本文關(guān)鍵詞：銀屑病皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及mRNA差異表達(dá)的研究

  更多相關(guān)文章： 銀屑病 SMSCs 異質(zhì)性 表型遺傳修飾 UHRF1

【摘要】：目的：研究銀屑病皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞(skin-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)生物學(xué)特性,進(jìn)一步分析銀屑病皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞基因表達(dá)譜,了解銀屑病患者皮損微環(huán)境中SMSCs變化,為SMSCs參與銀屑病發(fā)病提供理論依據(jù)。 方法：應(yīng)用酶消化法分離培養(yǎng)銀屑病組與正常對(duì)照組皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞,并傳代、擴(kuò)增,收集第3代SMSCs及其培養(yǎng)上清液,倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞免疫表型,分別用成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)體系鑒定細(xì)胞多系分化能力,細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制第3代細(xì)胞生長(zhǎng)增殖曲線,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中EGF, TGF-β1濃度。應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)其mRNA表達(dá)譜進(jìn)行差異基因篩選。RT-PCR法對(duì)銀屑病SMSCs部分差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證分析。 結(jié)果：①細(xì)胞形態(tài)學(xué)特性：倒置相差顯微鏡下觀察銀屑病組與正常對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)均存在異質(zhì)性。②細(xì)胞表面標(biāo)志物測(cè)定：流式細(xì)胞儀檢測(cè)第3代培養(yǎng)細(xì)胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90及CD105呈高表達(dá),CD34.CD45及HLA-DR呈低表達(dá)。③細(xì)胞多向分化潛能測(cè)定：第3代培養(yǎng)細(xì)胞成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)14d,分別用油紅O、茜素紅S、甲苯胺藍(lán)染色鑒定脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞,結(jié)果均為陽(yáng)性。④細(xì)胞增殖能力檢測(cè)：細(xì)胞生長(zhǎng)增殖曲線顯示銀屑病組第3代細(xì)胞增殖速度快于正常對(duì)照組。⑤分泌細(xì)胞因子(表皮生長(zhǎng)因子EGF、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1TGF-β1)水平測(cè)定：ELISA試劑盒檢測(cè)到銀屑病組SMSCs分泌EGF水平高于對(duì)照組(P0.05),分泌TGF-β1水平低于對(duì)照組(P0.05)。⑥基因譜差異表達(dá)分析：銀屑病組與正常對(duì)照組SMSCs基因表達(dá)譜顯著不同,共篩選出1927個(gè)差異表達(dá)基因(1090個(gè)基因表達(dá)呈增高趨勢(shì),837個(gè)基因呈降低趨勢(shì))；其中銀屑病組UHRF1的mRNA水平呈高表達(dá)狀態(tài)(P0.05)。結(jié)論：①本實(shí)驗(yàn)建立了穩(wěn)定的銀屑病組SMSCs體外分離培養(yǎng)鑒定方法,兩組SMSCs均存在異質(zhì)性；②銀屑病組SMSCs生物學(xué)活性存在異常；③銀屑病組SMSCs差異表達(dá)基因分析顯示UHRF1的mRNA水平呈高表達(dá)。提示表達(dá)上調(diào)的UHRF1可能與銀屑病SMSCs生物學(xué)特性異常密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 SMSCs 異質(zhì)性 表型遺傳修飾 UHRF1
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-12
• 第一章 材料與方法12-20
• 1.1 標(biāo)本來(lái)源12
• 1.2 主要試劑12-13
• 1.3 主要儀器設(shè)備13-14
• 1.4 主要溶液配制14-15
• 1.5 實(shí)驗(yàn)方法15-19
• 1.6 統(tǒng)計(jì)處理19-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-23
• 2.1 體外培養(yǎng)SMSCs的形態(tài)學(xué)特征20
• 2.2 SMSCs表面標(biāo)志物鑒定結(jié)果20
• 2.3 SMSCs多向分化潛能鑒定結(jié)果20-21
• 2.4 SMSCs生長(zhǎng)增殖能力檢測(cè)結(jié)果21
• 2.5 SMSCs分泌細(xì)胞因子水平測(cè)定21-22
• 2.6 SMSCs差異表達(dá)基因篩選22
• 2.7 UHRF1 mRNA在兩組SMSCs中的表達(dá)22-23
• 第三章 討論23-27
• 第四章 結(jié)論27-28
• 附圖28-32
• 參考文獻(xiàn)32-37
• 綜述37-43
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況43-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 孫建方;銀屑病免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年01期

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本文編號(hào)：575260