目的:惡性黑素瘤是一種高度惡性的皮膚腫瘤,其對(duì)常規(guī)化療藥物的耐藥性嚴(yán)重影響其預(yù)后,因而逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性,以提高化療療效,是治療惡性黑素瘤的重要課題。目前認(rèn)為惡性黑素瘤耐藥的主要機(jī)制是凋亡抑制,越來越多研究證實(shí)特異性下調(diào)某些凋亡抑制基因以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,可以增加惡性黑素瘤對(duì)化療藥物的敏感性。WT1基因最早發(fā)現(xiàn)作為一種抑癌基因參與Wilm’s瘤的發(fā)生,近年來研究證實(shí)WT1基因在多種實(shí)體瘤細(xì)胞中高表達(dá),具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡作用,發(fā)揮癌基因的作用。國外研究發(fā)現(xiàn)WT1基因在80%以上惡性黑素瘤中表達(dá),而在良性色素痣和正常皮膚中未見表達(dá),下調(diào)WT1基因可以抑制惡性黑素瘤細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。但抑制WT1基因表達(dá)能否逆轉(zhuǎn)惡性黑素瘤細(xì)胞的耐藥性尚未見報(bào)道。RNA干擾技術(shù)是近年來發(fā)展起來的基因沉默新技術(shù),能高效,特異地抑制目的基因的表達(dá),因此很快成為研究基因功能的重要工具。本研究旨在探討利用RNA干擾沉默WT1基因?qū)θ宿D(zhuǎn)移性惡性黑素瘤WM451細(xì)胞生長,凋亡及其對(duì)順鉑敏感性的影響,為惡性黑素瘤的基因治療提供理論依據(jù)。方法:1.構(gòu)建針對(duì)WT1基因的siRNA真核表達(dá)載體;2.利用脂質(zhì)體將siRNA... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：33 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡顯示轉(zhuǎn)染W(wǎng)T1siRNA質(zhì)粒24h后成功轉(zhuǎn)染細(xì)胞

2.倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞形態(tài)的變化：轉(zhuǎn)染前，細(xì)胞貼壁較好，呈扁平多角形，中間有圓形的核，核內(nèi)有一至多個(gè)核仁，轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，細(xì)胞變圓，貼壁不佳，細(xì)胞突起消失（見圖2）。A:正常 WM451細(xì)胞 B:轉(zhuǎn)染 WT1siRNA質(zhì)粒的 WM541細(xì)胞圖2 倒置顯微鏡顯示轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞形態(tài)的變化3． RT-PCR檢測 RNA干擾對(duì) WM451細(xì)胞 WT1基因 mRNA的影響：細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組比較：實(shí)驗(yàn)組WT1mRNA表達(dá)水平下降了67%，實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組比較：實(shí)驗(yàn)組WT1mRNA表達(dá)水平下降了60%，空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組之間未見顯著差異（見圖3）。

1 2 3 4檢測RNA 干擾對(duì)WM451細(xì)胞WT1基因mRNA arker 2 空白對(duì)照 3 陰性對(duì)照 4 試驗(yàn)組ot檢測 RNA干擾對(duì) WM451細(xì)胞 WT1蛋白表組比較：WT1蛋白表達(dá)水平下降了67%。蛋白表達(dá)水平下降了63%,空白對(duì)照組與陰見圖4）。1 2 3

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]WT1基因與惡性腫瘤靶向免疫治療[J]. 顧偉英,陳子興.  腫瘤. 2007(03)
[2]RNA干擾的研究方法[J]. 楊宗照,帥江冰,Mudasser Habib.  中國獸藥雜志. 2005(11)



本文編號(hào)：2913783