目的:從細(xì)胞實驗和動物實驗兩個角度觀察阿維A酸(Acitretin)及其聯(lián)合抗癌藥物順鉑(DDP)對鼠B16黑色素瘤細(xì)胞增殖、分化的影響,初步研究阿維A酸治療惡性黑色素瘤的作用及其機(jī)制,探討其作用機(jī)制是否與阿維A酸影響survivin、Fas及VEGF的表達(dá)有關(guān),從而為臨床誘導(dǎo)分化治療惡性黑色素瘤提供實驗基礎(chǔ)。 方法: 1體外實驗: 1.1體外培養(yǎng)惡性黑色素瘤細(xì)胞株B16,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)比色法檢測不同濃度阿維A酸作用不同時間后對該細(xì)胞增殖的影響;光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。 1.2采用MTT比色法檢測阿維A酸與抗癌藥物順鉑聯(lián)合應(yīng)用對惡性黑色素瘤細(xì)胞株B16的增殖抑制作用,采用金氏公式分析相互作用指數(shù)(q),評價聯(lián)合后的作用,如q0.85表示相加作用,q0.85為拮抗作用。 2體內(nèi)實驗: C57BL/6J小鼠50只,于右前肢腋下皮下注射濃度為1×10~6個/ml的B16黑色素瘤細(xì)胞懸液0.2ml建立荷瘤小鼠模型。小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只,分別為陰性對照組,阿維A酸低劑量組,阿維A酸高劑量組,順鉑組及聯(lián)合治療組。于皮下接種瘤細(xì)胞第二天開始給藥,用藥共21天,每天觀察小鼠的狀態(tài),每3天測量一次瘤體積,最后一次給藥24小時后將小鼠處死,剝瘤稱重,計算抑瘤率。將腫瘤組織沿最大面剖開,常規(guī)固定并進(jìn)行HE染色及形態(tài)學(xué)觀察。免疫組化染色觀察藥物對survivin、Fas及VEGF在瘤組織中表達(dá)的影響。運用統(tǒng)計軟件SPSS12.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果: 1體外實驗: 1.1 MTT比色法顯示:阿維A酸(0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)對B16細(xì)胞增殖均具有抑制作用。不同濃度阿維A酸處理細(xì)胞24-72h后,與對照組相比,各處理組OD值均有不同程度下降,差異具有極顯著性(P0.01)。且隨阿維A酸處理濃度的增大、作用時間的延長,OD值逐漸下降,阿維A酸對B16細(xì)胞的增殖抑制率也逐漸增大。 1.2光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)果顯示:陰性對照組細(xì)胞貼壁生長良好,細(xì)胞呈梭形,透明,折光性好,細(xì)胞生長活躍。而用藥組細(xì)胞皺縮,破裂,呈不規(guī)則形,有的細(xì)胞兩端出現(xiàn)細(xì)長的偽足,細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)空泡,脫落細(xì)胞增多。 1.3 MTT比色法分析阿維A酸聯(lián)合順鉑對B16細(xì)胞的增殖抑制作用,結(jié)果顯示:金氏公式分析相互作用指數(shù)q值均大于0.85,即0.1、1.0、10、100μmol/L的阿維A酸可增強(qiáng)順鉑對B16細(xì)胞的增殖抑制作用,且隨阿維A酸濃度的增大,其對順鉑的協(xié)同作用逐漸增強(qiáng)。 2體內(nèi)實驗: 2.1瘤體積-時間生長曲線:各治療組小鼠腫瘤生長速度始終低于對照組,阿維A酸高劑量組、順鉑組和聯(lián)合給藥組抑制作用尤為顯著。 2.2瘤重、瘤體積及抑瘤率:阿維A酸低、高劑量組、順鉑組和聯(lián)合給藥組的平均瘤重均低于陰性對照組,抑瘤率分別為:26.94%、42.74%、60.64%和74.14%,與對照組比較差異有顯著性(P0.05)。各治療組平均瘤體積和抑制率也明顯低于對照組,與對照組比較差異有顯著性(P0.01)。 2.3 HE染色觀察瘤組織:對照組瘤組織邊界不清細(xì)胞密集排列,異型性明顯,而治療組瘤組織中心及邊緣可見不同程度的大片狀或灶性壞死。 2.4免疫組化結(jié)果顯示:各治療組的survivin,VEGF表達(dá)均低于對照組(P0.05),Fas的表達(dá)均高于對照組(P0.01),表明各治療組能顯著抑制凋亡基因survivin和VEGF的表達(dá),上調(diào)促凋亡基因Fas的表達(dá)。且各治療組Survivin的表達(dá)與Fas的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.766,P0.01),與VEGF的表達(dá)成正相關(guān)(rs=0.724,P0.01)。 結(jié)論: 1阿維A酸對鼠B16惡性黑色素瘤細(xì)胞具有增殖抑制及誘導(dǎo)分化的作用,為臨床MM的治療和化學(xué)預(yù)防提供了新的思路和理論依據(jù)。 2阿維A酸在一定濃度和時間范圍內(nèi)對B16細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)量效相關(guān)性和時間依賴性。 3阿維A酸可強(qiáng)化順鉑誘導(dǎo)B16細(xì)胞凋亡,推測阿維A酸可能增強(qiáng)B16細(xì)胞對化療藥的敏感性。 4阿維A酸對鼠B16黑色素瘤移植瘤生長有顯著的抑制作用,且呈一定的量效關(guān)系。 5阿維A酸對鼠B16黑色素瘤的抑制作用與其下調(diào)抑凋亡基因survivin、上調(diào)促凋亡基因Fas的表達(dá)及抑制VEGF的表達(dá)有關(guān)。這可能是其抗腫瘤增殖和促癌細(xì)胞分化的機(jī)理之一。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R739.5
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
研究論文 阿維A 酸對鼠816 黑色素瘤增殖抑制及誘導(dǎo)分化的實驗研究
    前言
    第一部分 阿維 A 酸對體外鼠816 黑色素瘤細(xì)胞的增殖抑制及誘導(dǎo)分化作用
        材料與方法
        結(jié)果
        附圖
        附表
    第二部分 阿維A 酸對鼠816 黑色素瘤移植瘤的增殖抑制及誘導(dǎo)分化作用
        材料與方法
        結(jié)果
        附圖
        附表
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述 維甲酸對皮膚腫瘤的誘導(dǎo)分化治療
致謝
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1 冉立偉,譚升順,王萬卷,邱實,雷小兵,曾惟惠;全反式維A酸、阿維A和他扎羅汀對人黑色素瘤細(xì)胞A375凋亡和Bax/Bcl-2蛋白表達(dá)的影響及意義[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2005年08期

2 李麗 ,李庭芳 ,張月明 ,陳曉 ,王顥 ,郭祥萍;全反式維甲酸與順鉑聯(lián)合在體外對卵巢癌細(xì)胞株3AO增殖、分化、凋亡的影響及其機(jī)制的探討[J];中國婦產(chǎn)科臨床雜志;2005年05期

3 羅權(quán);張錫寶;;阿維A治療兒童角化性疾病的研究現(xiàn)狀[J];國際皮膚性病學(xué)雜志;2006年03期

4 劉毅,蔡黔,張誠,張鮮英,朱云,張緒生,肖斌,姜疆;面部皮膚惡性腫瘤的手術(shù)治療及其美學(xué)問題探討[J];中國美容醫(yī)學(xué);2003年01期

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6 劉佳,郭麗,劉寧,李俊偉,李宏;維甲酸提高髓母細(xì)胞瘤的化療敏感性及其分子機(jī)制[J];中華腫瘤雜志;2000年01期

本文編號：2845678