目的:端粒酶是一種核糖核蛋白復合物,能以自身RNA 成分為模板催化染色體末端端粒重復序列的延伸,使細胞得以持續(xù)增殖甚至永生化。絕大多數(shù)惡性腫瘤和某些炎性增生性疾病包括銀屑病伴有端粒酶活性的增高。銀屑病是一種T 細胞介導的免疫性疾病,存在角質形成細胞的增殖和凋亡異常。端粒酶活性與銀屑病角質形成細胞的增殖和凋亡及T 細胞的活化密切相關,本研究將喜樹堿和一種新的喜樹堿類化合物喜樹異堿作用于人永生化表皮細胞和人臍靜脈血管內皮細胞,觀察兩種藥物對細胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影響,以探討喜樹堿類藥物抗銀屑病作用的可能機制;同時觀察尋常型銀屑病患者外周血單個核細胞的端粒酶活性及與疾病嚴重程度的相關性,以探討端粒酶活性檢測在銀屑病中的作用。方法:將不同濃度的喜樹堿和喜樹異堿分別作用于體外培養(yǎng)的HaCaT 細胞和ECV304 細胞,用MTT 法檢測兩種藥物對HaCaT 細胞增殖的抑制作用及有效濃度范圍;倒置顯微鏡和透射電鏡觀察細胞處理后的形態(tài)學變化;流式細胞儀檢測細胞周期及凋亡;端粒重復序列擴增-酶聯(lián)免疫吸附（TRAP-ELISA）法檢測細胞的端粒酶活性。密度梯度離心法分離19 名尋常型銀屑病患者和13... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

光鏡下觀察不同濃度喜樹堿作用48小時HaCaT的細胞形態(tài)變化（10х20）

. 2μg/ml 喜樹堿 D. 4μg/ml 喜樹堿 2 光鏡下觀察不同濃度喜樹堿作用 48 小時 HaCaT 的細胞形態(tài)變化（10х2電鏡下觀察有典型的凋亡細胞出現(xiàn)，細胞微絨毛明顯減少，細積縮小，胞漿內細胞器減少，細胞漿濃縮，核碎裂，核仁變小，質致密呈斑塊狀，聚集于核膜成境界分明的新月體狀，細胞膜出泡現(xiàn)象，可見典型的凋亡小體（圖 3）。

C. 2μg/ml 喜樹堿 D. 4μg/ml 喜樹堿圖 4 不同濃度喜樹堿作用 48 小時對 HaCaT 細胞周期和細胞凋亡的影響表 2 不同濃度的喜樹堿對 HaCaT 細胞周期的影響藥物濃度 48h（μg/ml） G1(%) S(%) G2/M(%) Ap(%)012461.256.547.638.230.740.350.861.88.13.21.60---1.48.49.8（四）PCR-ELISA 法檢測喜樹堿對細胞端粒酶活性的影響根據(jù)上述實驗結果，2μg/ml 的喜樹堿作用 48 小時誘導 HaCaT

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3569211