【摘要】：背景與目的:黑色素瘤是比較常見的皮膚軟組織惡性腫瘤,近年來發(fā)病率不斷升高。黑色素瘤惡性程度很高,轉移早,預后差。盡管黑色素瘤的免疫治療、靶向治療等均取得了一些進展,但仍存在部分患者無效、腫瘤細胞耐藥、費用高等問題,因此繼續(xù)探索其他的治療方案仍然十分必要。淋巴管轉移是黑色素瘤主要轉移方式,腫瘤周圍及瘤體內(nèi)淋巴管的形成是腫瘤經(jīng)淋巴管轉移的前提。因此,通過抑制腫瘤周圍及瘤體內(nèi)的淋巴管形成,減少腫瘤周圍和瘤體內(nèi)的淋巴管數(shù)量,理論上可以推遲、延緩腫瘤經(jīng)淋巴管轉移,從而延長患者的生存時間。雷帕霉素(又稱為西羅莫司)作為哺乳動物雷帕霉素靶分子(Mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制劑,最初被用作抗腎移植術后的免疫排斥反應。由于mTOR信號通路的作用廣泛,關于雷帕霉素的其他作用也不斷地被發(fā)現(xiàn),其中就包括了抗脈管形成作用。體內(nèi)、體外實驗證實能抑制正常淋巴管形成和某些腫瘤內(nèi)的淋巴管形成。因此,我們設想雷帕霉素也可能抑制黑色素瘤瘤體及其周圍的淋巴管形成,從而成為治療黑色素的有效藥物。本研究通過建立黑色素瘤的裸鼠移植瘤模型,并應用模型進行雷帕霉素干預,觀察移植瘤周圍和瘤體中的淋巴管形成是否受到影響,并探討其影響機制。本研究的目的是為應用雷帕霉素治療黑色素瘤提供實驗依據(jù)。方法:(1)實驗分組:體外培養(yǎng)擴增A375人黑色素瘤細胞,將細胞注入裸鼠背部兩側皮下建立移植瘤模型,2周后形成瘤體。以腹腔注射生理鹽水(NS組)和雷帕霉素分別作為正常對照組和雷帕霉素干預組。干預2周后分別取出裸鼠背部兩側的移植瘤標本。所有標本分為兩部分,一部分用4%甲醛固定、石蠟包埋,用于后續(xù)的H-E染色、常規(guī)免疫組化和免疫熒光染色等;另一部分置于液氮中保存,用于后續(xù)的PCR和Western-blot等檢測。(2)常規(guī)免疫組化、免疫熒光染色觀察移植瘤瘤周及瘤體內(nèi)淋巴管及其數(shù)量的變化。(3)免疫組化染色觀察移植瘤中mTORCl/p70S6K/4EBP1的表達,并行Western Blot檢測mTORCI/p70S6K/p-p70S6K/4EBP1/P-4EBP1及淋巴管形成相關因子和受體VEGF-C/VEGFR-3的表達。(4)實時定量PCR檢測移植瘤中淋巴管形成相關基因VEGF-C/VEGFR-3的表達。結果:(1)H-E染色見移植瘤為典型的黑色素瘤樣病理結構。常規(guī)免疫組化和免疫熒光染色顯示移植瘤瘤周及瘤體內(nèi)均可見LYVE-1(+)淋巴管。(2)免疫組化染色顯示雷帕霉素組移植瘤瘤周及瘤體內(nèi)平均淋巴管密度顯著低于生理鹽水對照組。(3)免疫組化染色及Western Blot檢測提示雷帕霉素組移植瘤內(nèi)非磷酸化mTOR/p70S6K/4EBP1蛋白水平與生理鹽水對照組相比無明顯差異,p-p70S6K/p-4EBP1蛋白水平顯著低于生理鹽水對照組。(4)Western Blot檢測以及實時定量PCR檢測顯示雷帕霉素組移植瘤中VEGF-C/VEGFR-3蛋白及基因表達均明顯低于生理鹽水對照組。結論:雷帕霉素能抑制黑色素瘤的裸鼠移植瘤瘤周以及瘤體內(nèi)的淋巴管形成,降低移植瘤瘤周以及瘤體內(nèi)的淋巴管密度。其可能機制是阻斷mTOR信號通路,進一步抑制VEGF-C/VEGFR-3的表達,從而抑制淋巴管形成。本研究結果可作為應用雷帕霉素治療黑色素瘤的初步實驗依據(jù)。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.5
【圖文】：

接種４周后取出瘤體行病理學觀察，ＨＥ染色下見瘤體內(nèi)黑色素瘤細胞逡逑排列緊密，極性消失，胞漿寬窄不一，核大畸形、深染，異型性明顯，逡逑可見病理性核分裂象；瘤體周圍有完整纖維包膜。（見圖１－２）。逡逑Ａ邐＿邐Ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｕｒｖｅ逡逑？邋

本文編號：2788395