目的:研究毒蕈堿型M₃受體拮抗劑（4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide,4-DAMP）對黑色素瘤增殖的抑制作用,從而探討M₃受體拮抗劑在抗腫瘤領(lǐng)域的發(fā)展前景及意義。方法:利用MTT [3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]檢測腫瘤細(xì)胞活力;EdU熒光染色觀察細(xì)胞增殖情況。成年雄性BALB/c裸小鼠分為對照組、5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil, 5-Fu）組(20 mg·kg^-1·d^-1)及4-DAMP組(2 mg·kg^-1·d^-1),建立荷瘤模型。連續(xù)給藥21 d后處死小鼠,計(jì)算抑制率、脾指數(shù)。實(shí)時(shí)定量PCR （quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR）檢測A375細(xì)胞系中M3R、MIA（melano... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 腫瘤細(xì)胞模型的建立與分組
    1.4 MTT比色法
    1.5 EdU細(xì)胞增殖檢測
    1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組與飼養(yǎng)
    1.7 小鼠腫瘤模型建立及一般檢測
    1.8 腫瘤組織H&E染色
    1.9 RNA敲減及轉(zhuǎn)染
    1.10 qRT-PCR
    1.11 Western Blot
    1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 MTT篩選藥物濃度
    2.2 4-DAMP抑制黑色素瘤增殖的作用
    2.3 EdU檢測細(xì)胞增殖
    2.4 黑色素瘤的形態(tài)及病理學(xué)分析
    2.5 4-DAMP對瘤質(zhì)量、抑制率、脾指數(shù)的影響
    2.6 小鼠的體重變化曲線
    2.7 4-DAMP對腫瘤質(zhì)量及體積的影響
    2.8 A375黑色素瘤細(xì)胞系中MIA、SP-1及Lnc-SPRY4-IT1的表達(dá)
        2.8.1 拮抗M3受體對MIA的基因表達(dá)影響
        2.8.2 拮抗M3受體對SP-1的基因表達(dá)影響
        2.8.3 拮抗M3受體對LncSPRY4-IT1的基因表達(dá)影響
    2.9 拮抗M3受體對t-ERK/p-ERK的表達(dá)影響
3 討論



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