本文關(guān)鍵詞：rAAV2-TRAIL的構(gòu)建及對惡性黑色素瘤細胞的凋亡作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus,AAV)介導(dǎo)的腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand，TRAIL)基因?qū)盒院谏亓黾毎牡蛲鲎饔谩?方法 采用PCR方法，以TRAIL質(zhì)粒為模板，擴增出編碼sTRAIL的TRAIL胞外區(qū)片段，，將此TRAIL胞外區(qū)片段插入真核表達載體，構(gòu)建出穿梭質(zhì)粒pSNAV2.0-sTRAIL，利用細胞內(nèi)質(zhì)粒DNA同源重組法將擴增出的sTRAIL片段插入至腺相關(guān)病毒載體上，構(gòu)建出攜帶有表達sTRAIL的重組腺相關(guān)病毒rAAV2-sTRAIL。將該病毒體外轉(zhuǎn)染人惡性黑色素瘤細胞A375（實驗組）及人胚腎細胞HEK293（對照組），ELISA、Western blot法檢測目的基因在細胞中的表達，MTT法檢測其對細胞增殖的影響，電鏡下觀察及流式細胞儀檢測rAAV2-sTRAIL對A375的凋亡作用，分析其體外抗人惡性黑色素瘤細胞的機制。 結(jié)果 成功構(gòu)建出病毒rAAV2-sTRAIL，PCR檢測目的基因條帶正確；Western blot方法可在細胞內(nèi)檢測出現(xiàn)明顯TRAIL條帶；轉(zhuǎn)染48小時后ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中TRAIL，HEK293培養(yǎng)基中濃度為190.6±24.1ng/ml，A375培養(yǎng)基中濃度為56.7±12.4ng/ml；MTT法見rAAV2-sTRAIL可對A375增殖有明顯影響，而對HEK293無明顯影響；電鏡觀察及流式細胞儀檢測證實rAAV2-sTRAIL可誘導(dǎo)惡性黑色素瘤細胞A375凋亡。 結(jié)論 AAV2-sTRAIL可以在人正常細胞HEK293及惡性黑色素瘤細胞A375中高效表達并分泌到胞外，對惡性黑色素瘤細胞A375有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用，而對HEK293無明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：腺相關(guān)病毒 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 人惡性黑色素瘤細胞人胚腎細胞 凋亡
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第1章 引言9-13
• 第2章 AAV2-TRAIL 的構(gòu)建及對惡性黑色素瘤細胞的凋亡作用13-27
• 2.1 材料13-14
• 2.1.1 試劑材料13
• 2.1.2 儀器及設(shè)備13-14
• 2.2 實驗方法及步驟14-18
• 2.2.1 主要試劑和培養(yǎng)基配備方法14-15
• 2.2.2 rAAV2-sTRAIL 的構(gòu)建、擴增、純化及鑒定15-17
• 2.2.3 rAAV2-sTRAIL 的轉(zhuǎn)染及目的基因的表達17
• 2.2.4 rAAV2-sTRAIL 在體外對細胞的凋亡誘導(dǎo)活性17-18
• 2.2.5 統(tǒng)計學處理18
• 2.3 結(jié)果18-24
• 2.3.1 rAAV2-sTRAIL 的構(gòu)建、擴增、純化及鑒定結(jié)果18-20
• 2.3.2 rAAV2-sTRAIL 的轉(zhuǎn)染及目的基因的表達結(jié)果20-22
• 2.3.3 rAAV2-sTRAIL 對 A375 的凋亡誘導(dǎo)作用結(jié)果22-24
• 2.4 討論24-27
• 第3章 結(jié)論27-28
• 致謝28-29
• 參考文獻29-32
• 綜述32-37
• 參考文獻36-37

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：rAAV2-TRAIL的構(gòu)建及對惡性黑色素瘤細胞的凋亡作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：282386