本文關(guān)鍵詞：ADMA對人皮膚成纖維細胞衰老的作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 研究非對稱性二甲基精氨酸(asymmetrical dimethylarginine, ADMA)對人皮膚成纖維細胞(Human skin fibroblasts, HSF)衰老的影響及其可能機制。 方法： 1.用高效液相色譜(HPLC)法測定自然衰老和光老化皮膚組織和成纖維細胞中ADMA的濃度。 2.原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞,MTT比色法評價ADMA對HSF增殖的影響,確定最佳藥物處理濃度。 3.不同濃度ADMA(10,30,501μM)作用于HSF,48小時后,用p-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測衰老相關(guān)p-半乳糖苷酶活性,活性氧檢測試劑盒檢測細胞內(nèi)活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)濃度,免疫印跡法(western-bolt)檢測磷酸化p38MAPK,衰老相關(guān)蛋白P16、MMP-1的改變。 4.預先加入P38抑制劑SB203580(10μM)或抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)(10μM)1小時后,再加入ADMA(50μM)處理,上述同樣的方法檢測以上指標。 結(jié)果： 1.年老組皮膚組織和成纖維細胞中ADMA含量均明顯高于兒童組(P0.05),同一人中曝光部位皮膚組織中ADMA含量明顯高于非曝光部位(P0.05),UVA照射后HSF中ADMA的含量明顯升高(P0.05)。 2. ADMA能抑制人皮膚成纖維細胞的增殖,且隨濃度增加,抑制能力也相應增強,IC50=51.47±1.013μM。 3.不同濃度ADMA(10,30,50μM)處理HSF48小時后,細胞密度減少、細胞變大變圓,p-半乳糖苷酶染色率、衰老相關(guān)蛋白P16均隨ADMA濃度的增加而增加(P0.05),細胞出現(xiàn)衰老表型。 4.不同濃度ADMA(10,30,50μM)處理HSF后,ROS水平隨濃度增加而增加,磷酸化p38MAPK,MMP-1蛋白亦隨濃度逐漸增加(P0.05)。 5.P38抑制劑SB203580(10μM)能顯著下降A(chǔ)DMA所致的p-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白及MMP-1蛋白的升高；抗氧化劑NAC(10μM)亦能明顯下降A(chǔ)DMA所致的p-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白、ROS濃度、磷酸化p38MAPK及MMP-1蛋白的升高。 結(jié)論： 1.自然衰老和光老化皮膚組織及成纖維細胞中ADMA的含量顯著上升,ADMA在皮膚衰老過程中起重要作用； 2. ADMA能通過促進ROS的產(chǎn)生、激活p38MAPK磷酸化、從而促進MMP1的生成而誘導人皮膚成纖維細胞的衰老。
【關(guān)鍵詞】：ADMA 皮膚衰老 ROS p38MAPK MMP-1
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R751
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• ~.略語表9-10
• 前言10-13
• 第一章 材料和方法13-25
• 1.1 研究對象13
• 1.2 主要試劑盒儀器13-15
• 1.3 主要試劑配制15-18
• 1.4 實驗方法18-24
• 1.5 統(tǒng)計分析24-25
• 第二章 結(jié)果25-33
• 2.1 自然衰老皮膚組織及成纖維細胞中ADMA含量的變化25
• 2.2 光老化皮膚組織及成纖維細胞中ADMA含量的變化25-26
• 2.3 ADMA對HSF細胞增殖的影響26-27
• 2.4 ADMA對HSF細胞衰老的影響27-28
• 2.5 ADMA對HSF細胞ROS、磷酸化P-38MAPK、MMP-1的影響28-29
• 2.6 加入P38抑制劑SB203580或抗氧化劑NAC后磷酸化P-38MAPK,P-MAPKAPK2的改變并確定最適合的抑制劑濃度29-30
• 2.7 加入P38抑制劑SB203580或抗氧化劑NAC后ROS、磷酸化P-38MAPK,P-MAPKAPK2,MMP-1的變化30-31
• 2.8 加入P38抑制劑SB203580或抗氧化劑NAC后衰老指標的變化31-33
• 第三章 討論33-36
• 第四章 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-42
• 綜述42-57
• 參考文獻51-57
• 致謝57-58
• 攻讀學位期間主要的研究成果58

【參考文獻】

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本文編號：502166