血管生成素基于其促血管發(fā)生活性,最早作為腫瘤血管生成因子被分離出來。已知血管生成素在血管內(nèi)皮細胞中進行核轉(zhuǎn)移作用,在核仁中發(fā)生積累并刺激rRNA的轉(zhuǎn)錄,進而誘發(fā)內(nèi)皮細胞的增殖促進血管發(fā)生。目前對于血管生成素的研究主要集中在其如何誘發(fā)腫瘤的血管發(fā)生,進而促進腫瘤的進一步生長和惡化。本文中我們研究血管生成素在黑色素瘤細胞生長中的作用,并分析血管生成素對于另一血管生成因子bFGF表達及功能的影響。我們將血管生成素的基因分別以正向和反向轉(zhuǎn)入人黑色素瘤A375細胞中,得到了穩(wěn)定的低表達和高表達血管生成素的細胞株。我們發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)入反義血管生成素基因的細胞株中,細胞的增殖受到了抑制,同時bFGF誘發(fā)的細胞增殖也受到了抑制,但是bFGF的表達水平卻提高了。相反,在轉(zhuǎn)染正義血管生成素基因的細胞株中,細胞的增殖提高了,同時bFGF誘發(fā)的細胞增殖也提高了,但是bFGF的表達水平下降了。另外我們利用免疫熒光實驗進行了血管生成素的核轉(zhuǎn)移分析,發(fā)現(xiàn)血管生成素在A375細胞中能夠進行核轉(zhuǎn)移作用。進一步的免疫透射電鏡實驗分析表明血管生成素進入細胞核后,其在核仁的分布與rDNA的分布及rRNA的合成區(qū)域相同,可能其作用與...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
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英文摘要
第一章 文獻綜述
    一、血管生成因子與腫瘤的關系
        (一) 血管生成簡介
        (二) 血管生成與腫瘤
        (三) 抗血管生成的腫瘤治療
        (四) 血管生成因子簡介
        (五) 血管生成因子對腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及預后的意義
    二、血管生成素的結構功能及與腫瘤的關系
        (一) 血管生成素的結構與性質(zhì)
        (二) 血管生成素的生物學功能
        (三) 血管生成素的作用機制
        (四) 血管生成素與腫瘤
        (五) 血管生成素的抑制劑
    三、bFGF的結構功能及與腫瘤的關系
        (一) bFGF的結構與性質(zhì)
        (二) bFGF的作用機制
        (三) bFGF的生物學作用
        (四) bFGF與腫瘤
    四、黑色素瘤的研究進展
        (一) 黑色素瘤簡介
        (二) 黑色素瘤與血管生成因子
        (三) 血管生成素在黑色素瘤中的表達及其作用
        (四) bFGF在黑色素瘤中的表達及其作用
        (五) 抗血管生成因子的黑色素瘤治療
第二章 引言
    一、研究背景和立題依據(jù)
    二、本文的研究內(nèi)容和意義
第三章 實驗材料與方法
    一、實驗材料
        (一) 細胞和質(zhì)粒
        (二) 主要試劑
        (三) 主要儀器
    二、實驗方法
        (一) 大量制備質(zhì)粒的方法
        (二) 哺乳動物細胞培養(yǎng)
        (三) 哺乳動物細胞轉(zhuǎn)染
        (四) 哺乳動物細胞基因組的提取
        (五) 哺乳動物細胞總RNA的提取
        (六) 逆轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)
        (七) 酶聯(lián)免疫吸附實驗
        (八) SDS-PAGE 電泳及Western Blotting
        (九) 免疫熒光
        (十) 免疫膠體金透射電鏡
        (十一) MTT法
第四章 實驗結果與分析
    一、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染血管生成素基因的細胞株的獲得
        (一) 質(zhì)粒的制備及電穿孔轉(zhuǎn)染與篩選
        (二) 陽性細胞克隆的鑒定
    二、外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細胞內(nèi)源血管生成素表達的影響
        (一) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細胞內(nèi)源血管生成素m RNA 表達的影響
        (二) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細胞內(nèi)源血管生成素蛋白表達的影響
    三、血管生成素對A375 細胞生長的影響
        (一) MTT 法實驗條件的確定
        (二) 血管生成素對細胞增殖的影響
    四、血管生成素在A375 細胞中進行核轉(zhuǎn)移作用
        (一) 血管生成素核轉(zhuǎn)移作用的免疫熒光分析
        (二) 免疫電鏡分析血管生成素在細胞核中的定位
    五、新霉素對A375 細胞的增殖具有抑制作用
        (一) 新霉素抑制血管生成素在A375 細胞中的核轉(zhuǎn)移作用
        (二) 新霉素抑制A375 細胞的增殖
    六、血管生成素對bFGF 表達的影響
        (一) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細胞bFGF mRNA 表達的影響
        (二) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細胞bFGF 蛋白表達的影響
    七、血管生成素對bFGF 誘發(fā)的細胞增殖的作用
第五章 討論
    一、外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入影響細胞內(nèi)源血管生成素的表達
        (一) 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系的建立
        (二) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入影響細胞內(nèi)源血管生成素的表達
    二、血管生成素對A375 細胞的增殖具有促進作用
    三、血管生成素通過核轉(zhuǎn)移作用促進A375 細胞的增殖
        (一) 血管生成素在A375 細胞中進行核轉(zhuǎn)移作用
        (二) 新霉素抑制血管生成素在A375 細胞中的核轉(zhuǎn)移作用
        (三) 新霉素對A375 細胞的增殖具有抑制作用
    四、血管生成素對bFGF 表達具有負調(diào)節(jié)的作用
    五、血管生成素對bFGF 誘發(fā)的細胞增殖具有促進作用
結論與創(chuàng)新點
參考文獻
在學期間公開發(fā)表論文及著作情況
在讀期間參加科研項目情況



本文編號：3860338