【摘要】： 目的： 通過分析銀屑病組與健康對(duì)照組外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Tr細(xì)胞)數(shù)量及雷公藤甲素(Triptolide，Tri)對(duì)其的影響，以及Tri與環(huán)孢菌素A(Cyclosporin A，CsA)對(duì)多克隆刺激劑體外活化T細(xì)胞CD69表達(dá)及細(xì)胞周期影響的比較性研究，探討Tri治療銀屑病的作用機(jī)制，以期為Tri的臨床應(yīng)用提供更深入的理論依據(jù)。 方法： 分別取銀屑病組和健康對(duì)照組肝素抗凝靜脈血，新鮮血標(biāo)本或加Tri體外全血培養(yǎng)72h后三色免疫熒光標(biāo)記測(cè)定Tr細(xì)胞；Tri或CsA與外周血預(yù)孵30min后，加入多克隆刺激劑PDB+Ionomycin(Ion)或PHA培養(yǎng)，分別于4h、24h和72h收獲細(xì)胞。培養(yǎng)4h和24h收獲的細(xì)胞用抗CD3和抗CD69單抗進(jìn)行雙色免疫熒光標(biāo)記，以檢測(cè)T細(xì)胞的活化；培養(yǎng)72h收獲的細(xì)胞以抗CD3單抗標(biāo)記并裂解紅細(xì)胞，再以PI染色分析Tri與CsA對(duì)T細(xì)胞細(xì)胞周期的影響及Tri對(duì)T細(xì)胞的細(xì)胞毒性。全部樣品以流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)和分析。 結(jié)果： 1 銀屑病患者外周血Tr細(xì)胞的數(shù)量：銀屑病組新鮮外周血CD4~+CD25~+T細(xì)胞和CD8~+CD28~-T細(xì)胞占總T細(xì)胞的百分率分別為2.30±0.35和38.85±1.89，均顯著低于健康對(duì)照組(百分率分別為5.67±0.44和53.30±2.01，P＜0.01)。銀屑病患者及健康對(duì)照以Tri(1ug／mL)處理72h組，外周血CD4~+CD25~+T細(xì)胞占T細(xì) 暨南大學(xué)頎士學(xué)位論文（2003）雷公藤甲素對(duì)銀屑病思者外周血 T細(xì)胞活性的影響 胞的百分率分別為2．18士0．32和5．58士0．45，未處理組的百分率分別為2．ZI士0．41 和 5．64士 0．56（P＞0．05），而兩者以 Ti處理 72h組外周血 CDS”CD28”T細(xì)胞占 T 細(xì)胞的百分率分別為 37．95士 1．42和 sl．75土 1．08，與兩者未處理組（百分率分別 為38．34士l．75和52．20士l．56，P＞0．05）差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 h對(duì)多克隆刺激劑體外活化銀屑病患者外周血T細(xì)胞CD69表達(dá)的影響： Ti能夠顯著下調(diào) PDBqon活化 T細(xì)胞 CD69的表達(dá)率，當(dāng) Ti的濃度從 sng／InL、 40n狙、20（）up升高至luglmL時(shí)，PDB刊on活化4h銀屑病組T細(xì)胞CD69 表達(dá)百分率依次為 gi．88士2．14、72．gi士2．65、35．34士l．50和 11．08士l．78，而健康對(duì) 照組分別為 93．78土l．12、73．10士l．sl、36．40士l．32和 10．32土卜M（P＞（．05）。在 相同濃度梯度Ti的作用下，PHA活化24h銀屑病T細(xì)胞CD69表達(dá)的百分率分 別為57．59土l．56、30．06士l．41、9．sl士l．12及6．35上l．04，健康對(duì)照組則分別為 58．72土l．89、31．27士l．16、10．19士0．93及 6．65士l．13（P＞0．05）。且 Ti對(duì)處于靜 息狀態(tài)的T細(xì)胞CD69的表達(dá)無抑制效應(yīng)，此外，CsA對(duì)兩組不同刺激劑體外活 化T細(xì)胞CD69的表達(dá)均無影響。 3Th對(duì)多克隆刺激劑體外活化銀屑病患者外周血T細(xì)胞細(xì)胞周期的影響：經(jīng) PDB＋I(xiàn)on刺激后，銀屑病組與健康對(duì)照組分別有 18．11％和 18．30％的外周血 T細(xì) 胞進(jìn)入S＋G。IM期，而Ti及CsA能夠呈劑量依賴性阻止多克隆刺激劑活化T細(xì) 胞的增殖，但抑制效應(yīng)未顯示細(xì)胞周期特異性。細(xì)胞活性分析顯示Tri對(duì)T細(xì)胞 無明顯細(xì)胞毒作用。 結(jié)論： 銀屑病患者存在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量的下降；本實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)的Ti對(duì)多克 隆刺激劑體外活化T細(xì)胞CD69的表達(dá)有明顯抑制作用，并能明顯阻止多克隆刺 激劑體外活化的T細(xì)胞進(jìn)入S期和GZfM期。這些結(jié)果提示Ti可能通過干擾早 期活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而抑制T細(xì)胞的活化和增殖，這可能是其治療銀屑病的細(xì)胞 免疫學(xué)基礎(chǔ)。本研究結(jié)果對(duì)雷公藤甲素及以其為主要活性成分的雷公藤制劑在銀 屑病的臨床應(yīng)用上具有一定的指導(dǎo)意義。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R758.63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2745574