索[D];浙江大學(xué);2016年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 孫躍;小切口大汗腺清除術(shù)治療腋臭的并發(fā)癥分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

2 曹彥;漢族腋臭患者大汗腺的分布及手術(shù)治療[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 邊勇;腋臭患者大汗腺中EGF和ApoD的表達(dá)變化及其關(guān)系[D];吉林大學(xué);2015年

4 馬博;二種術(shù)式治療腋臭的臨床與病理觀察[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

5 曹彥;腫脹麻醉吸刮修剪法治療腋臭的臨床療效分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

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本文編號：754298