【摘要】：研究目的惡性黑色素瘤（malignant melanoma，MM）是來源于神經嵴的黑色素細胞在多種因素共同作用下形成的惡性腫瘤。惡性黑色素瘤是一種惡性程度非常高但相對較少見的腫瘤，在所有的原發(fā)于皮膚的惡性腫瘤中皮膚惡性黑色素瘤只占4％，但其致死率卻占79％。惡性黑色素瘤患者的發(fā)病年齡多在40歲左右。轉移性MM患者的中位生存期僅為6-8個月,5年生存率在5%以下。傳統(tǒng)的手術、化療、放療三大腫瘤治療方法對于MM的治療效果并不理想，MM的治療被認為是最具挑戰(zhàn)性的惡性腫瘤。1991年Schmidt等發(fā)現(xiàn)了CIK細胞，它是一群增殖效率氋并具有抗腫瘤活性的異質性細胞，在腫瘤微環(huán)境或病毒感染后，通過其表面的自然殺傷細胞受體識別表達MICA和MICB的細胞并進行殺傷，目前被廣為應用的殺傷活性較強的腫瘤生物治療效應細胞，CIK細胞是體外擴增出的以CD3+CD56+、CD3+CD8+為主的異質性細胞群，該細胞群是從外周血、骨髓或臍血中分離出的單個核細胞，在多種細胞因子并存的情況下，經過一定時間培養(yǎng)而獲得的一群免疫活性細胞，能分泌多種細胞因子，具有強大的腫瘤殺傷活性。髓系來源抑制性細胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSC）是骨髓來源的抑制性細胞，是一種異質的細胞群，為未成熟的髓系細胞，多數存在于正常人的骨髓中，正常情況下MDSC會分化為樹突樣細胞和巨噬細胞，而在腫瘤分泌的細胞因子作用下則分化為未成熟的髓樣細胞。MDSC在腫瘤患者中外周血中高表達CD11b和CD33，在惡性腫瘤中發(fā)揮免疫抑制作用。研究表明MDSC主要通過抑制T細胞、B細胞、NK細胞的功能同時可以誘導Treg細胞的產生而產生免疫抑制。通過研究還發(fā)現(xiàn)，MDSC通過抑制T細胞促進腫瘤生長，對靜止T細胞無作用，對激活的T細胞則有抑制作用。MDSC可通過抑制細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)，調節(jié)性T細胞(Regulartory T Cells，Treg)，自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）等多種途徑抑制免疫系統(tǒng)，從而促進腫瘤的生長，導致免疫治療腫瘤的失敗。因此，通過CIK細胞治療逆轉MDSC的抑制作用，重建機體抗腫瘤免疫機制對惡性黑色素瘤的治療將會有至關重要的意義。本實驗通過分析MDSC在惡性黑色素瘤發(fā)病機制的作用及CIK對MDSC、多種細胞因子表達的影響，目的有以下3點：1、觀察CIK細胞治療MM患者的臨床療效；2、分析MDSC與MM患者臨床療效的相關性；3、研究CIK對MM患者外周血MDSC的影響；這可以為MM患者的治療提供新的思路和方法。方法：入組2009.6月-2011.10月就診于鄭州大學附屬腫瘤醫(yī)院（原河南省腫瘤醫(yī)院）生物治療科的復發(fā)、難治性惡性黑色素瘤中國患者43例（治療組），中位年齡56歲（29歲-78歲），除3例患者乙肝表面抗原陽性外，余患者乙肝、、丙肝、艾滋、梅毒均陰性。其中III期患者13例，IV期患者30例，均有可測量病灶，預計生存期≥4個月；Karnofsky評分≥60，血常規(guī)正常（白細胞計數≥4.0×109/L，淋巴細胞計數≥0.8×109/L，血紅蛋白≥100g/L，血小板計數≥100×109/L），心、肺、肝、腎功能正常，無嚴重伴隨疾病。所有入組患者均接受至少4周期CIK細胞治療。此外入組40例健康志愿者（健康對照組），均身體健康，既往無腫瘤相關疾病，近期無外傷、感染性疾病。健康對照組年齡、性別與惡性黑色素瘤組患者相匹配。入組患者和健康志愿者均簽署知情同意書，并獲得本單位倫理委員會批準。具體步驟如下：1、抽取所有入組惡性黑色素瘤患者CIK細胞治療前外周血、健康志愿者外周血以及惡性黑色素瘤患者經過CIK細胞治療至少4周期后的外周血。2、流式細胞儀分別檢測各組MDSC表達量的高低以及細胞因子的表達量的高低。3、計算惡性黑色素瘤患者從隨訪開始至隨訪終止的生存期。4、應用SPSS17.0軟件對所得數據進行統(tǒng)計學分析，具體方法是應用單個樣本t檢驗、獨立樣本t檢驗、kaplan-meier生存分析處理數據，檢驗水準α=0.05，p＜0.05有統(tǒng)計學意義。結果：1、惡性黑色素瘤患者CIK細胞治療前的MDSC（CD11b+CD33++、CD11b+CD33+）水平（7.372±3.4104、51.149±14.1659）顯著高于健康志愿者組（1.05±0.34、13.14±4.99，p＜0.05）。2、惡性黑色素瘤患者經CIK細胞治療后MDSC （CD11b+CD33++、 CD11b+CD33+）水平（4.702±1.8798、42.188±17.0488）與CIK治療前（7.372±3.4104、51.149±14.1659，p＜0.05）比顯著降低，但仍顯著高于健康志愿者組。3、惡性黑色素瘤患者的T、B細胞免疫功能（4.605±4.8968、2.902±9.2897）顯著低于健康志愿者組（6.078±3.7605、7.710±0.8655，p＜0.05），但經CIK細胞治療后患者的T、B細胞的免疫功能顯著提高（6.481±7.2186、7.693±9.5124，p＜0.05），與健康志愿者無明顯差異。4、經CIK細胞治療后的復發(fā)、難治性惡性黑色素瘤患者的mOS是11.8個月，顯著高于相關文獻報道的轉移性惡黑患者中位生存期10.1個月。5、CIK細胞治療前細胞因子（IL-2、IFN-γ）數值（1698.0±4.7、1470±31.7）低于CIK細胞治療后的數值（2460±4.5、1569±34.9，p＜0.05）。結論：1、CIK細胞治療MM臨床療效確切，有望成為復發(fā)、難治性中國MM患者的新的治療方法；2、CIK細胞的療效與MDSC有相關性。3、經CIK治療后的MM患者外周血MDSC水平顯著降低，而T、B細胞的免疫功能顯著提高。
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 撒亞蓮;華映坤;嚴新民;賈玲;納智明;宋建新;;惡性實體瘤患者自體CIK細胞的體外擴增及初步臨床應用[J];實用癌癥雜志;2006年01期

2 柴琴;安東建;;CIK細胞治療晚期惡性腫瘤療效分析[J];實用預防醫(yī)學;2010年12期

本文編號：2792289