【摘要】： 前言 結合珠蛋白(haptoglobin，Hp)屬α_2-唾液酸糖蛋白，是急性期蛋白之一，主要由肝臟合成，也可在脂肪細胞、皮膚、脾、肌肉、肺內等合成，廣泛分布于人及其他哺乳動物體液中。Hp在急性溶血時，可與血紅蛋白結合，減少鐵的流失，并保護腎臟，在抗感染、抗炎癥、損傷組織修復、抗氧化及維持內環(huán)境穩(wěn)定的過程中亦發(fā)揮重要作用。據(jù)報道Hp可以抑制培養(yǎng)狀態(tài)下表皮內朗格漢斯細胞(LC)轉變?yōu)榭乖f呈細胞。我科用原位雜交技術證實：角質形成細胞等上皮來源的細胞是正常人皮膚組織中表達Hp mRNA的主要細胞，同時在HaCaT細胞中也發(fā)現(xiàn)有Hp mRNA及蛋白質表達。紫外線可上調HaCaT細胞Hp mRNA表達，并且隨照射時間，Hp mRNA表達呈時相變化。然而紫外線照射HaCaT細胞后Hp的蛋白水平表達情況尚無相關報道。本研究通過免疫組化方法，探討紫外線對HaCaT細胞Hp表達的影響。 材料和方法 一、實驗材料 1、HaCaT細胞：2000年10月由何春滌教授從德國the Free University of Berlin引進并凍存于液氮中； 2、主要試劑和物品：鼠抗人Hp mAb，生物素標記的羊抗小鼠IgG，辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素； 3、主要儀器：細胞培養(yǎng)箱，SS-03紫外線光療儀。 二、實驗方法 1、365nm UVA 8J／cm~2、311nm UVB 80mJ／cm~2分別照射HaCaT細胞。照射后6小時、24小時、48小時收獲細胞(每24小時換新鮮培養(yǎng)液)； 2、用0.25％胰蛋白酶液將培養(yǎng)的HaCaT細胞制成細胞懸液，并用細胞離心機制成細胞甩片； 3、用抗Hp mAb、生物素標記的羊抗小鼠IgG及辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素檢測HaCaT細胞中的Hp。 結果 365nmUVA、311nmUVB照射后6小時和48小時的HaCaT細胞Hp陽性。正常對照HaCaT細胞和365nmUVA、311nmUVB照射后24小時的HaCaT細胞始終未檢測到Hp陽性。 結論 365nmUVA、311nmUVB均可使HaCaT細胞Hp表達水平升高，且具有時相性。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R751
【圖文】：

黔汽圖2， 3llnmj.巨..口.‘~UvB照射后6小時的HaCaT細胞胞核中Hp陽性(放大倍數(shù)400X)圖3，紫外線照射后6小時，相同時段收集的對照組HaCaT細胞胞核中Hp陰性(放大倍數(shù)40Ox)

紫外線照射后6小時，相同時段收集的對照組HaCaT細胞胞核中Hp陰性(放大倍數(shù)40Ox)

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