本文關鍵詞：2-甲氧基雌二醇對黑素瘤B16荷瘤小鼠抑瘤作用及其機制的實驗研究

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【摘要】：目的:惡性黑素瘤是一種惡性程度較高的具有黑色素細胞分化的惡性腫瘤,具備高侵襲性及增殖能力,并可以產(chǎn)生肝素、成纖維細胞生長因子復合物等致使腫瘤內大量新生血管形成,腫瘤細胞易發(fā)生淋巴及血行轉移且預后差。近年來其發(fā)生率呈逐年增高趨勢,為目前發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一。常規(guī)治療手段包括手術切除、放化療、靶向治療及免疫治療等綜合治療,目前整體的治療效果仍不理想,生存期的延長不明顯。2-甲氧基雌二醇是一種甾體激素類化合物,具有抗血管生成及抗腫瘤作用,并且2-ME在多種荷瘤動物模型實驗中表現(xiàn)出顯著的抑制腫瘤生長的作用,迄今為止,國內尚無2-ME對惡性黑素瘤體內外抑瘤效果的研究報道。本課題組前期實驗結果表明2-ME對小鼠黑素瘤B16細胞的增殖具有抑制作用,這種作用呈時間-劑量的依賴關系,且2-ME作用24h后G0/G1周期出現(xiàn)阻滯,細胞的凋亡率增高,2-ME能明顯下調原癌基因(c-myc)的表達,使抑癌基因gadd45b表達升高。因此本實驗通過建立動物模型繼續(xù)研究2-甲氧基雌二醇對惡性黑素瘤細胞的增殖、凋亡的影響。通過相關蛋白表達的變化,進一步探討2-ME抑制黑素瘤細胞生長的可能作用機制,從而為黑素瘤提供新的治療方法及相應的理論依據(jù)。方法:將12只雌性BALB/c小鼠隨機分為2組,每組6只。將鼠黑素瘤B16細胞懸液接種于各組小鼠右側背部皮下,每只1×106個,建立小鼠黑素瘤移植瘤模型。當多數(shù)小鼠荷瘤后開始給藥,采用尾靜脈注射給藥方式:實驗組分別給予2-ME 50mg/kg尾靜脈注射,對照組尾靜脈注射等量生理鹽水,隔日一次,每隔兩日測量一次腫瘤的長、短徑,第21天時最后一次靜脈給藥,次日頸椎脫臼處死各組小鼠,處死后完整剝離腫瘤組織及肺、肝、脾組織,再次測量腫瘤組織大小,稱量各組瘤重,計算體積及質量抑瘤率;顯微鏡觀察生理鹽水對照組及2-ME藥物處理組各主要臟器和瘤細胞大體形態(tài)學的變化情況;免疫組化法檢測各組瘤細胞c-myc,Gadd45b的蛋白表達情況;運用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理,統(tǒng)計分析。結果:1 2-ME可抑制小鼠腫瘤生長。22天時稱取瘤重顯示藥物組小鼠的瘤重相比對照組小鼠瘤重差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。其質量抑瘤率為62.8%。小鼠腫瘤體積方面:第7日,小鼠腫瘤體積差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05),余天數(shù)兩組對應的腫瘤體積差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01),其體積抑制率為66.9%。腫瘤生長曲線顯示藥物組小鼠腫瘤生長相比對照組緩慢。2 2-ME對腫瘤組織細胞及各重要臟器組織細胞形態(tài)的影響:對照組可見數(shù)量多且排列緊密體積較大的瘤細胞,細胞核異型性明顯,部分腫瘤細胞呈巢狀排列;與對照組相比,2-ME處理組腫瘤組織的瘤細胞密度較稀,間質較多,部分細胞顯現(xiàn)核固縮、核裂解等現(xiàn)象,腫瘤組織內部可見大量的壞死、凋亡的細胞及部分區(qū)域可見炎性細胞的浸潤,含色素顆粒細胞較對照組明顯增多。提示藥物組腫瘤細胞的生長受到抑制,腫瘤細胞形態(tài)受到破壞。在2-ME處理組小鼠體內均未發(fā)現(xiàn)肺、肝、脾轉移且細胞形態(tài)完整,而對照組3例小鼠的肺組織中發(fā)現(xiàn)少量轉移灶。3免疫組化檢測瘤細胞c-myc、Gadd45b蛋白表達:c-myc蛋白染色陽性反應顆粒出現(xiàn)在細胞核內,呈棕黃色顆粒。生理鹽水對照組和2-ME組的細胞核中均見c-myc蛋白陽性表達,生理鹽水對照組細胞核中陽性表達細胞較2-ME組陽性表達細胞有增多趨勢。Gadd45b蛋白陽性著色主要定位于腫瘤細胞的細胞質,呈棕黃色細顆粒狀,局灶或彌漫性分布。生理鹽水對照組和2-ME組的細胞漿中均見gadd45b蛋白陽性表達,2-ME組細胞漿中陽性表達細胞較生理鹽水對照組陽性表達細胞有增多趨勢。結論:1 2-ME對鼠B16黑素瘤移植瘤的生長有顯著抑制作用。2 2-ME可以減少鼠B16黑素瘤移植瘤的臟器轉移。3 2-ME在對鼠B16黑素瘤移植瘤產(chǎn)生抑瘤作用的同時對其它重要臟器無明顯損傷,提示其藥物毒副作用小,選擇性強。4 2-ME抑制黑素瘤增殖并促進其凋亡的可能機制為:2-ME一方面下調c-myc蛋白的表達,另一方面上調Gadd45b蛋白的表達,最終引發(fā)細胞凋亡。
【關鍵詞】：2-甲氧基雌二醇2-ME 鼠黑素瘤細胞B16 增殖和凋亡 c-myc Gadd45b
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11
• 材料與方法11-17
• 結果17-20
• 附圖20-28
• 附表28-29
• 討論29-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-42
• 綜述 惡性黑素瘤的治療進展42-56
• 參考文獻50-56
• 致謝56-57
• 個人簡歷57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李蠡,薛春雨,邢新;惡性黑色素瘤細胞凋亡特點的研究進展[J];醫(yī)學研究生學報;2005年09期

2 練煉;馬德亮;陶敏;;惡性黑色素瘤的分子靶向治療進展[J];實用腫瘤雜志;2010年02期

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本文編號：598468