目的明確癌基因B-RafV600E在Mps1和B-RafWT/MEK/ERK通路之間自動(dòng)調(diào)節(jié)的負(fù)反饋回路中抵抗作用的具體機(jī)制。方法 （1）Sbcl2轉(zhuǎn)染B-RafWT和Mps1-KD,Western blot方法檢測(cè)p-ERK水平;（2）向B-Raf野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35細(xì)胞及V600E突變型SK-MEL28、A375細(xì)胞中過表達(dá)Mps1,Western blot方法檢測(cè)p-ERK水平;（3）在SK-MEL31、Sbcl2、WM35細(xì)胞中敲低AKT,轉(zhuǎn)染Mps1,Western blot方法檢測(cè)p-ERK水平;（4）在SK-MEL31、Sbcl2、WM35細(xì)胞中敲低內(nèi)源性B-Raf,過表達(dá)外源性RafV600E,Western blot方法檢測(cè)p-AKT水平;敲低SK-MEL-28、A375細(xì)胞中RafV600E,Western blot方法檢測(cè)p-A K T水平。結(jié)果 （1）M p s 1激酶和B-RafWT/MEK/ERK通路之間的自動(dòng)負(fù)反饋通路不依賴Mps1激酶的活性;（2）在野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35細(xì)胞中外源性Mps1的表達(dá)可誘導(dǎo)AKT... 

【文章來源】：腫瘤防治研究. 2015,42(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
0引言
1材料與方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2反轉(zhuǎn)錄病毒的制備
        1.2.3目的細(xì)胞的感染
        1.2.4Westernblot檢測(cè)
2結(jié)果
    2.1Mps1激酶活性對(duì)Mps1和B-RafWT/MEK/ERK通路之間的負(fù)反饋調(diào)節(jié)的影響
    2.2在黑色素瘤細(xì)胞中外源性Mps1的表達(dá)對(duì)AKT的磷酸化及ERK活性的影響
    2.3敲低野生型黑色素瘤細(xì)胞中的AKT后,觀察對(duì)Mps1和B-RafWT/MEK/ERK之間的負(fù)反饋通路的影響
    2.4B-RafV600E對(duì)AKT的磷酸化的影響
3討論



本文編號(hào)：3639609