發(fā)布時(shí)間：2020-07-11 04:16

【摘要】：目的 按照傳統(tǒng)的分類(lèi)方法，地霉主要分為白地霉（Geotrichum candidum）、頭地霉（Geotrichum capitatum） 、棒地霉（Geotrichum clavatum）。其中白地霉和頭地霉最為常見(jiàn)。近10年來(lái)有關(guān)地霉的報(bào)道較少。本科于2002年8月在一例膿癬樣地霉病的患者身上分離出一種新型地霉，經(jīng)中科院微生物研究所鑒定為昔維考拉地霉（Geotrichum silvicola）。本菌在1997年新版的國(guó)家菌種目錄中尚無(wú)收錄，是從巴西果蠅身上分離出來(lái)的一種地霉，尚未被正式發(fā)表過(guò)，從人身上分離出本菌是國(guó)內(nèi)、外首次。因此，有關(guān)昔維考拉地霉（Geotrichum silvicola）的形態(tài)學(xué)、營(yíng)養(yǎng)生理學(xué)及其對(duì)人類(lèi)的致病力國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道，僅就其基因?qū)W方面有初步的研究。本研究從形態(tài)學(xué)、營(yíng)養(yǎng)生理學(xué)、分子生物學(xué)等各個(gè)角度對(duì)昔維考拉地霉（Geotrichum silvicola）進(jìn)行初步的研究，并通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)及毛發(fā)受侵試驗(yàn)對(duì)其致病力進(jìn)行進(jìn)一步的探討。為指導(dǎo)昔維考拉地霉（Geotrichum silvicola）感染的診斷與治療提供了臨床依據(jù)，具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。 方法 1真菌培養(yǎng) 將菌落接種于改良沙堡弱培養(yǎng)基上，分別放在27℃、37℃溫箱中，培養(yǎng)3天， 然后觀察菌落生長(zhǎng)情況。直接鏡檢：挑取少許菌落放于載玻片上，加10%KOH并放置蓋玻片，在低倍、高倍鏡下仔細(xì)觀察菌落形態(tài)。掃描 WP=4 電鏡觀察：將培養(yǎng)3~10天的菌落放于2.5%的戊二醛中固定，掃描電鏡觀察。 2毛發(fā)受侵試驗(yàn) 將該菌分別接種于改良沙堡弱固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中，采用3個(gè)不同年齡組的健康人的毛發(fā)，高壓滅菌后置于所種菌上方。每1周觀察2次，在光鏡、電鏡下觀察毛發(fā)受侵情況。將全部數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后得出結(jié)論。用SAS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件組間比較的t檢驗(yàn)及方差分析法。 3動(dòng)物試驗(yàn) 選用豚鼠60只。隨機(jī)抽取30只豚鼠用環(huán)磷酰胺800mg/kg腹腔內(nèi)注射，地塞米松0.5mg/只肌注,另外30只未經(jīng)處理。3天后,對(duì)兩組中的豚鼠的一側(cè)背部分別用擦皮法和皮下注射法接種菌懸液（濃度為2×106CFU），另外一側(cè)接種0.9%的生理鹽水做對(duì)照組，10天后觀察結(jié)果。將全部數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后得出結(jié)論。各試驗(yàn)組計(jì)量資料用SAS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件組間比較的t檢驗(yàn)。 4營(yíng)養(yǎng)生理學(xué) 將菌落接種于改良沙氏培養(yǎng)基上，3天后配置菌懸液，利用法國(guó)生物梅里埃公司的API20CAUX試劑盒檢測(cè),美國(guó)德靈公司的Microscan WalkAway-40全自動(dòng)微生物分析儀分析。 5 DNA序列分析 對(duì)菌株26SDNAD1/D2區(qū)序列分析經(jīng)正反鏈驗(yàn)證，確定了534個(gè)堿基位點(diǎn)，通過(guò)GenBank/EMBL/DDBJ/PDB核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源序列檢索。 6溫度試驗(yàn) 將受試菌株接種在沙堡弱固體培養(yǎng)基上，分別放在27℃、37℃、42℃溫箱中，7天后觀察生長(zhǎng)情況。然后，將27℃溫箱中的菌株放在37℃溫箱中，將37℃溫箱中的菌株放在27℃溫箱中， 3天后再觀察結(jié)果。 WP=5 7體外藥敏試驗(yàn) 使用天津金章醫(yī)用新技術(shù)研究所提供的酵母樣真菌最低抑菌濃度（MIC）藥敏試劑盒。將受試菌株在用沙堡弱培養(yǎng)基傳代純培養(yǎng)，制成混懸液。用麥?zhǔn)?.5號(hào)管進(jìn)行比濁至相同濁度。接種后，放到35℃溫箱中，孵育24h、48h觀察結(jié)果。 結(jié)果 1形態(tài)學(xué) 真菌培養(yǎng) 培養(yǎng)3天后均見(jiàn)同一菌落生長(zhǎng)，27℃培養(yǎng)2-3天，長(zhǎng)出表面平坦，中間有皺褶的，濕潤(rùn)的乳白色酵母樣菌落，有粘性。10天后菌落變成乳黃色，表面長(zhǎng)出絨毛。37℃培養(yǎng)始終為乳白色至乳黃色、濕潤(rùn)的酵母樣菌落。挑取菌落涂片鏡檢可見(jiàn)大量矩形、桶型、橢圓型關(guān)節(jié)孢子，并可見(jiàn)關(guān)節(jié)孢子的一側(cè)長(zhǎng)出芽管。小分生孢子呈圓形，出芽或不出芽，可見(jiàn)厚壁孢子。掃描電鏡觀察：可見(jiàn)成鏈的關(guān)節(jié)孢子，呈矩形、桶型、橢圓型或圓形，關(guān)節(jié)孢子之間不相連；圓形的芽生孢子及大量菌絲。2 毛發(fā)受侵試驗(yàn)：2周后與菌落接觸毛發(fā)的表面可見(jiàn)乳白色乳酪樣物黏附，4周后鏡檢發(fā)現(xiàn)在毛發(fā)表面有大量關(guān)節(jié)孢子及圓形孢子。3個(gè)月后光鏡下可見(jiàn)毛發(fā)表面有些殘缺。掃描電鏡示毛發(fā)被大量孢子及菌絲附著、包繞，可見(jiàn)菌絲穿入毛發(fā)，毛小皮有破壞現(xiàn)象，毛發(fā)表面凹凸不平。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后，各組差別有顯著性P〈0.05。以改良沙氏固體培養(yǎng)基上比液體培養(yǎng)基感染現(xiàn)象出現(xiàn)早。27℃生長(zhǎng)的菌落比37℃對(duì)毛發(fā)的感染時(shí)間早。年齡越小者的毛發(fā)越早被感染。3動(dòng)物試驗(yàn) 10天后觀察發(fā)現(xiàn)，用皮下注射法接種菌懸液的豚鼠，注射部位均有質(zhì)地較硬的結(jié)節(jié)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后，兩組差別有顯著性P〈0.05。其中經(jīng)免疫抑制的豚鼠的結(jié)節(jié)大且出現(xiàn)早,未經(jīng)免疫抑制的豚鼠的 WP=6 結(jié)節(jié)較小且出現(xiàn)晚,而對(duì)照組無(wú)結(jié)節(jié)用擦皮法接種菌懸液的豚鼠，接種處可見(jiàn)潮紅、腫脹、滲出、結(jié)痂，而對(duì)照組無(wú)皮損。取結(jié)節(jié)做病理，蘇木精-伊紅染色時(shí)真皮可見(jiàn)慢性化膿性膿腫，其中可見(jiàn)圓形孢子及關(guān)節(jié)孢子和菌絲。PAS染色可見(jiàn)菌絲、關(guān)節(jié)孢子及圓形孢子。取經(jīng)免疫抑制的豚鼠擦皮法形成的皮損做病理，PAS染色均可見(jiàn)角質(zhì)層有大小不一的關(guān)節(jié)孢子及菌絲。取結(jié)節(jié)中的膿液直接涂片PAS染色可見(jiàn)菌絲及孢子。未經(jīng)免疫抑制的豚鼠PAS染色均可見(jiàn)角質(zhì)層有大小不一的關(guān)節(jié)孢子。而對(duì)照組無(wú)異常，未見(jiàn)菌體。4營(yíng)養(yǎng)生理學(xué) 對(duì)照法國(guó)生物梅里埃公司的API20CAUX編碼冊(cè)，提示該菌屬于地霉菌。其中葡萄糖 、甘油、阿拉伯糖、木糖醇均為陽(yáng)性；2-酮基-葡萄糖酸鹽、木糖、阿東糖醇、半乳糖、肌醇、山梨醇、( -
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R756

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本文編號(hào)：2749945