本文關鍵詞：Tiam1及Nm23-h1在惡性黑色素瘤中的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的惡性黑色素瘤簡稱惡黑(Malignant Melanoma,MM),是一種高度惡性腫瘤。其主要起源于黑色素細胞,多見于皮膚及粘膜。皮膚惡性黑色素瘤(Cutaneous Malignant Melanoma,CMM)與其他體表腫瘤相比,侵襲及轉移最具特征性,也是影響患者預后最重要的原因。CMM侵襲轉移機制異常復雜,是由多種致病因素、多個發(fā)病步驟及階段共同作用的結果。Liotta提出的惡性腫瘤細胞轉移的三步假說即粘附、降解、移動。包括原發(fā)灶處腫瘤細胞的脫落,通過各種作用機制進入血運及淋巴管中播散,隨后在其他器官組織處粘附,之后通過分泌相關因子加速新生血管生成并增強腫瘤細胞對機體免疫系統(tǒng)的對抗作用,最終形成新的惡性腫瘤病灶。目前各項有關研究表明其中尤為重要的因素是其相關癌基因的激活及其抑癌基因表達降低或消失,引起癌細胞增殖及侵襲能力增強而致病。因此針對惡黑的各種癌基因及抑癌基因作為靶點的基因治療逐漸成為一個有效治療方法。T淋巴瘤侵襲轉移誘導因子1(T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1,Tiam1)編碼的Tiam 1蛋白是一系列Roh樣GTPase的鳥苷酸轉換因子(guanine nucleotide exchange factor,GEF)。Tiam1主要能參與GDP與GTP的轉化過程中,從而進一步影響微管蛋白的聚合和解聚;另外進一步激活Rac 1(Ras相關的C3肉毒素底物1),參與JNK激酶(c-jun N-terminal kinase)、p38 MAPK激酶(mitogen activated protein kinase)等下游信號分子轉導。通過上述作用機制對機體的細胞骨架進行調節(jié),參與細胞的形變及偽足的形成,增強細胞的運動、遷移能力。同時對微管蛋白進行調控并與其他基因協(xié)同作用共同影響細胞的增殖與凋亡。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉移過程中起到重要作用。轉移抑制因子23(non-metastasis 23 homologue 1,Nm23-h1)基因是近來研究較多的一個基因。Nm23-h1的生物活性主要通過其編碼蛋白產物核苷二磷酸激酶(NDPK)來實現。NDPK一方面直接參與微管蛋白的聚合與解聚從而調節(jié)細胞有絲分裂及細胞運動;另一方面NDPK通過多種方式參與G蛋白的信號轉導通路,介導細胞的增殖與形態(tài)變化;另外其與Rho家族成員廣泛藕聯(lián),通過對下游基因的表達調控來影響腫瘤細胞的增殖及浸潤。本實驗通過RT-PCR法了解Tiam1及Nm23-h1在A375細胞和正常皮膚組織細胞中的轉錄水平差異,利用免疫組化方法檢測Tiam1及Nm23-h1蛋白在皮膚惡性黑色素瘤、皮膚交界痣和正常皮膚組織中的表達。初步探究其與惡性黑色素瘤侵襲轉移能力的相關性,并進一步了解Tiam1與Nm23-h1之間的相關作用。此次研究在于揭示Tiam1及Nm23-h1在惡性黑色素瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的變化規(guī)律,為臨床基因靶向治療惡黑提供實驗依據。材料與方法采用RT-PCR法檢測Tiam1及Nm23-h1m RNA在A375細胞及正常皮膚組織細胞中的轉錄水平差異。運用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行實驗數據分析,運用t檢驗法,有統(tǒng)計學意義的α=0.05,P0.05。收集2010~2014年期間鄭州大學第一附屬醫(yī)院病理科存檔的皮膚惡性黑色素瘤蠟塊66例,交界痣30例。年齡22~76歲不等,平均年齡58.8±9.2歲;男性36例,女性30例;對照組所采用的正常皮膚組織20例來自于鄭州大學第一附屬醫(yī)院整形外科手術切除的多余正常全厚皮膚組織。以上所有實驗對象具有完整的病史資料,無相關疾病病史,也未行相關如冷凍、化學藥物、激光及放射等治療。各組患者性別、年齡及病變部位等差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。66例CMM、30例皮膚交界痣和20例正常皮膚組織中Tiam1及Nm23-h1蛋白的表達水平采用免疫組化法進行檢測。采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對實驗數據進行分析,運用卡方檢驗和pearson法相關性分析,有統(tǒng)計學意義的α=0.05,P0.05。結果1.人正常皮膚組織及人惡性黑色素瘤A375細胞中Tiam1 m RNA相對表達量分別為1.001±0.074、2.546±0.357,正常皮膚組織及A375細胞中Nm23-h1m RNA相對表達量分別為0.999±0.034、0.953±0.022。Tiam1 m RNA在人惡性黑色素瘤A375細胞中的表達明顯高于其在人正常皮膚組織中的表達;Nm23-h1m RNA在人惡性黑色素瘤A375細胞中的表達低于其在人正常皮膚組織中的表達,其差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.Tiam1蛋白主要表達于細胞質,呈棕褐色顆粒。Tiam蛋白在CMM、皮膚交界痣及正常皮膚組中陽性表達率分別為78.79%(52/66)、46.67%(14/30)和10.00%(2/20),呈逐漸降低趨勢,差異具有統(tǒng)學意義(P0.05)。三組間兩兩比較顯示:CMM組中Tiam1蛋白陽性表達明顯高于其在皮膚交界痣中的陽性表達,其在交界痣的表達明顯高于正常皮膚組織中的表達(P0.05);在CMM中隨腫瘤浸潤深度的增加Tiam1蛋白的陽性表達也逐漸增高,在伴有淋巴結轉移的CMM患者中Tiam1蛋白表達水平高于不伴有淋巴結轉移者,并且差異均具有統(tǒng)計意義(P0.05)。3.Nm23-h1蛋白主要表達于細胞質中,呈棕黃色顆粒狀。Nm23-h1蛋白在CMM、皮膚交界痣及正常皮膚組中陽性表達率為15.15%(10/66)、44.67%(14/30)和80.00%(16/20)。Nm23-h1蛋白在CMM、皮膚交界痣及正常皮膚中表達逐漸增強,其在三組中的陽性表達率差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),三組間兩兩比較顯示:CMM組中Nm23-h1蛋白陽性表達明顯低于其在皮膚交界痣中的陽性表達,其在交界痣的表達明顯低于正常皮膚組織中的表達(P0.05);在CMM中隨腫瘤浸潤深度的增加Nm23-h1蛋白的陽性表達也逐漸降低,在伴有淋巴結轉移的CMM患者中Nm23-h1蛋白表達水平低于不伴有淋巴結轉移者,并且差異均具有統(tǒng)計意義(P0.05)。4.Tiam1及Nm23-h1蛋白表達的相關性分析:Tiam1蛋白的表達與Nm23-h1蛋白的表達均呈負相關(r=-0.298,P0.05)。結論1.Tiam1在惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中存在促進作用。2.Nm23-h1在惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起一定的抑制作用。3.Tiam1、Nm23-h1可能作為治療惡性黑色素瘤的基因靶點,為惡黑的診斷治療及預后分析提供新的參考。
【關鍵詞】：T淋巴瘤侵襲轉移誘導因子1 轉移抑制因子23 惡性黑色素瘤 逆轉錄聚合酶鏈反應 免疫組化
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 中英文縮略詞對照表14-15
• 前言15-19
• 材料與方法19-27
• 結果27-31
• 討論31-37
• 結論37-38
• 參考文獻38-41
• 附圖41-44
• 綜述部分 惡性黑色素瘤與Tiam1 的研究進展44-59
• 參考文獻56-59
• 個人簡介及在讀期間已發(fā)表和正在發(fā)表的論文59-60
• 致謝60-61

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 劉書靜;田道法;何迎春;曾亮;黃辰;劉宇勤;;不同轉移潛能鼻咽癌細胞鈣電流特征與細胞遷徙能力的相關性[J];癌癥;2007年05期

2 胡華;;多西他賽對小鼠肺轉移黑色素瘤抑制作用的研究[J];標記免疫分析與臨床;2015年06期

中國博士學位論文全文數據庫 前3條

1 陳潔;人卵巢癌細胞系具有不同轉移潛能亞系的分離和鑒定及體外腹膜模型的建立[D];山東大學;2005年

2 程萬宏;Wnt-1基因和nm23-H_1基因在肺腺癌中的表達及siRNA抑制Wnt-1基因對人肺腺癌細胞株A2的影響[D];中國醫(yī)科大學;2007年

3 劉書靜;鼻咽癌顱內轉移的證型特點及其分子基礎初步研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2005年

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本文編號：318510