目的：利用激光的生物刺激效應研究低強度592 nm和630 nm激光對成年人及老年人皮膚成纖維細胞的增殖活性的作用,以及對前膠原基因和細胞內信號轉導分子SMAD基因表達的影響,為低強度592 nm和630 nm激光用于改善皮膚老化提供細胞學依據和可供參考的治療參數。方法：1.用體外培養(yǎng)的成年人和老年人真皮成纖維細胞作為細胞模型,分別以波長592 nm和630 nm的連續(xù)激光對細胞進行照射,照射功率為10 mw和30mw,功率密度為3.5mw/cm2和10.6mw/cm2,分別非重疊照射2 min、5 min和10 min,連續(xù)照射3 d,用于檢測細胞增殖活性；功率密度為3.5 mw/cm2和10.6mw/cm2,分別非重疊照射5min和10min,連續(xù)照射3 d,用于檢測前膠原基因和SMADs mRNA表達。2.激光照射前以及每次照射后24 h,用相差顯微鏡對細胞照相,比較細胞形態(tài)、數量的變化。3.用MTT比色法檢測細胞增殖活性。4.應用RT-PCR技術檢測細胞前膠原Ⅰ型α1、Ⅰ型α2、Ⅲα1以及SMADs mRNA的表達,用Bandscan5.0凝膠成像系統(tǒng)分析軟件測定PCR產物電泳... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

孔培養(yǎng)板接種示意圖

天津醫(yī)科大學碩士學位論文第三章結果3.1細胞形態(tài)學觀察由于%孔培養(yǎng)板的底部凹凸不平，相差顯微鏡不能清晰成像，故細胞形態(tài)學照片以6孔板為例，首先在顯微鏡下觀察細胞分布情況，從各實驗孔和對照孔選擇細胞數目和分布相似的區(qū)域，在外蓋上對應的位置做標記，從種植后24h，到照射實驗結束后的24h，用100X相差顯微鏡連續(xù)四天在同一時間對各做標記的位置照相，以630Inn激光照射細胞為例，結果如下:

圖14高功率密度(l0.6mw/。擴)組照射后60h3.2MTT法檢測激光對皮膚成纖維細胞增殖活性的影響原理:四哇鹽比色法試驗是一種檢測細胞存活和生長的方法。實驗所用的顯色劑四哇鹽是一種能接受氫原子的染料，化學名為3一(4，5一二甲基唆哇一2)一2，5一二苯基四氮哇澳鹽，商品名是唆哇鹽，簡稱為MTT。活細胞線粒體中的玻拍酸脫氫酶能使外源性的M竹還原為難溶性的藍紫色結晶物少ormaZan)，并沉積在細胞中，而死細胞則無此功能。二甲基亞礬價MsO)能夠溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在550一600Inn波長處測定光吸收度可間接反映細胞增殖活性。在一定細胞數目范圍內，MTT結晶物形成的量與細胞數成正比。將每個實驗孔的吸光度值連續(xù)測量三次，分別取平均值，數據用SPSSI1.5

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3597186