目的探討微小RNA-146a (miR-146a)對(duì)人黑色素瘤A375細(xì)胞增殖與侵襲能力的影響及可能機(jī)制。方法利用陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將miR-146a模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染入黑色素瘤A375細(xì)胞,使miR-146a過(guò)表達(dá)或低表達(dá),采用MTT檢測(cè)細(xì)胞活力變化,應(yīng)用Transwell小室法檢測(cè)A375細(xì)胞侵襲能力的變化。根據(jù)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)FBXL10為miR-146a的下游靶基因,雙熒光素酶報(bào)告分析進(jìn)行驗(yàn)證。分別采用實(shí)時(shí)qPCR與Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組A375細(xì)胞FBXL10 mRNA與蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果與對(duì)照組比較,miR-146a模擬物能夠顯著抑制A375細(xì)胞增殖和侵襲能力(均P <0.05)。雙熒光素酶報(bào)告分析結(jié)果顯示,FBXL10為miR-146a的下游靶基因,miR-146a過(guò)表達(dá)可顯著降低FBXL10蛋白與mRNA的表達(dá)水平;miR-146a抑制劑的作用則與之相反。結(jié)論 miR-146a過(guò)表達(dá)能夠抑制A375細(xì)胞增殖和侵襲能力,其作用機(jī)制可能與降低FBXL10表達(dá)相關(guān)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組：
        1.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)：
        1.2.3 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)：
        1.2.4 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)與熒光素酶報(bào)告分析：
        1.2.5 實(shí)時(shí)q PCR實(shí)驗(yàn)：
        1.2.6 Western blotting檢測(cè)：
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)結(jié)果
    2.2 MTT檢測(cè)結(jié)果
    2.3 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 熒光素酶報(bào)告分析結(jié)果
    2.5 實(shí)時(shí)q PCR檢測(cè)結(jié)果
    2.6 Western blotting檢測(cè)結(jié)果
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