本文關鍵詞：銀屑病患者皮損間充質(zhì)干細胞分離、培養(yǎng)、鑒定及對T細胞增殖影響的研究

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【摘要】：目的：銀屑病患者皮損間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在體外進行分離、培養(yǎng)及鑒定,明確皮膚MSCs的培養(yǎng)體系,并研究銀屑病患者皮損MSCs對外周血T細胞增殖的影響、銀屑病患者皮損MSCs細胞因子水平及與病變程度的相關性。 方法：①分離、培養(yǎng)15例銀屑病患者皮損與15例健康人皮膚的單個核細胞,②流式細胞術檢測細胞表面標記物CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105及HLA-DR③經(jīng)相應誘導劑誘導細胞,并鑒定多向分化的細胞④采用MTT法,觀察MSCs對外周血T細胞增殖的影響⑤ELISA法檢測第3代皮膚單個核細胞培養(yǎng)上清液細胞因子水平⑥根據(jù)銀屑病皮損面積和嚴重程度的PAS I評分法,經(jīng)Pearson相關分析、評估細胞因子水平與銀屑病病變程度的相關性。 結(jié)果：①分離、培養(yǎng)MSCs:a.分割皮膚組織成小組織塊,置于2.5g/L DispaseII酶、37℃三小時,分離真皮和表皮、棄表皮,將真皮切碎、吹打、過濾、離心、收集細胞,培養(yǎng)至5%C02、37℃培養(yǎng)箱中；b.待細胞貼壁達90%以上,傳至第3代；c.倒置顯微鏡下觀察兩組MSCs細胞形態(tài)相似；②流式細胞儀檢測MSCs表面標記物CD29、CD44、CD73、CD90及CD105均呈高表達,而CD34、CD45及HLA-DR呈低表達,證明培養(yǎng)MSCs有較高的純度；③誘導MSCs可向脂肪細胞、骨細胞及軟骨細胞分化④T細胞增殖活性檢測結(jié)果：銀屑病患者皮損及正常皮膚來源的MSCs對外周血T細胞增殖均有抑制作用(P0.05),而患者皮損MSCs的抑制能力減弱(P0.05)；⑤與健康人比較,銀屑病患者皮損MSCs上清液中IL-11顯著增高,而IL-6、HGF降低(P0.05)；⑥銀屑病患者皮損MSCs細胞因子水平與PAS I評分無相關性。 結(jié)論：①成功分離、培養(yǎng)、鑒定皮膚MSCs,建立了皮膚MSCs的培養(yǎng)體系,為培養(yǎng)皮膚MSCs提供正確、有效的方法；②銀屑病患者皮損MSCs對外周血T細胞增殖的抑制能力減弱；③銀屑病患者皮損MSCs對外周血T細胞增殖的抑制能力減弱可能是通過細胞因子分泌水平異常引起的,而細胞因子水平與PASI評分無相關性,揭示銀屑病患者皮損MSCs異�？赡軈⑴c銀屑病的發(fā)病。
【關鍵詞】：銀屑病 間充質(zhì)干細胞 T淋巴細胞 細胞因子
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-12
• 第一章 材料與方法12-20
• 1.1 標本來源12
• 1.2 主要試劑12-13
• 1.3 主要儀器設備13-14
• 1.4 實驗方法14-19
• 1.5 統(tǒng)計處理19-20
• 第二章 實驗結(jié)果20-23
• 2.1 MSCs培養(yǎng)形態(tài)學的觀察和細胞的鑒定20-21
• 2.2 T細胞增殖活性檢測結(jié)果(見表1)21
• 2.3 ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子結(jié)果(見表2)21
• 2.4 PEARSON相關分析患者細胞因子水平與病變嚴重程度21-23
• 第三章 討論23-26
• 第四章 結(jié)論26-27
• 參考文獻27-30
• 附圖30-33
• 綜述33-44
• 參考文獻40-44
• 致謝44-45
• 個人簡歷45

【參考文獻】

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本文編號：568159