發(fā)布時間：2020-09-24 17:40

　　 目的:本試驗旨在探索一種能夠明顯縮短角質(zhì)形成細胞(keratinocyte, KC)培養(yǎng)時間的細胞接種密度和適合組織工程應(yīng)用的角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基。通過檢測各代角質(zhì)形成細胞中朗格漢斯細胞(langerhans cell, LC)、黑色素細胞(melanocyte, MC)數(shù)量變化,及異體淋巴細胞混合試驗,揭示不同代角質(zhì)形成細胞、成纖維細胞免疫原性的變化,為皮膚組織工程科學選擇種子細胞提供實驗依據(jù)。 方法: (1)0.25%分離酶,0.125%胰酶0.01%EDTA 兩步酶法分離包皮角質(zhì)形成細胞,按不同密度接種,K-SFM、FAD 培養(yǎng)基和基礎(chǔ)培養(yǎng)基分別培養(yǎng),觀察原代融合生長時間,傳代生長情況。 (2)ATP 酶化學染色,免疫組化檢測各代角質(zhì)形成細胞中朗格漢斯細胞、黑色素細胞數(shù)量的變化。 (3)將凍存的不同代數(shù)人角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞,分別與健康的同種異體志愿者的外周血淋巴細胞混合,建立異體細胞體外免疫排斥模型。通過H3-TdR 標記,液體閃爍計數(shù)儀檢測異體淋巴細胞增殖情況。 結(jié)果: (1)采用中性蛋白酶和胰蛋白酶聯(lián)合消化的方法,真、表皮容易分離,臺盼蘭染色,活細胞數(shù)占總細胞數(shù)的95%以上。原代角質(zhì)形成細胞接種密度在1×105/cm~2～5×105/cm~2 時,細胞貼壁好,增殖速度快,體外培養(yǎng)周期顯著縮短。與FAD 培養(yǎng)基和基礎(chǔ)培養(yǎng)基比較,K-SFM 培養(yǎng)的細胞呈單層生長,數(shù)代后細胞形態(tài)與原代細胞仍然十分相似,且生長較快。 (2)ATP 酶染色僅在表皮鋪片中呈陽性。免疫組化染色原代角質(zhì)形成細胞中混有5.8%朗格漢斯細胞和8.1%黑色素細胞,Ⅰ代角質(zhì)形成細胞中混有2.1%朗格漢斯細胞和2.8%黑色素細胞。從Ⅱ代開始,角質(zhì)形成細胞混雜的朗格漢斯細胞和黑色素細胞均消失。 (3)異體淋巴細胞增殖實驗中,cpm 值隨角質(zhì)形成細胞、成纖維細胞代數(shù)增高,逐漸降低。原代、Ⅰ代角質(zhì)形成細胞、成纖維細胞cpm 值下降明顯,Ⅱ代、Ⅲ代、Ⅳ
【學位單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2005
【中圖分類】：R751

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6 李嘉s

本文編號：2826049