本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌α-toxin上調(diào)皮膚組織中IL-19的表達及其機制研究

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【摘要】：背景:尋常型銀屑病(以下簡稱銀屑病)是常見的慢性炎癥性皮膚病,以皮損局部炎細胞浸潤和角質(zhì)形成細胞(Keratinocyte cell,KC)過度增殖為基本病理特征�，F(xiàn)階段我們對銀屑病發(fā)病機理的認識尚不全面,目前比較確定的是:多種細胞因子表達水平的改變參與了銀屑病的發(fā)病機制,這些細胞因子包括IL-6、IL-8、IL-12、腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor,TNF)和干擾素-γ(Interferon-γ,IFN-γ),而IL-19能夠上調(diào)上述細胞因子的表達。角質(zhì)形成細胞是IL-19的主要分泌來源,IL-19的上調(diào)可以誘導CD8+T細胞分泌角質(zhì)形成細胞生長因子(Keratinocyte growth factor,KGF)作用于角質(zhì)形成細胞使其增殖,從而加重銀屑病的病理損傷。IL-19在角質(zhì)形成細胞中的表達上調(diào)與另一重要的促炎癥細胞因子IL-1β的刺激有關(guān);另一方面,金黃色葡萄球菌感染能夠促進中性粒細胞分泌促炎癥細胞因子IL-1β,Alpha毒素(α-toxin)在其中發(fā)揮了重要作用,即IL-1β的表達上調(diào)可能與α-toxin的表達分泌有關(guān)。越來越多的學者認為金黃色葡萄球菌在皮膚表面的定植是誘發(fā)和加重銀屑病的重要影響因素。有研究證實50%以上的銀屑病患者的皮損部位可以檢測出金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus),S.aureus的定植與高銀屑病皮損面積和嚴重程度評分(Psoriasis Area Severity Index,PASI)相關(guān)。S.aureus可以分泌多種病原分子和毒素,進而影響宿主的免疫系統(tǒng)和免疫穩(wěn)態(tài)。S.aureus分泌的α-toxin還能夠作用于角質(zhì)形成細胞,與特應性皮炎(Atopic dermatitis,AD)的嚴重程度密切相關(guān)。我們推測α-toxin可能通過促進中性粒細胞分泌IL-1β,進而上調(diào)IL-19在銀屑病皮損中的表達,從而參與銀屑病的發(fā)生與發(fā)展。目的:本課題旨明確金黃色葡萄球菌分泌的α-toxin能否上調(diào)皮膚組織中IL-19的表達,并初步探討其機制及與銀屑病的發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系,以進一步明確銀屑病的發(fā)病機制。方法:1.實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)檢測銀屑病皮損與正常皮膚組織中IL-19的m RNA水平,Western blotting分別檢測從正常皮膚組織和銀屑病皮損來源的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)上清中α-toxin的表達。相關(guān)性分析銀屑病皮損中IL-19的表達水平與金黃色葡萄球菌分泌α-toxin水平是否相關(guān)。2.采用金黃色葡萄球菌α-toxin缺失菌株(△Hla S.aureus),野生型金黃色葡萄球菌(WT S.aureus),以及PBS感染BALB/c小鼠背部皮膚,收集感染后的皮膚組織,HE染色觀察組織炎癥程度病理變化,實時熒光定量PCR檢測IL-19,IL-1β的m RNA水平,ELISA檢測IL-19,IL-1β的蛋白表達水平。分離小鼠骨髓的中性粒細胞,用△Hla S.aureus和WT S.aureus刺激6h后,實時熒光定量PCR、ELISA和Western blotting檢測IL-1β的表達。不同濃度IL-1β刺激PAM 2-12角質(zhì)形成細胞后,實時熒光定量PCR和ELISA檢測IL-19的表達。結(jié)果:1.銀屑病皮損IL-19 m RNA水平顯著高于在正常皮膚組織IL-19 m RNA水平(1.708±0.1610VS 0.5679±0.0978,P0.05)。2.銀屑病皮損中金黃色葡萄球菌檢出率顯著高于正常皮膚組織(P0.05);銀屑病患者組分離的金黃色葡萄球菌產(chǎn)α-toxin的陽性率顯著高于正常皮膚組(P0.05)。3.銀屑病皮損中IL-19的表達與金黃色葡萄球菌α-toxin的分泌呈正相關(guān)(r=0.7999,P0.0001)4.WT S.aureus組與△Hla S.aureus組相比,前者皮損的面積增加,炎癥細胞浸潤和膿腫形成增加。5.實時熒光定量PCR和ELISA檢測發(fā)現(xiàn)△Hla S.aureus組IL-19和IL-1β的m RNA和蛋白水平,相較于WT S.aureus組顯著降低(P0.01)。6.中性粒細胞in vitro刺激發(fā)現(xiàn),△Hla S.aureus組IL-1β蛋白表達水平相較于WT S.aureus組顯著降低(P0.01)。7.IL-1βin vitro刺激PAM 2-12角質(zhì)形成細胞發(fā)現(xiàn),與對照組相比,IL-19的m RNA和蛋白表達水平顯著增加(P0.01),并呈劑量依賴性。結(jié)論:金黃色葡萄球菌分泌的α-toxin能夠作用于中性粒細胞,促進其表達分泌IL-1β;IL-1β則可作用于皮膚的角質(zhì)形成細胞,上調(diào)IL-19,參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 銀屑病 α-toxin IL-1β IL-19
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 IL-19 在銀屑病患者皮損中的表達及其與金黃色葡萄球菌 α-toxin的相關(guān)性研究13-23
• 2.1 引言13-14
• 2.2 材料與方法14-18
• 2.3 結(jié)果18-21
• 2.4 討論21-23
• 第三章 金黃色葡萄球菌 α-toxin上調(diào)小鼠皮膚組織中IL-19 的表達及其機制研究23-36
• 3.1 引言23
• 3.2 材料與方法23-27
• 3.3 結(jié)果27-34
• 3.4 討論34-36
• 全文總結(jié)36-37
• 參考文獻37-41
• 文獻綜述 IL-19 在炎癥性疾病中的免疫調(diào)控作用41-52
• 參考文獻47-52
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及參與的課題52-53
• 致謝53

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2 朱自強;;金黃色葡萄球菌更具殺傷力的原因在于其金黃色“外殼”[J];基礎醫(yī)學與臨床;2005年11期

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