目的:本研究基于IL-22介導的角質形成細胞中miRNAs及mRNAs的差異表達,在miRNA及mRNA表達譜芯片前期研究的基礎上,檢測miR-548a-3p對角質形成細胞的生物學功能及其靶基因,進而從表觀遺傳學角度進一步探究IL-22誘導下microRNA對角質形成細胞增殖作用的分子機制。方法:（1）將人永生化角質形成細胞（HaCaT細胞株）分為實驗組和對照組,分別給予100 ng/ml的IL-22刺激24h和零刺激,實驗重復3次。而后使用RNAiso Plus試劑提取細胞總RNA,并檢測其濃度和純度,以確�？稍诖撕髮嶒炛惺褂�;（2）從表達譜芯片結果中選取某目標差異miRNA,并選擇U6為內參照,對此目標差異miRNA的芯片結果,通過實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法進行驗證,以2-△△Ct法計算數據相對表達量,分別進行3次獨立實驗;根據入選標準,選擇6例尋常型銀屑病患者及6例正常人對照,分別對其皮損和皮膚組織樣本,采用RT-qPCR法進行rniRNA的分子表達檢測,同樣用2-△△Ct法表示;（3）向HaCaT細胞中,分別加入模擬物、抑制物、模擬物和抑制物的陰性對照進行轉染,并實... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：59 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：?ＲＴ－ｑＰＣＲ結果表明，ＩＬ－２２刺激ＨａＣａＴ細胞２４ｈ后可使ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表達水??平顯著上調，明顯高于對照組（Ｐ＜〇．〇５）

圖２：?ＲＴ－ｑＰＣＲ結果也表明，可使６例尋常型銀屑病患者皮損中ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表達??水平較６例正常對照顯著上調（Ｐ＜０．０５）

圖３：用ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ和ｍｉｍｉｃｓ?ＮＣ轉染ＨａＣａＴ細胞，分別于轉染后２４ｈ、??４８ｈ、７２ｈ收集細胞，采用ｑＲＴ－ＰＣＲ法檢測ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ的表達情況，以驗證轉染??是否成功。結果表明，ｍｉｍｉｃｓ組ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表達與轉染ｍｉｍｉｃｓ?ＮＣ組相比明顯增??加，其中４８ｈ時轉染效果最好（Ｐ＜０．０５）。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]銀屑病的流行病學與危險因素[J]. 張建中.  實用醫(yī)院臨床雜志. 2013(01)
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博士論文
[1]C/EBPα調控角質形成細胞增殖和分化在尋常型銀屑病皮損形成中的作用[D]. 馬偉元.山東大學 2014

碩士論文
[1]miR-122-5p通過靶向Sprouty2在IL-22介導角質形成細胞增殖中的作用[D]. 江萌.山東大學 2016



本文編號：3232776