目的探究拉坦前列素對(duì)人表皮黑素細(xì)胞增殖與黑素合成功能的影響,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。方法提取人原代表皮黑素細(xì)胞并培養(yǎng),用不同濃度(10~(-5)、10~(-6)、10~(-7)mol/L)的拉坦前列素處理細(xì)胞48小時(shí)。采用CCK8法檢測(cè)黑素細(xì)胞增殖水平;NaOH溶解法檢測(cè)黑素合成水平;Masson-Fontana染色法觀察細(xì)胞合成黑素顆粒數(shù)量及分布;多巴比色法檢測(cè)酪氨酸酶活性;Western印跡法及熒光定量PCR分別檢測(cè)黑素合成相關(guān)基因小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1(TYRP1)蛋白及mRNA的表達(dá);以及采用Western印跡法檢測(cè)經(jīng)拉坦前列素處理前后的人表皮黑素細(xì)胞表達(dá)MAPK途徑相關(guān)蛋白的水平。結(jié)果(1)10~(-6)、10~-55 mol/L拉坦前列素組黑素細(xì)胞的增殖水平與對(duì)照組相比更高,黑素合成亦顯著增加。10~(-7)mol/L拉坦前列素組較對(duì)照組的黑素細(xì)胞增殖水平、黑素合成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Masson-Fontana法染色后顯示,經(jīng)拉坦前列素處理的黑素細(xì)胞樹突上的黑素顆粒數(shù)量均較對(duì)照組更多,且黑素顆粒的顏色更深。(2)10~(-6)、10~-55 mol/L拉坦前列素組酪氨酸酶活性與對(duì)照組相比更高。一定濃度的拉坦前列素可增加MITF、TYR、TYRP1 mRNA的表達(dá),其中MITF mRNA的表達(dá)隨拉坦前列素濃度的升高而增加,而TYR和TYRP1的mRNA的表達(dá)均在10~-66 mol/L拉坦前列素組達(dá)峰。同樣的,MITF、TYR、TYRP1蛋白的表達(dá)也受拉坦前列素的影響,其中,各濃度拉坦前列素均能促進(jìn)MITF蛋白的表達(dá),而TYR、TYRP1蛋白的表達(dá)亦在10~-66 mol/L拉坦前列素組升高最明顯。(3)經(jīng)拉坦前列素處理的人表皮黑素細(xì)胞上的p-ERK表達(dá)降低,而在給予拉坦前列素處理的基礎(chǔ)上添加ERK激動(dòng)劑干預(yù)后,細(xì)胞酪氨酸酶活性、黑素合成功能及MITF、TYR、TYRP1基因mRNA和蛋白的表達(dá)均較單予拉坦前列素處理時(shí)降低。結(jié)論拉坦前列素對(duì)人表皮黑素細(xì)胞的增殖水平、酪氨酸酶活性以及黑素合成功能有一定的促進(jìn)作用,這種作用可能經(jīng)由MAPK/ERK-MITF-TYR途徑調(diào)控。
【學(xué)位單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R758.41
【部分圖文】：

拉坦前列素通過 ERK 通路調(diào)控人表皮黑素細(xì)胞的黑素合成功能軟件分析數(shù)據(jù)，GraphPad Prism 8.0 軟件繪制統(tǒng)計(jì)圖。2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1 人原代表皮黑素細(xì)胞的培養(yǎng)觀察與鑒定原代培養(yǎng)后一周左右，可在倒置顯微鏡下觀察到貼壁生長(zhǎng)的黑素細(xì)胞，其形態(tài)一致，大小均一，具有典型樹突樣結(jié)構(gòu)。黑素細(xì)胞胞核呈橢圓形，由核向外分支出 2 至 5 條樹突，樹突細(xì)長(zhǎng)，具有折光性，高倍鏡下可觀察到黑素顆粒沿樹突分布。對(duì)培養(yǎng)至第三代的黑素細(xì)胞進(jìn)行多巴染色（DOPA 染色），觀察到細(xì)胞胞漿及樹突呈現(xiàn)棕黑色，證實(shí)細(xì)胞為具有酪氨酸酶活性的正常黑素細(xì)胞。

圖 2.2 拉坦前列素對(duì)人表皮黑素細(xì)胞合成黑素的影響（Masson-Fontana 染色，×200）A：對(duì)照組；B：10-7mol/L 拉坦前列素組；C：10-6mol/L 拉坦前列素組；D：10-5mol/L 坦前列素組Figure 2.2 The effect of Latanoprost on the melanin content of human epidermal melanocyte(Masson-Fontana staining, ×200) A: Control group; B: 10-7mol/L Latanoprost group; C: 10-6mol/L Latanoprost group; D: 10-5mol/L Latanoprost group4 討論人類皮膚及毛發(fā)的顏色主要由黑素細(xì)胞決定，除了血紅蛋白和類胡蘿卜素以，黑素細(xì)胞分泌的黑色素是色素沉著的主要原因。黑色素主要分為兩種類型色/黃色的褐黑素和褐色/黑色的真黑素。含有黑色素的顆粒被稱為黑素小體，們由黑素細(xì)胞分泌后轉(zhuǎn)運(yùn)至角質(zhì)形成細(xì)胞，并在此呈現(xiàn)皮膚顏色。白癜風(fēng)是一

mol/L 拉坦前列素組最高。圖3.1 不同濃度拉坦前列素對(duì)人表皮黑素細(xì)胞小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1（TYRP1）mRNA表達(dá)的影響
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本文編號(hào)：2843039