目的:mTOR信號(hào)與細(xì)胞的增殖、生長、代謝等活性密切相關(guān),更為重要的是mTOR是自噬調(diào)控信號(hào)中的重要組成部分,而自噬同樣與細(xì)胞的增殖等生物學(xué)功能上密切相關(guān)。然而,mTOR/自噬信號(hào)通路對(duì)瘢痕疙瘩的作用仍未闡明。本研究分析瘢痕疙瘩患者中mTOR信號(hào)通路的活化情況及細(xì)胞的自噬水平,探討mTOR抑制劑雷帕霉素(Rapamycin)和KU-0063794在瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中的生物學(xué)效應(yīng),進(jìn)一步探究自噬機(jī)制在mTOR抑制劑發(fā)揮功能效應(yīng)中的作用。方法:1.分別在瘢痕疙瘩組織水平及其成纖維細(xì)胞水平,采用免疫組織化學(xué)染色及Western Blot的方法檢測mTOR和下游信號(hào)分子S6以及自噬相關(guān)蛋白LC3、ULKI、ATG7、ATG9A、ATG12的表達(dá)情況;細(xì)胞進(jìn)行吖啶橙(AO)熒光染色,觀察胞漿內(nèi)酸性囊泡的形成情況。2.以瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,分別給予mTOR抑制劑處理,包括100 nM雷帕霉素或5 μM KU-0063794刺激不同時(shí)間點(diǎn),分別通過CCK-8實(shí)驗(yàn)及BrdU摻入實(shí)驗(yàn)檢測其對(duì)細(xì)胞增殖的影響;Annexin V-EGFP/PI雙染通過流式細(xì)胞術(shù)檢測其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響,同時(shí),We...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

圖２?ｍＴＯＲ信號(hào)通路摘自ＣＳＴ公司官方網(wǎng)站ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌ．ｃｏｍ??８??

圖３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ方法檢測正常成纖維細(xì)胞及瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中ｍＴＯＲ及下游??效應(yīng)分子的表達(dá)??

圖５瘢痕疙瘩組織水平ｍＴＯＲ通路表達(dá)情況Ａ．免疫組織化學(xué)染色的方法原位標(biāo)??記ｍＴＯＲ及下游效應(yīng)分子Ｓ６及其磷酸化形式的表達(dá)情況（１０〇ｘ）?Ｂ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??

圖６瘢痕疙瘩組織中檢測自噬標(biāo)志蛋白的表達(dá)情況ａ．免疫組織化學(xué)染色法檢測??

本文編號(hào)：3883732